生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞及血液循环影响的实验研究

于博 董小鹏

·临床研究·

生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞及血液循环影响的实验研究

于博1董小鹏2

目的探讨生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞及血液循环的影响。方法96只大鼠被随机分为3组（A组、B组、C组），每组各32只，A、B组均制成深II度烧伤动物模型，A组伤后均给予生肌玉红膏换药，B组给予凡士林换药，C组为正常对照组，比较3组大鼠烧伤后不同时间点（7 d、14 d、21 d、28 d）成纤维细胞增殖指数与成纤维细胞数量、创面微血管数等相关指标的变化差异。结果A、B组大鼠烧伤换药后不同时间点A、B组成纤维细胞增殖指数升高、成纤维细胞数量增多、新生微血管数量增加，A组变化更为明显（P ＜0．05）。结论生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞的增殖及血液循环重建有明显促进作用。

生肌玉红膏；深Ⅱ度烧伤；大鼠；成纤维细胞；血液循环

本实验旨为验证、探索生肌玉红膏的临床疗效与作用机制，采用大鼠深Ⅱ度烧伤动物模型，用以观察生肌玉红膏对烧伤创面的成纤维细胞及血液循环的影响，以期为临床用药提供更为充分的实验依据，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物与试剂 （1）生肌玉红膏：由甘肃中医学院附属医院药剂科提供；（2）白凡士林膏：南昌白云药业有限公司生产；（3）生理盐水，为自行配制；（4）RPMI1640细胞培养液，由Gibico公司生产；（5）胎牛血清，由Gibico公司生产；（6）40 ml/kg复方乳酸钠林格氏液，为自行配制；（7）戊巴比妥钠，为美国Sigma公司生产。

1.1.2 实验动物 选取健康清洁级成年SD大鼠96只，雌雄各48只，体质量为（225.6±17.0）g，混合饲料单笼饲养。

1.1.3 器材 千分之一电子天平、生化培养箱、流式细胞仪、酒精灯、玻璃瓶、石棉网、铁架台等，均由天津市生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 动物模型建立与换药 A、B组大鼠均制成深II度烧伤动物模型，制作方法如下：剃刀剃去背毛，腹腔内给予3%戊巴比妥钠（0.15 ml/100 g）进行麻醉，其后以玻璃瓶装适量的蒸馏水放在垫有石棉网的铁架台之上，下方以酒精灯加热煮沸，玻璃瓶盖上预开1.5 cm×1.5 cm口，麻醉后大鼠脱毛部位放在玻璃瓶盖开口处紧贴烫8 s（以秒表计时），制成深Ⅱ度烧伤模型（均用病理切片染色诊断证实），再向大鼠腹腔注射40 ml/kg的复方乳酸钠林格氏液。A组伤处涂以生肌玉红膏，B组涂以白凡士林膏，换药1次/天，连续28天。

1.2.2 成纤维细胞原代培养 用RPMI1640细胞培养液、胎牛血清配成20%胎牛血清完全培养液，参照朱旭东[1]研究的方法以组织块法行成纤维细胞原代培养，再选取第4～8代细胞进行实验研究。

1.2.3 微血管数测定 造模后7 d、14 d、21 d、28 d分别取创面中心肉芽组织，进行石蜡固定，肉芽组织平行方向连续切片，进行CD34免疫组化法标记毛细血管，取切片中心及周围随机5个视野，采用MPAIS200彩色病理图文分析系统进行计数。

1.2.4 成纤维细胞数量测定 用5 g/L的胰酶对成纤维细胞进行消化1 min，将其制备成为单细胞悬液，控制其细胞浓度在3.5×104个/ml，使用96孔板接种（每孔7 000个），再用50 ml/L CO2孵育至细胞贴壁伸展，之后换条件培养液，取一板细胞再孵育4 h后将上清液弃置，每孔加200μl二甲基亚砜振荡10 min，再在570 nm 波长处测得吸光度A值（A570值），以此值作为成纤维细胞数量的评价指标，值越高表明成纤维细胞数量越多。

1.2.5 成纤维细胞增殖指数测定 细胞悬液制作、培养同上述步骤，孵育后分别在不同时间点收集细胞离心并用750 ml/L乙醇进行悬浮，再加入碘化丙啶直到终质量浓度为50 ng/ml，避光染色10 min后用流式细胞仪进行细胞增殖指数（prolif erative index，PI）的检测，此数值越高表明成纤维细胞增殖越活跃。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行分析处理，计量资料以（均数±标准差）表示，采用t检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

A、B组大鼠烧伤换药后不同时间点A、B组成纤维细胞增殖指数升高、成纤维细胞数量增多、新生微血管数量增加，A组变化更为明显（P＜0.05）。详见表1～表3。

表1 三组大鼠造模后不同时间新生微血管数指标变化（n=32，±s，条）

表1 三组大鼠造模后不同时间新生微血管数指标变化（n=32，±s，条）

注：与A组比较，＊P＜0.05

组别 7 d 1 4 d 2 1 d 2 8 d A 1 5 . 0 1 ± 1 . 4 2 2 0 . 0 6 ± 1 . 6 1 2 3 . 3 5 ± 2 . 4 3 2 4 . 8 2 ± 2 . 6 5 B 8 . 7 5 ± 1 . 2 2 ＊ 9 . 3 7 ± 1 . 3 3 ＊ 1 0 . 5 4 ± 1 . 0 9 ＊ 1 1 . 2 5 ± 1 . 5 2 ＊C 0 ＊ 0 ＊ 0 ＊ 0 ＊

表2 三组大鼠造模后不同时间PI值的变化（n=32，±s，%）

表2 三组大鼠造模后不同时间PI值的变化（n=32，±s，%）

组别 7 d 14 d 21 d 28 d A 29.31±0.71 31.28±0.53 31.82±1.25 32.62±0.71 B 26.12±1.21＊ 27.53±1.12＊ 27.72±0.83＊ 27.20±1.11＊C 25.91±1.35＊ 27.28±0.70＊ 27.02±1.58＊ 26.85±0.81＊

表3 三组大鼠造模后不同时间A570值的变化（n=32，±s）

表3 三组大鼠造模后不同时间A570值的变化（n=32，±s）

组别 7 d 14 d 21 d 28 d A 0.34±0.01 0.36±0.02 0.38±0.02 0.37±0.03 B 0.31±0.02＊ 0.32±0.01＊ 0.32±0.03＊ 0.33±0.036＊C 0.28±0.03＊ 0.30±0.02＊ 0.31±0.05＊ 0.32±0.02＊

3 讨论

局部良好的血供对于烧伤创面预后的改善能起到关键性的作用，实践证明通过改善创伤局部微循环，从而促进创面愈合，是临床行之有效的方法之一[2]。成纤维细胞为构成疏松结缔组织的主要细胞，具有功能活动旺盛的特点，细胞内具有明显的蛋白质合成及分泌等活动，其可在一定条件下实现与纤维细胞互相转化，对于烧伤导致的不同程度的细胞变性、坏死及组织缺损修复都有着十分重要的作用[3-5]。

生肌玉红膏原载于明代陈实功《外科正宗》，其主要药物包含当归、白芷、紫草、血竭、甘草、轻粉等，为中医外科常用收敛药[6-8]。本研究通过建立深Ⅱ度烧伤大鼠模型，旨在分析生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞及血液循环的影响。研究结果表明，大鼠烧伤换药后不同时间点A、B组成纤维细胞增殖指数升高、成纤维细胞数量增多、新生微血管数量增加，A组变化更为明显，证明生肌玉红膏对深Ⅱ度烧伤模型大鼠创面成纤维细胞的增殖及血液循环重建有明显促进作用，值得临床参考借鉴。

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[2]胡旭明． 深Ⅱ度烧伤创面处理方法的回顾及改善创面微循环的初步临床研究[J]． 现代诊断与治疗，2014，25（8）：1838-1839．

[3]胡刚，冯捷，金岩，等． 人循环成纤维细胞参与皮肤创伤修复的作用[C]// 2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编．2010全国中西医结合皮肤性病学术会议． 上海：中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会，2010．

[4]靳波，徐盈斌，刘旭盛． 酸性成纤维细胞生长因子生物学特性及其应用研究进展[J]． 中华损伤与修复杂志：电子版，2010，5（1）：55-57．

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[8]樊玲丽，曹鲁梅，韩晓玲，等．生肌玉红明胶海绵治疗Ⅲ期压疮疗效观察[J]．护理研究，2013，27（21）：2231-2232．

The Influence of Ointment of Shengji Yuhong to Fibroblast and Blood Circulation of Deep II-degree Burn Rats’ Model

YU Bo1DONG Xiaopeng21 Department of General Surgery, The Affiliated Hospital of Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000, China, 2 School of Clinical Medicine, Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000, China

ObjectiveTo explore the efect of ointment of Shengji Yuhong to fibroblast and blood circulation of deep II-degree burn rats’ model.Methods96 rats were randomly divided into three groups (A group, B group, C group) for 32 rats. A group and B group was taken with deep II-degree burn rats’ model. A group was taken ointment of Shengji Yuhong, B group for vaseline. C group was control group. The proliferation index of fbroblast, the numbers of fbroblast and the number of micrangium in 7 d, 14 d, 21 d and 28 d were compared.ResultsIn A group and B group, the proliferation index of fbroblast, the numbers of fbroblast and the number of micrangium increased. The more remarkable change was in A group (P＜0.05).ConclusionOintment of Shengji Yuhong can obviously promote the fibroblast proliferation and blood supply reconstruction for deep II-degree burn rats.

Ointment of Shengji Yuhong, Deep II-degree burn, Rats, Fibroblast, Blood circulation

R285．5

A

1674-9308（2016）35-0155-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2016．35．086

国家自然科学基金项目（81260543）

1 甘肃中医药大学附属医院普外科，甘肃 兰州 730000；2甘肃中医药大学临床医学院，甘肃 兰州 730000