Galectin-3、Cytokeratin-19在甲状腺良、恶性肿瘤中的表达
2015-03-02王一凤,邓莅霏,廖兵
·经验交流·
Galectin-3、Cytokeratin-19在甲状腺良、恶性肿瘤中的表达
王一凤邓莅霏廖兵
作者单位：330029 江西省肿瘤医院
关键词：甲状腺肿瘤；半乳糖苷结合蛋白-3；低分子量角蛋白-19
甲状腺肿瘤是作为常见的内分泌腺肿瘤，在总人群中的发病率为6%～9%，大部分为良性，只有约7%为恶性。甲状腺癌的术前诊断现在主要有病史和体格检查，还有颈部B超、颈部CT平扫和I131同位素检查，但这些诊断手段对甲状腺良、恶性肿瘤的确诊特异性均不高。本文对甲状腺肿瘤进行术前细胞学检查(fine needle aspiration，FNA),并采用免疫组化的方法，联合检测甲状腺肿瘤标志物细胞角蛋白19(Cytokeratin19)和β半乳糖苷结合蛋白(Galectin-3)，从而鉴别甲状腺结节的良、恶性，为临床的进一步治疗提供有力的依据。
1材料和方法
1.1临床资料
选取2008年7月-2012年6月在江西省肿瘤医院头颈外科住院拟行甲状腺肿瘤手术切除的患者88例(男性26例，女性62例)。术前均对这些患者进行甲状腺细胞学检查，CK-19、Gal-3免疫组化染色，细胞涂片巴氏染色。术后均对甲状腺肿瘤行常规病理检查。
1.2方法
1.2.1细胞涂片制备和免疫组化染色患者取坐位，上身垂直颈部放松，由于甲状腺易出血，用6号针头进针后保持1 ml左右的负压来回提插3～4次。保证常规涂片有2张，一张行快速染色，另一张立即用95%的酒精湿固定行巴氏染色。我们根据细胞核异形性将细胞分为7级，级别越高，恶性程度越高。另取细胞涂片鼠抗CK-19、Gal-3(1∶50，美国Antibody diagnostic公司)孵育后，加辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(1∶50，美国Antibody diagnostic公司)，DNA显色。每次实验均设立不加一抗的阴性对照组。结果判断：2种染色均以细胞质内出现棕黄色细胞颗粒为阳性，CK-19可有明显细胞膜着色，Gal-3部分有细胞核着色；按阳性细胞所占百分比并参考着色强度确定分级：无明显阳性细胞为阴性(-)，阳性细胞数<25%为弱阳性(+)，阳性细胞数25%～50%为中度阳性(2+)，阳性细胞数≥50为强阳性(3+)。
1.2.2灵敏度和特异度的计算我们将切除标本以10%甲醛溶液固定，常规组织处理，包埋切片，HE染色，形态学观察。参照WHO分类标准及《肿瘤组织病理诊断》，由我院病理科医师完成。以甲状腺肿瘤术后病理为诊断肿瘤良、恶性的金标准，比较CK-19、Gal-3在良恶性肿瘤表达中的不同，并计算普通细胞涂片、普通细胞涂片结合CK-19、Gal-3免疫组化染色诊断良恶性肿瘤的敏感度和特异度。灵敏度=真阳性数/(真阳性数+假阴性数)×100%。特异度=真阴性数/(真阴性数+假阳性数)×100%。
1.3统计学方法
采用成组的Wilcoxon 秩和检验分析不同组间蛋白表达差异。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1常规甲状腺细胞病理诊断与术后病理诊断结果比较
88例患者术后病理显示：65例良性甲状腺肿瘤(结节性甲状腺肿伴囊性变36例，腺瘤18例，桥本氏病11例)、23例甲状腺乳头状癌。甲状腺细胞学标本在鉴别结节良性肿瘤的灵敏度为74%(17/23)，特异度为94%(61/65)，见表1。
表1 细胞病理诊断结果与组织病理诊断结果比较/例
2.2Gal-3 在甲状腺良、恶性病变中的表达
Gal-3 在甲状腺良性病变中多数表达为弱阳性或阴性，仅2例为中度阳性表达；乳头状癌病例22例为强阳性表达。在甲状腺乳头状癌和良性病变中阳性率分别为96%和3%；轻、中度表达阳性率在上述良、恶性病变分别为6%和4%。两者在阳性强度上和阳性率的差异上均有统计学差异(P<0.01)。见表2。
2.3CK-19在甲状腺良、恶性病变中的表达
CK-19 在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤及桥本氏甲状腺炎组织中大多数为阴性或者弱阳性表达，而乳头状癌病例则均为强阳性或中等表达，尤其是微小浸润性乳头状癌也表现为明显阳性，染色清晰。CK-19在良性甲状腺病变(结甲+桥本氏病+腺瘤)中的阳性率，中、强度表达率分别为15%和6%，乳头状癌则分别为30%和70%,阳性率和阳性强度上两者差异均有统计学意义(P<0.01)。见表2。
表2 甲状腺不同病变CK-19、Gal-3表达/例
3讨论
在过去20年中，甲状腺肿瘤细胞学检查已成为甲状腺肿瘤诊断的常规检查。我们可以制作细胞涂片标本，通过检测肿瘤细胞学的物异性，以明确肿瘤性质。FNA的敏感性和特异性分别为 47%～96%、74%～99%，穿刺医生的技术和细胞室医师制片、读片水平等均会影响其变异度。而且，细胞学对甲状腺滤泡样增生的诊断仍较为模糊，从而导致了部分不必手术的患者接受手术治疗。近年来，分子生物学技术和免疫组化技术被人们广泛运用到FNA，通过对细胞涂片肿瘤标志物 (如Galectin-3、CK-19、CD44v6、CK-19和RET等)的检测，达到鉴别肿瘤良恶性的目的，从而提高诊断效率。
在我们以往的研究中，Galectin-3在甲状腺恶性肿瘤中的表达显著高于甲状腺正常组织和良性病变[1]。Galectin-3即半乳糖苷结合蛋白，是植物凝素中的一组。它能够参与细胞与间质之间的炎症反应、黏附、免疫调节和细胞生长，细胞凋亡以及肿瘤细胞转移及浸润和mRNA 前体的剪切等，且Galectin-3能够参与多种细胞功能，在上皮细胞和免疫细胞中表达，特别是在mRNA剪接过程中发挥重要作用。有研究证明，无论是在mRNA或者是蛋白水平，Galectin-3在滤泡起源的甲状腺乳头状癌均特征性的表达。Saggiorato等[2]分析了23例甲状腺乳头状癌和54例滤泡性腺瘤的细胞学标本和术后病理标本，免疫组化结果均显示Gal-3免疫反应在所有乳头状癌术后病理标本中均为阳性，在对照的细胞学标本中阳性则为16/17。所以认为术前诊断甲状腺乳头状癌Gal-3是一种可靠的分子标记物，能提高细胞学诊断的准确性。
CK-19是一种低分子量角蛋白，可用于甲状腺良恶性肿瘤的鉴别诊断。Baloch等[3]认为CK-19对鉴别其他滤泡良性病变和滤泡型乳头状癌有明显的区别作用。我们的研究提示CK-19在甲状腺良性病变中多为阴性或弱阳性表达(92%)，而在乳头状癌中则都是中、强阳性表达(94%)，由此可以说明CK-19阳性表达是滤泡细胞增生恶变的重要标志，可以作为鉴别甲状腺良、恶性病变的主要指标，尤其是对甲状腺乳头状癌的诊断具有重要参考价值。
我们将免疫组化技术运用于甲状腺肿瘤细胞学穿刺标本，发现甲状腺恶性肿瘤有肿瘤标志物Galectin-3、CK-19表达，其表达要远远高于良性病变。与普通的细胞涂片相比，独立检测Galectin-3、CK-19可以大大提高诊断甲状腺良恶性病变的准确率，其中Galectin-3的敏感性佳。
我们的研究结果与国内外的一些研究相近。王丽华等在甲状腺新鲜标本中行细胞学检查，他们检测Galectin-3和CD44v6在甲状腺新鲜标本中的表达，比较其与普通细胞涂片在诊断甲状腺结节良恶性的敏感性和特异性，揭示肿瘤标志物阳性表达可提高诊断的准确性[4]。有学者也发现，联合检测Galectin-3、CK-19能够有效地提高疑难FNA诊断水平，能够有效鉴别甲状腺结节的良恶性[5]。
综上所述，术前行甲状腺细胞学穿刺普通细胞涂片结合Galectin-3、CK-19免疫组化检查，能够显著提高甲状腺结节良恶性诊断的敏感度和特异度。
参考文献
[1]杜馥曼，杨玉芝，冯琨，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲状腺癌中的表达及临床价值〔J〕.标记免疫分析与临床，2010，17(2):86-88.
[2]Saggiorato E,Cappia S,De GillIi P,et al.Galectin-3 as a presurgical immunocytodiagnostic marker of minimally invasive follicular thyroid carcinoma〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2001,86(11):5152-5158.
[3]Baloch ZW,Abraham S,Roberts S,et al.Differential expression of cytokeratins infollicular variant of papillary carcinoma:an immunohistochemical study and its diagnosticutility 〔J〕.Hum Pathol,1999,30 (10):1166-1171.
[4]王丽华，赵永桔，王晓颖，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲状腺细针穿刺标本上的表达及意义〔J〕.上海医学，2006，29(11):785-788.
[5]Rossi ED，Raffaelli M，Minimo C，et al.Immunocytochemical evaluation of thyroid neoplasms on thin-layer smears from fine-needle aspiration biopsies〔J〕.Cancer，2005，105(2):87-95.
(编辑：甘艳)
(收稿日期2014-11-17修回日期 2015-01-10)
文章编号：1001-5930(2015)04-0623-02
中图分类号：R736.1
文献标识码：B
DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.048
通讯作者：廖兵
