B23和Ki67与宫颈癌患者预后的关系探讨*

王銮虹， 李俊东

(1.汕头大学医学院附属肿瘤医院妇瘤科， 广东 汕头 515031 2.中山大学肿瘤防治中心妇科，广东 广州 510060)

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤。寻找能提示肿瘤治疗效果的指标具有重要意义。目前国内外尚无B23在宫颈癌中的表达及其与宫颈癌预后关系的相关研究报道。我们采用免疫组化SP方法检测细胞增殖活性相关的指标B23和Ki67在宫颈癌中的表达，探讨两者的表达与宫颈癌患者生存率的关系，为宫颈癌治疗效果和预后提供有效的监测指标。

1 材料与方法

1.1 标本资料:104例宫颈鳞癌标本蜡块进行4m厚连续切片做免疫组化染色。对照组为同期因良性病变手术切除子宫的正常宫颈组织存档组织蜡块20例。所有病例均经随访，有完整、详细的临床病理资料及随访结果。复发诊断根据临床、影像学检查结果和(或)病理学诊断，并参考血清学检查的结果。截至末次随访时间，104例患者共23例复发，复发率为22.1%。

1.2 方法:B23鼠抗人单克隆抗体及Ki67鼠抗人单克隆抗体为北京中杉金桥生物技术公司产品。免疫组化染色程序严格按S－P试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理:采用SPSS15.0软件包进行统计分析。计数资料用卡方检验或精确概率法检验;等级资料用秩和检验;等级相关用Spearman等级相关分析;用寿命表法计算生存率，用Kaplan－meimer法绘制生存曲线，用Log－Rank法检验。P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 B23、Ki67在正常宫颈组织和宫颈鳞癌中的表达:B23、Ki67阳性表达均定位于细胞核，呈棕黄色颗粒，细胞膜、细胞浆不染色。20例正常宫颈组织中B23阳性率为30.0%(6/20)，104例宫颈癌中阳性率为76.9%(80/104)，后者高于前者，两者差异具有统计学意义(P＜0.001)。20例正常宫颈组织中Ki67阳性率为15.0%(3/20)，104例宫颈癌中阳性率为44.2%(46/104)，后者高于前者，两者差异具有统计学意义(P=0.014)。

2.2 宫颈鳞癌组织中B23、Ki67表达之间的相关性:Spearman等级相关分析显示:B23与Ki67的表达存在正相关关系，相关系数为0.212(P=0.031)。

2.3 B23及Ki67表达与预后的关系:B23阴性、阳性的患者5年无进展生存率分别为95.8%、72.2%，差异有显著性(P=0.021)(见图1A)。B23阴性、阳性的患者5年生存率分别为91.7%、80.9%，差异无统计学意义(P=0.186)(见图1B)。Ki67阴性、阳性的患者5年无进展生存率分别为89.5%、62.7%，差异有显著性(P=0.001)(见图1C)。Ki67阴性、阳性的患者5年生存率分别为94.7%、69.2%，差异有显著性(P=0.001)(见图 1D)。

图1 A，B23表达阴性和阳性患者的无进展生存曲线;B，B23表达阴性和阳性患者的总生存曲线;C，Ki67表达阴性和阳性患者的无进展生存曲线;D，Ki67表达阴性和阳性患者的总生存曲线。

3 讨论

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤。目前，国内外学者都在致力于研究能够预测宫颈癌病人预后的生物学指标，目的是为了进一步改进治疗措施，改善宫颈癌患者预后，提高生存率。

B23蛋白广泛存在于真核细胞内，参与监控核仁活性及细胞增生。B23高表达见于增殖活跃的细胞，包括肿瘤细胞和干细胞，在分化和凋亡的细胞中B23的表达下调。B23在肿瘤发生发展中的作用主要研究集中在人实体瘤及血液淋巴系统恶性肿瘤中的B23mRNA 水平检测。它在胃癌、膀胱癌［1，2］、甲状腺癌［3］、肝癌［4］等呈高表达。在血液系统恶性疾病中常发生B23的基因重排和基因融合，有学者认为B23基因突变可作为监测微量残留白血病的新指标［5］。这些研究表明，B23可能参与正常细胞和癌变细胞的生长调节，可能作为肿瘤患者的预后评价指标。

B23高表达于增殖活跃的细胞，在肿瘤形成过程中发挥重要作用。高增殖活性是宫颈癌细胞生物学特点之一，本结果显示B23在宫颈癌组织中呈高表达。宫颈癌细胞恶性增殖及其细胞中B23高表达的分子机制仍不清楚。已有研究表明高危型HPV感染是引起宫颈癌的主要因素。HPV整合入宿主细胞不仅使病毒的癌蛋白得到长期稳定的表达，而且因插入造成宿主DNA的重排，相应的基因紊乱，对细胞的恶性转化起着重要作用。高危型HPV－16 E6蛋白在宫颈癌组织中高表达，而且也定位在细胞核［6］。有趣的是B23蛋白拥有可以结合NLS帮助蛋白质进入细胞核的空间结构［7］，这使得B23与E6蛋白在理论上具有结合的可能。本研究中B23在宫颈癌中的高表达提示B23在宫颈癌的发生中可能起一定作用。

Ki67即增殖细胞核相关抗原，是存在于细胞增殖期的蛋白质，在多种肿瘤中呈高表达，对该蛋白质的检测有助了解细胞的增殖活性。在宫颈上皮内瘤变中，Ki67分级结果较常规组织学分级更可靠，其灵敏性、特异性、阳性和阴性预测值均较高［8］。Ki67在G0期不表达，G1期后期开始出现，S、G2期升高，M期达高峰，随后迅速降解，半衰期为1h，而且在静止的细胞中无表达，故可用Ki67辨别生长中的正常细胞和肿瘤细胞，评估细胞增殖状态。Ki67在多种肿瘤中均呈高表达，其表达与乳腺癌［9］、子宫内膜癌、卵巢癌的组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、术后复发率和死亡率等临床病理特征及预后存在一定的相关性。

本组研究中，B23阴性的患者5年无进展生存率高于阳性患者(P=0.021)。B23阴性的患者5年生存率高于B23阳性的患者，但差异无统计学意义(P=0.186)。以上结果提示B23表达与宫颈鳞癌无进展生存相关，B23阳性的患者复发危险度较高。B23表达与细胞增殖有关，其表达越高，细胞增殖活性越强，预后越差。本组研究B23阳性的患者生存率低于阴性的患者，初步显示B23高表达提示着预后不良。

本组研究中，Ki67阴性的患者5年无进展生存率高于阳性的患者(P=0.001)，Ki67阴性的患者5年生存率高于阳性的患者(P=0.001)。以上结果提示在宫颈癌的预后判断方面，Ki67是一个有效的指标，与无进展生存及总生存相关。

B23和Ki67均与细胞增殖相关，在细胞增生活跃的肿瘤细胞中均呈高表达。本研究经Spearman等级相关分析显示:B23与Ki67的表达存在正相关关系(P=0.031)。B23和Ki67都是细胞增殖活性相关的蛋白，从不同角度反映细胞的增殖。B23在细胞周期中表达增加，细胞增殖后不降解，半衰期达到24h，而Ki67半衰期仅1h，所以在本组研究中，Ki67特异性较高。

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