芪加口服液对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用

唐 瑛，王庆敏，刘李娜，陈文彬

近代研究表明，黄芪多糖具有抗氧化作用，其作用机制可能与提高机体免疫功能、清除自由基及抗脂质过氧化有关［1］。原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成的一大类多酚类化合物的总称，是一种很强的自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂，具有抗氧化、抗衰老、抗癌等多种生物活性［2］。而黄酮类化合物具有广泛的药理活性，特别是抗氧化、抗辐射作用，是天然活性成分中极具应用潜力的资源之一。由刺五加黄酮、黄芪多糖和原花青素组成的复方芪加口服液具有很好的抗辐射作用。本研究拟以60Co γ辐射所致造血机能损伤模型小鼠为研究对象，观察芪加口服液对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小鼠50只，雌雄各半，体质量22～24 g，由复旦大学实验动物中心提供，并经伦理委员会许可，许可证号:SCXK(沪)2007-0002。

1.2 主要试剂 芪加口服液由刺五加黄酮、黄芪多糖和原花青素组成，由湖北省中医药研究院新药研究室提供，批号0050215。

1.3 分组及给药 按数字表法随机将小鼠分为5组，即对照组、模型组和芪加口服液高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量给药组，每组10只。给药组按设定剂量照前灌胃2周，照后灌胃1周，对照组和模型组给予等体积生理盐水。

1.4 照射条件 采用BJ-6B医用电子直线加速器(北京)，60Co γ射线一次全身照射。模型组和给药组小鼠置于自制有机玻璃盒中(20cm×20cm，深3.5cm)照射，照射距离10cm，小鼠吸收剂量为6.0 Gy。对照组设置相应环境，佯照射。

1.5 观察指标 (1)白细胞数(white blood cell，WBC):照射后第9天尾部取血，计数WBC数。(2)骨髓有核细胞数:照射后第9天将小鼠颈椎脱臼处死，取左侧股骨，白细胞稀释液冲洗骨髓细胞，显微镜下计数骨髓有核细胞数。(3)骨髓DNA含量:测定方法参照文献［3］。(4)脾指数:取脾脏称重，按下式计算脾指数:脾指数=脾质量(mg)/鼠体质量(g)。(5)内源性脾结节:测定方法参照文献［4］。

2 结果

2.1 芪加口服液对受照射小鼠外周血白细胞的影响 见图1。与对照组相比较，在接受60Coγ射线一次全身照射后，模型组的小鼠外周血白细胞数均明显减少，且差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，芪加口服液给药组小鼠的白细胞数较模型组增加，其中给予高、中剂量芪加口服液小鼠，白细胞数增加明显，且与剂量呈正相关，差异有统计学意义(P＜0.01或＜0.05)。

2.2 芪加口服液对受照射小鼠脾指数和脾结节的影响 与模型组比较，芪加口服液给药组小鼠的脾指数和脾结节数较模型组增加，其中高、中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

图1 芪加口服液对60Co γ射线照射小鼠外周血白细胞的影响(±s，每组 n=10)

表1 芪加口服液对60Coγ射线照射小鼠造血系统的影响(±s)

表1 芪加口服液对60Coγ射线照射小鼠造血系统的影响(±s)

注:与对照组比较aP＜0.05;与模型组比较bP＜0.05

组别 鼠数 剂量(mg/kg) 脾指数(mg/g) 脾结节(个)对照组10 3.55±0.01模型组 10 2.23±0.01a 1.29±0.32高剂量组 10 400 3.27±0.01b 2.32±0.96b中剂量组 10 200 3.40±0.01b 2.24±0.21b低剂量组10 100 2.85±0.01 1.84±1.01

2.3 芪加口服液对受照射小鼠骨髓有核细胞数和DNA含量的影响 与模型组比较，芪加口服液各给药组小鼠的骨髓有核细胞数增加，骨髓DNA含量明显增高，高、中剂量组与模型组差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，说明芪加口服液能保护受照射小鼠造血功能。见表2。

表2 芪加口服液对60Co γ射线照射小鼠造血功能的影响(±s)

表2 芪加口服液对60Co γ射线照射小鼠造血功能的影响(±s)

注:与对照组比较aP＜0.01;与模型组比较bP＜0.05，cP＜0.01

组别 鼠数 剂量(mg/kg) DNA(A268/根股骨)骨髓有核细胞(×106/根股骨)对照组10 0.16±0.02 7.45±1.11模型组 10 0.02±0.004a 0.81±0.21a高剂量组 10 400 0.04±0.02c 1.31±0.21b中剂量组 10 200 0.05±0.01c 1.15±0.21b低剂量组10 100 0.03±0.021 1.03±0.13

3 讨论

造血器官是射线的敏感器官，受照射后造血组织损伤产生一系列病理变化，造血功能的恢复是预后的关键因素。本研究采用BJ-6B医用电子直线加速器(北京)，60Co γ射线一次全身照射，骨髓有核细胞数和DNA含量含量明显降低，说明复制辐射损伤小鼠模型是成功的。小鼠受照射后数日内造血功能损伤较大，在第9天时，造血功能开始恢复，因此本研究观察了第9天时的各项指标［5］。

芪加口服液由刺五加黄酮、黄芪多糖和原花青素组成，是湖北省中医药研究院新药研究室研究的新型复方抗辐射药。本研究探讨了其对辐射照射小鼠造血系统的影响。实验结果说明与模型组比较，芪加口服液能提高骨髓有核细胞数、增加骨髓DNA含量和提升白细胞数，其中高、中剂量的影响差异均有统计学意义。这说明芪加口服液对主要造血器官骨髓具有保护作用，能减轻射线对骨髓有核细胞的损伤，促进造血功能的恢复。本研究采用内源性脾结节法研究CFU-S多能造血干细胞的功能和相对数量。研究结果表明，芪加口服液高、中2个剂量能提高脾脏指数，显著增加内源性脾结节数，保护造血干细胞，提示芪加口服液对脾脏代偿造血功能有促进作用。

［1］王庆蓉，马丽，雷呈祥.多糖抗辐射作用的研究进展［J］.海军医学杂志，2009，30(3):273-276.

［2］Moini H，Rimbach G，Packer L.Molecular aspects of procyanidin biological activity:disease preventative and therapeutic potentials［J］.Drug Metabol Drug Interact，2000，17:237-259.

［3］吴万征，李朝晖，梁球.西藏红景天对小鼠辐射损伤的保护作用及其抗高原反应与低温环境的作用［J］.中药材，2005，28(2):128-130.

［4］陈乾，晋进，郭宏举，等.褐藻糖胶对60Co-γ射线照射小鼠造血系统的辐射防护作用研究［J］.解放军药学学报，2014，30(1):10-13.

［5］周永，麋漫天，杨镇洲.三羟异黄酮对照射小鼠造血系统损伤的防护作用［J］.中华放射医学与防护杂志，2002，25(1):21-24.