易门县小反刍兽疫免疫效果的调查

宋红莲徐 阳孔绍国马萍焕孟 雷

(1.易门县动物疫病预防控制中心,云南易门 651100；2.易门县浦贝乡农业中心畜牧兽医组,云南易门 651100；3.易门县龙泉街道农业中心畜牧兽医组,云南易门 651100)

易门县小反刍兽疫免疫效果的调查

宋红莲1*徐 阳1孔绍国2马萍焕2孟 雷3

(1.易门县动物疫病预防控制中心,云南易门 651100；2.易门县浦贝乡农业中心畜牧兽医组,云南易门 651100；3.易门县龙泉街道农业中心畜牧兽医组,云南易门 651100)

为掌握易门县小反刍兽疫的实际免疫效果，为科学防控小反刍兽疫疫情提供可靠依据，采用C-ELISA对易门县龙泉街道、浦贝乡辖区内的山羊规模养殖场（户）、散养户不同的饲养方式、品种、年龄段羊群，共调查8户，587只羊，采集60份样品进行小反刍兽疫免疫效果血清抗体检测，检测结果显示，小反刍兽疫免疫后7 d，不同的饲养方式、品种、年龄段的免疫抗体转阳率均达90%以上。调查结果表明，易门县采用疫苗免疫产生的抗体转阳率达到国家免疫合格要求，疫苗免疫对易门县小反刍兽疫防控有效。

小反刍兽疫 免疫抗体 检测

小反刍兽疫（PPR）又名小反刍兽伪牛瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、烈性、接触性传染病，易感群发病率高达100%，严重暴发时，死亡率达100%。目前，该病尚无有效治疗方法，主要通过早期诊断和疫苗免疫进行控制。19世纪40年代，该病首次在科特迪瓦报道以来，先后在多个国家暴发和流行。2007年7月，国内西藏地区先后发生4起PPR疫情，感染近5 000只羊。2014年4月，云南首次爆发PPR疫情。

易门县隶属云南省玉溪市，距省城昆明市93 km。97%为山区，3%为坝区，属典型的山区县，畜牧业主要以生猪、家禽、山羊养殖为主，2013年全县山羊存栏62 663只，出栏46 200只，疫病死亡率1.2%。2014年以前山羊疫病主要有山羊痘、传染性胸膜肺炎等。2014年4月10日，由于浦贝乡许家村张某某从市场购进产地为安宁温泉的9只病羊而引发小反刍兽疫，并有疫情扩散趋势。2014年4月12日，相关技术管理部门采取了“紧急免疫、扑杀病羊及同群羊、设卡检查”等综合防控措施。到2014年4月27日，全县小反刍兽疫免疫552 929只，占存栏数的89.3%了。为确实掌握易门县小反刍兽疫免疫效果，评估防控效果，为以后制定防控措施提供科学依据，特开展此次免疫效果评价调查。

1 材料和方法

1.1 疫苗

新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的小反刍兽疫活疫苗，规格100头份/瓶，批号2014017-2，每头份含有的小反刍兽疫弱毒病毒至少为103TCID50。

1.2 主要仪器和试剂

安图酶标仪：型号2010；小反刍C-ELISA试剂盒来自云南出入境检验检疫局。

1.3 样品来源

易门县龙泉街道、浦贝乡辖区内的山羊规模养殖场（户）、散养户不同的饲养方式、品种、年龄段羊群，共调查8户，587只羊，样品来源信息见下表（表1）。

表1 样品来源信息表

1.4 免疫方法

不分品种、月龄阶段（大小）、性别等，按疫苗使用说明书的要求每只羊颈部皮下注射1ml（1头份）。

1.5 样品采集及血清分离

分别抽样采集免疫后7d、10d、14d、21d的同群5只羊的颈静脉血，用3 000 r/min离心10 min，分离血清，待检。

1.6 C-ELSIA方法

将抗原稀释至工作浓度，100 μl/孔包被于空白ELISA板上，37℃孵育1 h；弃液，加入250 μl洗液洗涤3次，拍干；每孔加入40 μl稀释液，设立对照孔，其余各孔分别加入10 μl加入待检血清样品，在对应孔中每孔加入50 μl单克隆抗体工作液；贴膜，室温连续振荡1h；弃液，加入250 μl洗液洗涤3次，拍干；在每孔中加入100 μl工作浓度的酶标二抗抗体，室温连续振荡1 h；弃液，加入250 μl洗液洗涤3次，拍干；加入100 μl TMB底物液，室温避光孵育10 min，加入100 μl终止液。使用450 nm波长酶标仪读取OD值，按说明书判定阴阳性。

2 结果

2.1 血清学监测结果

采用C-ELISA检测结果，随机抽取的不同品种、不同养殖模式、不同年龄段的免疫后的不同天数的血清抗体转阳率仅有1个规模场免后7 d在80%（〉70%），其余免疫7 d后抗体转阳率为90%，免疫10 d后抗体转阳率均达100%，抽检样品平均抗体转阳率98.33%（结果详见表2和图1）。结果表明，使用新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的小反刍兽疫活疫免疫7 d后，抽检样品产生的血清抗体即能达到免疫要求。

表2 小反刍兽疫血清抗体检测结果

图1 免疫后不同时间转阳率趋势图

2.2 免疫效果调查

2.2.1 疫情调查

免疫前，采样检测的8户养殖户饲养的587只羊及所在村组其他35户，852只羊群未发生凝似小反刍兽疫临床病例。免疫后7d，检测点小平地有2户未免疫的8只山羊发生小反刍兽疫，占存栏数13只的61.5%，死亡7只，病死率达87.5%；采样监测的8户及其所在村组在免疫前一个月内没有到外地购进羊饲养，在免疫后3 d，监测点小平地有一农户从市场购入一只带毒公羊饲养，引发疫情。免疫20 d后全县小反刍兽疫免疫密度达99.2%，至今全县未发生疑似小反刍兽疫临床病例。

2.2.2 不良反应调查

587只羊免疫后24h未出现不食，抽测47只羊的体温为38.5℃～39.2℃，体温正常；免疫30d后未有流产、死亡等不良反应出现。

3 结论

（1）不同的饲养方式、品种、年龄阶段的山羊，免疫10 d后抗体转阳率高达100%，疫苗免疫后6个月免疫群未发现临床病例，无不良反应，结果表明小反刍兽疫疫苗免疫效果好，适用性强，副反应小。

（2）疫苗免疫后一般无不食、流产、死亡等不良反应，怀孕母羊免后未见不良反应，免疫7 d后抗体转阳率可达90%，结果表明小反刍兽疫疫苗免后抗体产生快，疫苗安全性好，可用于紧急免疫。本调查怀孕期母羊样本量小，未见不良反应可能是随机事件，怀孕母羊免后是否安全有待进一步调查。

（3）本调查调查范围易门县龙泉街道、浦贝乡辖区内的山羊规模养殖场（户）、散养户不同的饲养方式、品种、年龄段羊群，共调查8户，587只羊，疫苗免疫羊群对该病确实有极佳的防治效果，保护率高。

宋红莲（1966-），女，中专，主要从事动物防疫、检疫、实验室检验工作。*通讯作者。