牛布氏杆菌病血清学和变态反应诊断

马建山

（辽宁省动物疫病预防与控制中心，辽宁沈阳 110000）

牛布氏杆菌病血清学和变态反应诊断

马建山

（辽宁省动物疫病预防与控制中心，辽宁沈阳 110000）

牛患布氏杆菌病后，其凝集反应通常出现较早，其次是补体结合反应，变态反应出现较晚，但保持的时间最长，有些牛在病愈之后几年仍有变态反应。若在牛群刚暴发本病时进行检疫，凝集反应阳性率常比补体结合反应阳性率高，比变态反应阳性牛更高，这时甚至可能还不出现变态反应。若经过1～2年以后重检，所得的结果恰好相反，变态反应阳性率比凝集反应和补体结合反应阳性率显著地高。因此应当根据具体情况使用这些方法，并应根据流行病学情况对检验结果做出正确的判断。

1 试管凝集试验

此法在我国应用已久，目前仍然是检查牛布氏杆菌病的初步试验。我国生产的布氏杆菌凝集抗原，是按联合国世界卫生组织和粮农组织布氏杆菌病专家委员会规定的标准定的，其应用液（即抗原原液1:20稀释液）对国际标准布氏杆菌阳性血清的凝集价恰为1:1000二个加号。而国际血清1mL恰含有凝集素1000IU，因此用我国抗原进行检验所获得的凝集价正好与所含凝集素单位相符，故可用凝集价来表示被检血清所含的凝集素单位。有报道说，未接种过布氏杆菌苗的牛，凝集价达到80～100IU/mL的认为阳性；40～50IU/mL的认为可疑。幼龄时期接种过布氏杆菌19号菌苗的牛，年龄超过30个月以后，凝集价为200IU/mL的认为阳性，100IU/mL的认为可疑。在刚发生布氏杆菌病的牛群中，由于有些新感染的牛凝集价尚未升高，出现1:25凝集现象的，亦应认为可疑。凝集价是随着病程的演变而升高、降低或保持一定水平的。所以可疑反应牛应于15～30d后采血重验，如重检仍未可疑，表示该牛处在本病的隐性期中，应做阳性牛处理。但凝集试验也有它的局限性，有些处于潜伏期的病牛的凝集价达不到阳性标准。妊娠牛初次感染时，往往不出现凝集素，需在流产或产犊后数天到2周才出现。少数病牛在妊娠后期，由于免疫球蛋白由血液循环转移到乳腺，凝集价暂时下降。此外，慢性病牛也可能不出现凝集反应，对这些牛可采取多次检验的方法把它们逐步检出。

2 平板凝集反应

用这种抗原按照规定方法检验血清时，所获得的结果与用试管凝集试验法所检测的结果基本上相符。在平板凝集反应试验中，0.08mL的血清量的反应相当于试管法中的1:25血清稀释液的反应，0.04mL相当于1:50，0.02mL相当于1:100，0.01mL相当于1:200。在0.02mL量中出现凝集反应的判为阳性，在0.04mL中出现反应的判为可疑。

3 全乳环状反应和乳清凝集试验

患布氏杆菌病的牛，其奶中常有凝集素，可根据奶中凝集素的有无来诊断牛的布氏杆菌病。一般来说，奶中有凝集素的母牛，血清中也有凝集素，但也有少数牛在奶中有凝集素而在血清中则没有。乳清凝集反应和血清凝集反应不相符的现象时经常见到的，甚至从同一母牛的4个乳头挤出的奶，其乳清凝集价也往往不同，相差显著的由1:10～1:160，这可能是由于乳房局部感染造成的。因此，检查奶牛凝集素有其特殊的意义，可以补血清凝集反应的不足。此外，检查混合奶的凝集素，还可以了解牛群布氏杆菌病的流行情况。乳清凝集反应可采用试管法或平板法进行，采用试管法时，乳清稀释度由1:5开始。采用平板法时，须用特别的抗原，最好先用已知凝集价的血清滴定其敏感度和规定其浓度，使与试管法相符。提取乳清的最好方法是加凝乳酶于奶中，在38～40℃水浴锅中放5min后，乳清即随奶的凝固而渗出。

4 补体结合试验

牛感染布氏杆菌之后，通常经过10～20d出现补体结合反应。补体结合试验对牛布氏杆菌病也有很高的诊断价值，但阳性检出率的高低是依牛感染布氏杆菌后经过期间的长短而有所不同。补体结合试验对于鉴别由注射19号菌苗所引起的凝集反应和由自然感染所引起的凝集反应很有用处，是鉴别这两种凝集反应最好的方法。接种19号菌苗的牛，凝集反应消失较晚，注射后9个月尚未完全消失，补体结合反应消失较早。自然感染布氏杆菌病的牛则与此不同，凝集反应和补体结合反应经常相伴出现。因此，注苗后经过半年的牛，若仅出现凝集反应而无补体结合反应，即可认为此种凝集反应有可能是注射菌苗引起。

5 变态反应

通常用流产菌素来检验布氏杆菌病牛的变态反应。用皮下注射法或点眼法进行检验均可。但需要注意的是，有部分病牛康复之后，有相当长的时期内仍保持阳性变态反应。因此根据变态反应实行防制措施时，将有一部分已康复的牛被当作病牛处理。在培育健康犊牛群时，为了保证犊牛群健康，必须将所有正在患病或患过病的犊牛检出。况且犊牛年幼，得病时间不会太久，在多数场合下阳性变态反应正好标示出该犊正在患病，因此用此法与凝集反应一起检查犊牛布氏杆菌病是有用的。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．11.045