HPLC法检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明

李 静，李倚云，闻琍毓

(扬州市药品检验所，扬州 225009)



HPLC法检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明

李 静，李倚云，闻琍毓

(扬州市药品检验所，扬州 225009)

目的：建立高效液相色谱法检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为0.02 mol/L乙酸铵溶液(用乙酸调节pH至4.0)-甲醇(45∶55)，流速为1.0 ml/min，柱温为35 ℃，检测波长为225 nm。结果：酚酞和盐酸西布曲明分别在10.77～107.70 μg/ml(r=0.999 9)和11.15 ～ 111.50 μg/ml (r=0.999 9)范围内，浓度与其峰面积呈良好线性关系，平均回收率分别为99.37% (RSD为0.73%)和98.97%(RSD为0.60%)。结论：本方法简便易行、准确可靠，可用于检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明。

酚酞，盐酸西布曲明，减肥类保健食品，高效液相色谱法

目前市场上减肥类保健食品种类繁多，良莠不齐。一些不法商家为追求功效，牟取暴利，不惜向保健食品中非法添加化学药品，给广大消费者的身体健康造成严重危害。其中，最常见的添加药物是酚酞和盐酸西布曲明。为有效地监督减肥类保健食品的质量，本文参照有关文献[1-3]，采用HPLC法对减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明进行定性定量检测。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国Waters 2695高效液相色谱仪(配Waters 2996二极管阵列检测器和Empower 化学工作站)；瑞士METTLER公司AG135型电子分析天平。

1.2 试药 酚酞对照品(中国药品生物制品检定研究院提供，批号100091-199601，供含量测定用，使用前不需干燥处理)；盐酸西布曲明对照品(中国药品生物制品检定研究院提供，批号100624-200401，供含量测定用，使用前不需干燥处理)；减肥胶囊(编号为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，批号为20121113、130409、W201308161)；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.02 mol/L乙酸铵溶液(用乙酸调节pH至4.0)-甲醇(45∶55)；检测波长：225 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 混合对照品储备溶液的制备 精密称取酚酞和盐酸西布曲明对照品各约10 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇超声处理30 min使溶解，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备溶液。

2.2.2 供试品储备溶液的制备 分别取供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10粒，倾出内容物，混匀，研细，精密称取细粉约0.2 g，置100 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ储备溶液。

2.3 定性鉴别 分别取混合对照品溶液和供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ储备溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果显示供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的色谱图中，检出与酚酞和盐酸西布曲明对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。采用二极管阵列检测器采集各点光谱，供试品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ色谱图中的两个色谱峰分别与酚酞和盐酸西布曲明对照品色谱峰的紫外吸收光谱一致，可证实这三批样品中均添加了酚酞和盐酸西布曲明。混合对照品溶液和典型样品HPLC色谱图见图1。

1.酚酞 2.盐酸西布曲明

2.4 定量测定

2.4.1 线性关系考查 精密量取“2.2.1”项下的酚酞和盐酸西布曲明混合对照品储备溶液1.0、2.0、3.0和5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成酚酞和盐酸西布曲明的系列标准溶液。精密量取上述标准溶液和混合对照品储备溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以酚酞和盐酸西布曲明的峰面积(Y)对其浓度(X)进行线性回归，回归方程分别为酚酞Y=5×107X+45 486(r=0.999 9，n=5)；盐酸西布曲明Y=2×107X-11 046(r=0.999 9，n=5)。结果表明，酚酞和盐酸西布曲明分别在10.77～107.70 μg/ml和11.15～111.50 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.4.2 精密度试验 精密吸取酚酞和盐酸西布曲明混合对照品储备溶液10 μl，在上述色谱条件下连续进样6次，酚酞和盐酸西布曲明峰面积的RSD分别为0.93%和0.92%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验 取样品Ⅰ，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液6份，在上述色谱条件下连续进样测定，酚酞和盐酸西布曲明峰面积的RSD分别为1.50%和0.90%，表明本方法的重复性良好。

2.4.4 稳定性试验 取样品Ⅰ溶液，在0、2、4、6和8 h分别进样，记录峰面积。酚酞和盐酸西布曲明色谱峰峰面积的RSD分别为0.68%和1.12%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的样品Ⅰ，共9份，每份约0.2 g，精密称定，置100 ml量瓶中。精密称取酚酞对照品28.30 mg与盐酸西布曲明对照品33.40 mg，置同一25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，量取2、2.5和3 ml各三份，分别加入上述9个100 ml量瓶，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液。精密量取10 μl注入液相色谱仪测定，记录色谱图。结果显示酚酞和盐酸西布曲明的平均回收率分别为99.37%和98.97%，RSD分别为0.73%和0.60%，见表1和表2。

2.4.6 含量测定 取样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，按“2.2.2”项下的方法制备供试品储备液。样品Ⅰ：取储备液即得。样品Ⅱ：取储备液测定盐酸西布曲明含量。另精密量取储备液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，测定酚酞含量。样品Ⅲ：取储备液测定盐酸西布曲明含量。另精密量取储备液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，测定酚酞含量。在上述色谱条件下，分别注入高效液相色谱仪测定，记录峰面积，按外标法计算样品中酚酞和盐酸西布曲明的含量，结果见表3。

表1 样品中酚酞的回收率试验结果

表2 样品中盐酸西布曲明的回收率试验结果

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 酚酞属于接触性轻泻药，可促进肠蠕动而起到减肥的作用，但也可引起过敏性反应，诱发肠炎、皮炎及大出血等，过量或长期滥用可造成电解质紊乱、心律失常，发生神智不清、 肌痉挛以及倦怠无力等症状[4]。盐酸西布曲明是一种有中枢神经抑制作用的减肥药物，长期服用会产生肢体痉挛、思维异常、癫痫等危害严重的副作用[4]。上述两种化学药物只能作为药品使用，而在保健食品中均不得添加。若消费者片面追求减肥效果，盲目地长期、大量服用这类保健食品，必将对自身的健康和生命造成严重威胁。

3.2 实验中采用二极管阵列检测器对两种物质进行波长扫描，酚酞在228 nm有最大吸收峰，盐酸西布曲明在222 nm有最大吸收峰。经比较，选择225 nm作为检测波长，两种物质在此波长处均有较好的吸收，且干扰峰较少，峰形良好。

3.3 由于违法添加化学药物的保健食品不会标示添加物的含量，在实际测定中，应先通过预实验初步探索样品中添加物的含量，再根据需要采用不同的稀释比例，以确保结果的准确性。

3.4 本文建立了HPLC法检测减肥类保健食品中非法添加酚酞和盐酸西布曲明的方法。操作简便快速，结果准确可靠，可作为检测非法添加酚酞和盐酸西布曲明有效方法。

1 姚莉，陈景国，陈冬.减肥类保健品中非法添加化学药品的快速筛查[J].淮海医药，2012, 30(6): 547

2 黄奕滨，黄诺嘉，杨文红.HPLC法测定减肥类保健食品中非法添加酚酞的研究[J].齐鲁药事, 2011, 30(1): 12

3 曹文丁，余佳文，官柳，等.高效液相色谱法测定曲美胶囊中盐酸西布曲明的含量[J].中国药房，2004，15(4): 240

4 曾涛.常用减肥药物的不良反应[J]. 中国药师, 2007, 10(6): 599

2014-10-23

R927.11

A

1006-5687(2015)02-0017-03