凯美欣对大鼠亚慢性毒性作用分析

李莉莎，倪宏波*

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163363）

凯美欣对大鼠亚慢性毒性作用分析

李莉莎，倪宏波*

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163363）

凯美欣，主要活性成分为磺胺氯哒嗪钠（Sulfachlorphrazine，SPZ）和按一定比例添加甲氧苄啶（Trimethoprim，TMP）。本实验主要检测该复方药物及其主要方剂通过对大鼠灌服不同剂量的凯美欣后的临床症状、血液指标和病理变化等，对药物的安全性进行检测分析。

1 实验材料

1.1 试剂

SPZ原粉；瑞氏染液；BUN、CREA、SOD、MDA、C-GT、AKP、尿蛋白、尿NAG测定试剂盒；二甲苯；苏木精；伊红；阿氏液等。生理盐水、无菌注射用水、灌胃针、胃导管、若干一次性1ml注射器。

1.2 实验动物

大鼠80只，体重180g。所有动物试验前进行临床检查，观察一周，试验期间常规饲养。

1.3 仪器设备

电子分析天平，离心机，漩涡振荡器，组织切片机。

2 实验方法

2.1 实验动物分组

大鼠共80只，随机分成5组，雌雄各半，16只/组。第Ⅰ-Ⅳ组为试验组，根据药品对大鼠LD50的测定，结果由低到高设为正常量、5倍、10倍和20倍组，第Ⅴ组为对照组。第Ⅰ-Ⅳ组中大鼠按20～30mg/kg·bw的剂量分别灌服不同梯度的凯美欣，第Ⅴ组灌服1mL生理盐水作对照。每1d灌服1次，连续给药2周。每日观察，在7、14、21d时称重，代谢取尿，剖杀取血。

2.2 实验动物给药

在大鼠盒内固定好其头部,使腹部轻贴在盒内壁上，处于自然站姿。右手持灌胃器，从大鼠左嘴角缓慢进针，用针轻压其上腭使口腔与食道成一直线，等灌胃针深入约5cm时，用食指轻推注射器的活塞使药液缓慢入胃。

2.3 实验动物样本采集

（1）尿液将载玻片置于大鼠笼内，任其小便于玻片上；轻压大鼠后下腹部，使其直接排尿在玻片上；用1mL注射器吸取排于实验台上的尿液。

（2）血液鼠尾采血：用50℃左右的温水浸泡尾部约2min，待充血后用酒精棉消毒，剪去尾尖5～10mm，从尾根部向尾尖按摩，血自会流出。心脏采血：用乙醚将大鼠迷晕，使腹侧朝上，针头紧贴胸部剑突下，缓慢进针，发现针头泵入少量血液时将采血针软管的另一头插入真空采血管内，血液即可大量流出。

2.4 血常规检测

每次选取5只大鼠，采血待检。检测包括血液中的白细胞、红细胞、淋巴细胞、血小板计数以及血红蛋白的含量。

2.5 血液生化检测

包括肝功能的检测和肾功能的检测。每次选取五只大鼠，分离出肝、肾脏，采集血清直接用ELISA试剂盒检测。肝脏功能主要检测GGT、AKP、ALT、甘油三脂、总蛋白、白蛋白等。肾脏功能主要检测：血清尿素氮和肌酐。

2.6 脏器指数测定

随机选择采样大鼠，剖杀前称重，每组剖杀5只，取其主要脏器称重，计算大鼠的各脏器指数。脏器指数即脏器重量（mg）与活体体重（g）的比值。

2.7 病理解剖学与组织学检测

（1）病理解剖学观察：剖杀大鼠，取出主要脏器如肝脏、脾脏、肾脏等，观察其病变。

（2）病理组织学检查：将已有病变的器官，浸于10%的福尔马林中，石蜡固定切片，H.E.染色，置于光镜下观察。

3 实验结果

3.1 血常规检测结果

将血常规主要检测指标结果分别用折线图表示。白细胞数量介于9×109/L～14×109/L之间，个别数据低于或高于这个区间；除20倍量组部分个体以外，红细胞计数绝大多数介于6×1012/L～10×1012/L之间；血红蛋白含量介于140～200g/L，少数超出此范围；血小板数据点折线图在500× 109/L～700×109/L范围内，淋巴细胞（LY%）均在70%～90%之间。结果表明，各剂量组数据保持比较稳定的走势，无显著差异。

3.2 血液生化检测结果

血液是运输动物机体营养物质和代谢废物的载体，也是机体实现体液调节的途径。血液的生化指标反映机体全身或局部带些变化和组织正常生理功能较为敏感的指标。

3.2.1 肝功能指标（1）酶是细胞的物质成分，是生物体内物质代谢的催化剂。谷-丙转氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）是动物肝细胞的细胞核及线粒体中重要的转氨酶，与氨基酸、蛋白质的代谢有关，反映动物肝损伤的敏感性。ALT介于40～70U/L之间，AST除20倍组个别数据有差异，其他保持在150～250U/L。碱性磷酸酶主要存在于骨化的软骨组织中，与骨盐沉积、骨胶原蛋白的形成和动物正常生长发育密切相关，数据点显示各组ALP、GGT数据大体稳定，无明显变化。

（2）甘油三酯（TG）和总胆固醇（CHOL）的水平反映动物机体内脂类代谢状况。TG是人体内含量最多的脂类，在0.8～1.5mmol/L范围内；胆固醇是动物组织细胞中不可或缺的重要物质，试验数据多在0.7～1.2mmol/L内；葡萄糖（GLU）指标趋于8～15mmol/L之间，各组数据基本无差异。

（3）总蛋白（TP）可以反映肝脏合成蛋白质的能力。白蛋白是衡量肝脏功能的重要指标。总蛋白位于60g/L～90g/L之间，白蛋白介于20～35g/L，球蛋白介于30～50g/L，有各数据点折线图分析可知，各组指标大体保持稳定。

3.2.2 肾功能指标血清尿素氮（BUN）和肌酐（CREA）是反映肾功能的重要检测指标。BUN的浓度与动物体内蛋白质代谢和氨基酸平衡状况息息相关。肌酐是肌酸的代谢产物，在体内生成的量是相对恒定的，绝大部分由肾小球滤过后排出体外。血清尿素氮在各剂量组中比较稳定，在3～5mmol/L之间。肌酐指标在25～40umol/L范围内，各组之间无显著性差异性。

3.3 脏器指数测定结果

从取样后的三组指数得知，对照组与各实验组的胸腺、脾、肾、肝的脏器指数均在正常参考值范围内，各给药组的指标差异不显著（P＞0.05），不同剂量的凯美欣对实验动物的正常生长发育并无明显影响。

3.4 病理解剖学与组织学检测结果

用肉眼观察对照组与试验各组的各个取样脏器表面、内膜均无淤血等现象，胸腔、腹腔均无积液等病理改变，各组织脏器正常，未见异常的病理变化。无论是在40×还是200×显微镜下观察组织切片不难发现：对照组与各实验组虽用药剂量不同，但对脾脏、肾脏及肝脏并未产生致病作用，可清晰的看到各器官无明显的病理变化，说明这种复方药物对大鼠的肝脏、肾脏等主要器官为造成毒性影响，无毒副作用可以应用到生产中。

4 讨论

给药后试验动物活动量减少，精神不振，排泄物呈药物颜色，说明动物机体在灌服药液后产生了反应，随后每日灌服机体也恢复正常且试验期间无一死亡。与对照组相比，试验各组指标趋于稳定，无显著差异（P＞0.05），证明了凯美欣这种复方磺胺类药物对大鼠的正常生长发育无不良影响。从病理解剖学与组织学检测结果发现试验大鼠并未产生任何的毒副作用和不良反应，在短期内使用此药有一定的安全性。同时磺胺类药物也因疗效显著且价格低廉，性质稳定，吸收快等优点适用于临床应用，但为了确保长期使用的安全性还可进行深入探究。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．05.021

李莉莎（1987～），黑龙江哈尔滨人，硕士研究生

★通信作者：倪宏波