猪丹毒的实验室诊断方法

马建山

（辽宁省动物疫病预防与控制中心，辽宁沈阳 110000）

猪丹毒的实验室诊断方法

马建山

（辽宁省动物疫病预防与控制中心，辽宁沈阳 110000）

猪丹毒是由猪丹毒杆菌引起的急性败血型，或在皮肤发生特异性红疹的热性传染性疾病，是猪的主要疫病之一。该病可根据流行病学资料、症状和病理解剖进行判断，但因急性猪丹毒往往不易与其他急性的猪病区别，所以较为可靠的诊断方法是细菌检查和动物接种，至于血清学的检验也有一定的诊断意义。

1 细菌检查

细菌检查是诊断猪丹毒较为可靠的方法，可用于病猪生前和死后的检查。

1.1 显微镜检查在诊断猪病时，可从耳静脉采血或切开疹块挤出血液和渗出液作涂片。对急性病例的尸体，可从血液、脾、肝、肾及淋巴结采取材料作涂片，用革兰氏或瑞氏法染色后作显微镜检查。猪丹毒菌多是散在于红细胞之间，也有成堆地存在，并常发现许多菌被白细胞吞噬的现象。慢性猪丹毒容易从心内膜炎的瓣膜增生的纤维组织中找到细菌，并可见由长丝状菌体构成的丛状物。此外，在显微镜检查时，因猪丹毒杆菌在血液中数目较少，至少要看10个以上的视野再作判断。

1.2 细菌培养如经显微镜检查找不到细菌或不能确定判定时，就要采用培养检查法。即以无菌手续采取病猪的耳血或划破疹块部的皮肤取组织液，死猪尸体则从心血或肝、脾、肾及淋巴结中采取材料，接种于pH7.6～7.8的血液琼脂斜面及马丁肉汤中，置35℃培养24h后，按照猪丹毒杆菌的培养特性进行观察，判断结果。慢性病例应从心瓣膜的纤维性增生组织中或有病变的关节囊内采取材料作培养。

1.3 对死亡后时间已久的尸体作细菌培养由于这种材料容易被腐生菌污染，所以培养方法时用含有10%血清的马丁琼脂平面划线接种，或者取管状的骨髓作培养。但有的学者认为用骨髓不如用肾脏培养准确。但在交通不便的地区运送材料或遇尸体已经腐败时，应采用骨髓作培养。被检的材料可放在30%～40%的甘油或食盐溶液内，以防腐败。

此外，用细菌培养法诊断猪丹毒时，常会遇到混感情况，除丹毒菌外，还可分离出大肠杆菌、巴氏杆菌等，因此应注意观察，分清主次。

2 动物接种

当被检材料中含菌量极少，或已被污染，仅做细菌分离诊断有困难的，可以接种小动物作为补助诊断。接种材料可取疹块部组织或血液，或脾、肝、肾等脏器，加少量生理盐水作成乳剂直接注射，也可用病猪材料的24h肉汤培养物注射，剂量一般为小鼠皮下注射0.2mL，同时还注射豚鼠。如被检材料是猪丹毒，则小鼠在接种后3～5d死亡，并可以从死亡动物的心血及脾、肝、肾等脏器内分离到猪丹毒杆菌。

3 血清学检查

3.1 凝集反应主要检测慢性猪丹毒病猪血清中的凝集点。有显微镜下检查法、试管凝集反应与全血平板凝集反应三种，其中以全血平板凝集反应检查方法最简便。

（1）全血平板凝集反应法：将选出的猪丹毒杆菌接种于10%马血清的马丁肉汤中，在37℃培养24h，加0.4%福尔马林杀菌24h，再离心沉淀洗出菌体，悬浮于1%福尔马林生理盐水中，作为本试验的抗原。为便于观察反应，可在抗原中加入20%甘油及0.001%结晶紫。取被检猪的血液1滴放于清洁的玻片上，加抗原1滴混合后在1min左右出现凝集的为阳性反应。患急性猪丹毒的病例在发病2～5d检查，即可得出阳性结果，但应注意凡经猪丹毒菌苗免疫的或注射抗丹毒血清的猪，在一定时期内亦呈现阳性反应，健康猪有时也有轻度凝集或可凝反应，不过出现反应的时间多在1.5～2.0min以后。

（2）显微镜下凝集反应法：此法与全血平板凝集反应检查相似，只是将血清与抗原各一滴混合于盖玻片，作成悬滴标本，在镜下检查。细菌凝集成团块的为阳性，而细菌仍均匀分布为阴性。

3.2 试管凝集反应法取被检血清以生理盐水作不同倍数的稀释，加入抗原混合后置于37℃温箱4h，取出用低速离心沉淀数分钟，阳性反应时上液透明，阴性的仍为混浊状。按照这种方法检查，阳性反应猪的凝集价，有的可达1:200以上。有人曾用血清生长凝集试验诊断急性猪丹毒获得成功。方法是将病猪耳部或死亡猪只实质性脏器接种于马丁肉汤中，内含1:40抗猪丹毒高免血清与1mL有1000U的卡那霉素，36℃培养12h观察结果观察结果，如系猪丹毒病猪，在试验管底部可见明显的凝集反应。

3.3 沉淀反应这种反应用于死猪尸体诊断，其方法与诊断炭疽的沉淀反应方法相同。沉淀素血清用兔制造的比一般抗丹毒血清的效力好。抗原可用病死猪的疹块部组织，或肝、脾、肾等脏器加5倍生理盐水磨成乳剂，煮沸5～10min后用石棉滤过至透明即可。检验时，取适量沉淀素血清，装入小试管中，斜持试管，沿管壁加入抗原，重迭于血清上，经15～30min后，如在两液接触面上有白环出现的为阳性反应。

3.4 荧光抗体法也可以直接的荧光抗体法鉴别猪丹毒培养物和病理组织切片标本，均能在1～2h内做出判定。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．12.064