老年反流性食管炎患者血清Ghrelin和Leptin水平及在胃黏膜中表达的意义

吴旻 戴一扬 厉朝喜 彭芳 陈凌燕 翁秀妹

浙江医院消化内科，浙江杭州310013

老年反流性食管炎患者血清Ghrelin和Leptin水平及在胃黏膜中表达的意义

吴旻 戴一扬 厉朝喜 彭芳 陈凌燕 翁秀妹

浙江医院消化内科，浙江杭州310013

目的探讨老年反流性食管炎患者生长激素释放多肽（Ghrelin）和瘦素（Leptin）血清水平及其在胃黏膜中表达的意义。方法选取老年反流性食管炎患者30例及正常对照组30例，采用ELISA法检测血清Ghrelin和Leptin水平，同时用免疫组化法检测胃黏膜中Ghrelin及Leptin的表达。结果老年反流性食管炎血清Ghrelin水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；血清Leptin水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；老年反流性食管炎胃黏膜Ghrelin表达阳性率（47%）显著低于正常对照组（76%），差异有统计学意义（P<0.05）。胃黏膜Leptin表达阳性率（83%）显著高于正常对照组（50%），差异有统计学意义（P<0.05）。老年反流性食管炎患者血清Leptin水平与Ghrelin水平呈负相关（P<0.05）。结论Ghrelin、Leptin水平可能与老年反流性食管炎的发病有关，两者在反流性食管炎的发病中相互影响，生物学作用相反。

反流性食管炎；生长激素释放多肽；瘦素

反流性食管炎是常见的易复发的消化动力障碍疾病，国内外研究表明反流性食管炎的发病率随年龄的增加、饮食习惯的改变而增加，近年来生长激素释放多肽（Ghrelin）与瘦素（Leptin）等胃肠类激素在反流性食管炎的发生与发展中起到的作用逐渐受到关注，国内外研究证实Ghrelin和Leptin等在胃酸及胃排空的调节中起重要作用[1]。本文通过对老年反流性食管炎患者空腹血清及组织中生长激素释放多肽（Ghrelin）和瘦素（Leptin）水平的测定，旨在探讨Ghrelin和Leptin在老年反流性食管炎发病机制中的作用。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年9月～2014年2月间来我院消化科就诊及来我院体检并行胃镜及病理组织学检查、年龄>60岁、快速尿素酶检测幽门螺旋杆菌（Hp）阴性的老年患者60例，为排除肥胖对Ghrelin及Leptin的影响，患者于胃镜检查后测量身高、体质量，计算BMI。根据中国成年人体重标准：选取体质量指数BMI在18.5～24.0 kg/m2范围的老年患者入组。分为两组：老年反流性食管炎组30例，男15例，女15例；年龄（65～88）岁，BMI（21.86～23.54）kg/m2，均经内窥镜胃镜检查按洛杉矶标准确诊为反流性食管炎，即内镜下可见食管远端的黏膜破损，并进行内镜下分级[2]。老年正常对照组30例，男16例，女14例；年龄（62～86）岁，BMI（21.68～23.78 kg/m2）。两组的性别、年龄、BMI比较差异无统计学意义（P>0.05）。排除标准：①消化性溃疡；②食道裂孔疝；③消化道肿瘤或合并全身其他系统及器官恶性肿瘤；④严重肝肾功能不全；⑤有胃镜检查禁忌症；⑥近期口服糖皮质激素、抗胆碱、抗抑郁药、镇静药、钙拮抗剂等药物。所有患者均签署知情同意书。

1.2 血清标本采集方法

空腹8～12 h，胃镜检查前上午8点采集5 mL全血，4℃下2000 r/min离心15 min，取血清置于-70℃冰箱冷冻保存，集中检测Ghrelin和Leptin，检测采用ELISA法，应用试剂盒（美国CUSABIO公司），所有样本均按照试剂盒方法操作。

1.3 免疫组化方法

胃镜检查由有经验丰富的内镜医生操作，老年反流性食管炎组及老年正常对照组均选取胃体组织。活检取组织2块进行Ghrelin及Leptin的免疫组织化学染色，所有标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，5 μm连续切片，常规HE染色。免疫组织化学采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（SP法），其中Ghrelin的一抗是羊抗人Ghrelin多克隆抗体（1∶150）（美国Phoenix公司），瘦素的一抗是兔抗人瘦素多克隆抗体（1∶150）（北京博奥森生物有限公司），二抗均为HRP聚合体（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1.4 免疫组化结果判断

Ghrelin和Leptin在细胞浆中出现黄色或褐色染色者为阳性。阳性判断采用半定量标准，即根据细胞染色强度和染色细胞的百分比之积来判断。染色强度判定：淡黄色为弱染色，褐色为中等染色，深褐色为强染色。染色强度积分为：无染色0分，弱染色1分，中等染色2分，强染色3分。染色细胞的百分比分为：无细胞染色0分，<25%细胞染色1分，25%～50%细胞染色2分，>50%细胞染色3分。若两者积分之和>2，则为阳性，≤2则为表达阴性[3]。

1.5 统计学方法

使用SPSS11.5软件进行分析，对计量资料采用t检验、计数资料采用χ2检验，相关分析采用pearson检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 老年反流性食管炎组与正常对照组血清Ghrelin和Leptin免疫组化结果比较

老年反流性食管炎组患者内镜下LA分级，其中A级14例、B级10例，C级6例，无D级病例。老年对照组内镜下所见食管黏膜均正常。

2.2 老年反流性食管炎组与正常对照组血清Ghrelin与Leptin水平比较

老年反流性食管炎患者血清Ghrelin水平低于老年正常对照组（P=0.041），老年反流性食管炎组血清Ghrelin水平根据洛杉矶分级，A级（14.02±2.11）ng/mL，B级（13.66±1.25）ng/mL，C级（13.21±2.33）ng/mL，三组之间无统计学意义（P>0.05）。老年反流性食管炎组血清Leptin水平高于老年正常对照组（P=0.014）。反流性食道炎患者血清Leptin水平根据洛杉矶分级，A级（14.18±1.69）pg/mL，B级（15.25±1.98）pg/mL，C级（14.98±1.93）pg/mL，三组之间无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 老年反流性食管炎组与正常对照组血清Ghrelin和Leptin水平比较（s）

表1 老年反流性食管炎组与正常对照组血清Ghrelin和Leptin水平比较（s）

注：与对照组比较，*t=2.62，*P=0.041；**t=3.57，**P=0.014

组别n血清G h r e l i n水平（n g / m L）血清L e p t i n水平（p g / m L）老年反流性食管炎组老年正常对照组3 0 3 0 1 3 . 7 4 ± 1 . 8 7*1 5 . 2 7 ± 2 . 5 7 1 4 . 6 9 ± 1 . 8 7**1 3 . 1 2 ± 1 . 5 7

2.3 老年反流性食管炎组与正常对照组胃黏膜Ghrelin与Leptin表达比较

老年反流性食管炎组患者胃黏膜Ghrelin表达阳性14例，阳性率（47%）低于正常对照组（76%），差异具有统计学意义（P<0.05）。而老年反流性食管炎组胃黏膜Leptin表达阳性率（83%）高于正常对照组（50%），差异有高度统计学意义（P<0.01），见图1～2，表2。

2.4 血清Ghrelin与Leptin水平的相互关系

老年反流性食管炎组患者血清Ghrelin与血清Leptin水平呈负相关（r=-0.337，P<0.05），但正常对照组血清Ghrelin与血清Leptin水平无相关性（r=0.072，P>0.05）。见图3~4。

图1 胃黏膜Ghrelin表达阳性（×800）

图2 胃黏膜Leptin表达阳性（×800）

表2 老年反流性食管炎组与正常对照组胃黏膜Ghrelin和Leptin表达比较

图3 老年反流性食管炎组患者血清Ghrelin水平与Leptin相关性

图4 正常对照组血清Ghrelin与Leptin水平相关性

3 讨论

近年来随着生活水平的提高，反流性食管炎的发病率有逐年增长的趋势，且随年龄的增加而增加[4，5]。反流性食管炎发病机制目前尚不完全清楚，目前认为与食管抗反流机制减弱、食管壁清除能力降低及胃排空延迟等因素有关。其中食道抗反流机制异常，包括一过性食道下端括约肌松弛（TLESR）是导致胃食管反流的主要发病机制，而胃排空延迟、胃食管压力梯度增加，可触发食道下端括约肌的松弛。近年来已有报道反流性食管炎与胆囊收缩素、胃动素、胃泌素、血管活性肠肽等多种胃肠激素有关，1999年日本科学家首次发现了人生长激素释放多肽（Ghrelin）[6]，研究发现Ghrelin不仅能够促进生长激素的释放，而且具有促进饮食、促进胃肠蠕动[7]、降低血压、抑制炎性因子释放等生物学作用[8]。Ghrelin主要由胃黏膜层的A/X细胞产生，分布于人体多种组织器官，其中胃底及胃体组织中含量最高，其分子结构和胃动素十分相似[9]，可促进胃肠运动。国外有资料表明Ghrelin在胃肠功能调节上具有重要意义，在清醒的大鼠和小鼠Ghrelin可促进胃排空，加快小肠蠕动作用，对人的研究亦发现Ghrelin能加速正常人胃排空效应[10]，外源性Ghrelin可加速胃排空，并可刺激大鼠和人的消化间期胃肠运动[11，12]。本研究发现老年反流性食管炎患者血清Ghrelin水平及胃黏膜Ghrelin表达阳性率（47%）均低于老年正常对照组（P<0.05），且从不同食道反流炎分级观察血清Ghrelin水平是逐级降低的，虽然A、B、C三级之间差异无统计学意义，可能需加大样本量观察，说明Ghrelin的下降对老年反流性食管炎患者的胃排空延迟起一定作用。

瘦素（Leptin）是肥胖相关基因6编码的蛋白产物[13]，主要在脂肪组织中生成、分泌，包括胃黏膜和胃底腺等也具有合成和分泌Leptin的功能。作为一种胃肠激素，有研究表明，瘦素可能是通过迷走-胆碱能神经及CCK-A受体介导，抑制胃运动。本研究发现老年反流性食管炎患者血清Leptin水平及胃黏膜组织Leptin表达阳性率（83%）均高于正常对照组（P<0.05），说明老年反流性食管炎患者瘦素水平增高对胃肠动力方面也有影响。虽然反流性食管炎组血清Leptin水平在A、B、C三级之间差异无统计学意义，可能与Leptin受体可饱和性有关。

有资料表明Leptin与Ghrelin两者之间的作用相反。国内有动物实验表明Leptin可以降低胃运动收缩幅度，促进空腹饥饿运动向餐后饱食转变[14]，从而延缓胃排空。Ghrelin释放增加通过迷走传入神经把信号传给孤束核（NTS），再激活下丘脑弓状核（ARC）网络增强摄食和促进胃MMCⅢ期运动，这条通路受Leptin控制，而Ghrelin通过刺激下丘脑不同的神经肽来对抗Leptin。Ghrelin和Leptin是一对生物学效应相对抗的脂肪因子，共同参与调解机体的能量代谢，Ghrelin能剂量依赖性地减弱Leptin对摄食的抑制性作用，给予Ghrelin后可以引起Leptin的mRNA表达增强，并抵消Leptin引起的抑制神经肽Y（NPY）mRNA表达下降[15]。另一方面Leptin也下调Ghrelin的表达，并抑制Ghrelin引起的钙内流，进而抑制食欲，本研究亦发现老年反流性食管炎组患者血清Ghrelin、血清Leptin水平的相关性分析结果呈负相关（r=-0.337，P<0.05），而正常对照组血清Ghrelin、血清Leptin水平则无相关性（r=0.072，P>0.05）。由此我们推测老年反流性食管炎患者中血清Leptin水平的升高可能导致血清Ghrelin水平下降，进而导致胃排空延迟，使胃内压力升高，诱发TIESR，进一步促使老年性反流性食管炎的发生。

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Serum levels and tissue expression of ghrelin and leptin in elderly patients with reflux esophagitis

WU MinDAI YiyangLI ChaoxiPENG FangCHEN LingyanWENG Xiumei
Department of Gastroenterology，Zhejiang Hospital，Hangzhou310013，China

Objective To investgate the serum level of ghrelin and leptin in the elderly patients with reflux esophagItis and gastric mucosal.Methods A total of 30 elderly patients with reflux esophagitis and 30 of healthy control cases were selected，serum ghrelin and leptin were tested by ELISA and expression of ghrelin and leptin were decteted by immunohistochemistry.Results The serum level of ghrelin in the reflux esophagitis group was significantly lower than in the control group，the difference was significant（P<0.05）.The serum level of leptin in reflux esophagitis group was sig nificantly higher than in the control group，the difference was significant（P<0.05）.The expression positive rates of ghrelin in reflux esophagitis group（47%）were significant lower than in the control group（76%），the difference was significant（P<0.05）.The expression positive rates of leptin in reflux esophagitis group（83%）were significant higher than the control group（50%），the difference was significant（P<0.05）.There were negative correlation between the serum level of leptin and the serum level of ghrelin in patients with reflux esophagitis.Conclusion The level of ghrelin and leptin may be related to pathogenesis of reflux esophagitis.It is showed that the ghrelin and leptin may have opposite effect on each other in the pathogenesis of reflux esophagitis.

Reflux esophagitis；Ghrelin；Leptin

R571

A

1673-9701（2015）24-0021-04

2015-04-21）

浙江省医药卫生科技计划项目（2012KYA002）