小青龙汤动物实验研究进展

2015-02-11赖锦茂杨泽填杨鸿权

亚太传统医药 2015年13期

关键词：小青龙汤鼻炎气道

赖锦茂，杨泽填，杨鸿权，张斌

(广州中医药大学第一临床医学院，广东广州510405)

小青龙汤动物实验研究进展

赖锦茂，杨泽填，杨鸿权，张斌

(广州中医药大学第一临床医学院，广东广州510405)

小青龙汤作为中医十大名方之一，其功效卓著，备受后人推崇，近年来对其研究越来越热门，其中以实验动物研究最多。搜索数据库中2010-2014年关于小青龙汤动物研究的相关文献，对小青龙汤近五年的动物实验研究进行综述，发现小青龙汤动物实验研究主要集中在对哮喘、变应性鼻炎、肺炎型心脏病等疾病机理和机制方面。

小青龙汤；动物实验；综述

小青龙汤出自医圣张仲景的《伤寒论》，被誉为治喘神方，备受后人推崇。小青龙汤由麻黄、芍药、细辛、炙甘草、干姜、桂枝、五味子、半夏八味药组成，配伍严谨，体现温阳、益气、化饮的作用。临床上广泛用于治疗咳嗽、哮喘、肺源性心脏病等外寒里饮疾病。近年来，随着小青龙汤在临床上使用范围的不断拓展和延伸，其治疗相关疾病作用机理的研究越来越受关注，针对小青龙汤的动物实验研究主要围绕哮喘、过敏性鼻炎、肺源性心脏病等疾病展开。笔者通过查阅2010-2014年与小青龙汤动物实验有关的相关文献，对小青龙汤近五年来的动物实验研究进展做相关综述。

1 小青龙汤治疗哮喘机理研究

用大鼠、小鼠或者豚鼠进行造模，造模方法为以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。

1.1 INF-γ、IL-4途径

谢培洪[1]通过实验发现哮喘小鼠模型组血清中INF-γ、IL-4均升高，IL-4升高程度远高于INF-γ，提示Th2细胞因子的优势地位可能是小鼠哮喘发作的免疫学机制。小青龙汤组中INF-γ明显比哮喘模型组高，而IL-4升高程度低于哮喘模型组，提示小青龙汤治疗哮喘的作用机制之一为升高哮喘发作小鼠血清INF-γ，拮抗IL-4分泌水平，从而达到调节Th1/Th2平衡。董翠香等[2]研究小青龙汤对哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)中INF-γ、IL-4水平及气道炎症的影响，也得出小青龙汤能够升高肺泡灌洗液中INF-γ水平，降低IL-4水平，调节Th1/Th2失衡，从而有效改善气道炎症，其与人参五味子汤二步序贯治疗效果及吸入布地奈德相似。陈红霞等[3]研究小青龙汤、射干麻黄汤及其合方对大鼠哮喘模型肺泡灌洗液INF-γ/IL-4的影响，发现小青龙汤能有效缓解哮喘模型大鼠临床表现及气道炎症，其作用机制可能是纠正Th1/Th2失衡，小青龙汤与射干麻黄汤合方比单方治疗效果更显著。郅琳等[4]发现小青龙汤能够明显降低BALF中炎症细胞数量，并能够明显升高INF-γ水平，降低IL-4水平，改善哮喘气道炎症。

1.2 TGF-β1、Smad3途径

杨帆[5-6]在探究小青龙汤对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达的影响时发现，造模后实验组大鼠支气管管壁厚度比正常对照组平滑肌厚度显著增厚，小青龙汤组与哮喘模型组相比，增厚程度低，免疫显示哮喘模型组和小青龙汤组TGF-β1、Smad3蛋白表达明显高于正常组，但小青龙汤组蛋白表达明显低于哮喘模型组，从而提出小青龙汤可能通过影响哮喘大鼠肺组织中TGF-β1、Smad3蛋白表达来拮抗气道重塑。

1.3 TLR4、P-Akt途径

莫碧文等[7]研究TLR4、P-Akt在哮喘大鼠气道平滑肌迁移中的作用及小青龙汤对其影响。造模后测定气道阻力，观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润情况，通过图像分析软件测定支气管管壁面积，平滑肌面积和平滑肌至上皮下基底膜距离；免疫组化检测TLR4、P-Akt蛋白表达。发现TLR4和P-Akt参与气道平滑肌的迁移，小青龙汤组的蛋白表达明显低于模型组，从而得出小青龙汤可能通过抑制TLR4和P-Akt的表达抑制哮喘气道平滑肌的迁移，从而在哮喘气道重塑方面发挥一定的作用。

1.4 IL-5、IL-13途径

殷彬等[8]通过实验发现哮喘模型大鼠血清中IL-5及IL-13含量异常增高，而小青龙汤组则可以降低IL-5及IL-13含量。国外有研究证实IL-5可以增强EOS对血管内皮细胞的黏附能力，延长其存活时间，强化EOS毒性蛋白的释放，进而增强EOS参与哮喘气道炎症的效应[9]。IL-4/IL-5/IL-13都属于Th2类分泌细胞因子，Kumar等[10]研究证实IL-13通过诱导趋化因子产生炎症反应，调控转化生长因子使肺组织纤维化等作用，在支气管哮喘的发生发展中起非常重要的作用。

1.5 Foxp3+调节性T细胞途径

吴奎等[11]研究小青龙汤对哮喘小鼠气道变应性炎症的作用，观察哮喘模型小鼠外周血和BALF中Foxp、CD T细胞的比例，发现小青龙汤可有效抑制哮喘模型小鼠气道变应性炎症，作用途径可能为诱导Foxp调节性T细胞的产生、增加IL-10的分泌，进而抑制Th2型免疫反应。

1.6 MMP-9、T1MP-1途径

韩征利等[12]研究小青龙汤和人参五味子汤二步序贯治疗对于哮喘小鼠呼吸道炎症与重塑的影响，研究指标为基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白组织酶抑制剂-1(T1MP-1)水平，结果发现小青龙汤组和人参五味子汤序贯治疗组MMP-9、T1MP-1表达水平和MMP-9/T1MP-1明显低于哮喘组，得出二步序贯治疗能有效抑制呼吸道炎症和重塑作用，一定程度上可以替代布地奈德吸入治疗。

2 小青龙汤治疗变应性鼻炎机理研究

王树鹏等[13]研究加味小青龙汤及其拆方对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜病理形态和IL-4含量的影响，发现加味小青龙汤及其拆方作用下的变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水肿、充血、炎症细胞浸润嗜酸性粒细胞浸润上皮细胞坏死不完整现象均较模型组轻，且IL-4含量也明显降低，提示了小青龙汤治疗变应性鼻炎的作用。王维赋等[14]研究麻黄附子细辛汤和小青龙汤对过敏性鼻炎豚鼠的作用，观察指标为治疗前后的行为学体征积分、血液组胺含量和鼻黏膜切片病理变化。实验结果为用药组治疗后体征积分和血液组胺含量均有降低，鼻黏膜修复较造模组明显，表明麻黄附子细辛汤和小青龙汤均能改善过敏性鼻炎豚鼠症状，对血液组胺有降低和修复鼻黏膜作用，前者效果优于后者。李丹等[15]观察小青龙汤对过敏性鼻炎大鼠症状积分及血清IgE 、IL-12、LTC4水平的影响，提出小青龙汤治疗过敏性鼻炎可能是通过提高TH1类细胞因子IL-12水平，使Th1/Th2比例恢复平衡，降低血清中IgE水平，抑制过敏反应物质LTC4释放，实现降低炎性介质分泌从而改善黏膜水肿，缓解鼻炎症状。

3 小青龙汤治疗肺炎型心脏病机理研究

王浩等[16]研究小青龙汤对肺源性心脏病大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)、NO及内皮素-1(ET-1)的影响，造模后大鼠出现咳嗽，气促，嘴唇紫绀，给药后症状改善，与模型组相比给药组ANG-Ⅱ、ET-1和NO含量具有显著差异。从而提出小青龙汤通过调节ANG-Ⅱ、ET-1和NO含量的动态平衡有效改善大鼠肺动脉高压。有研究者通过实验发现小青龙汤能有效改善肺源性心脏病大鼠的肺功能、肺动脉高压及右心肥厚程度[17]。

4 小青龙汤在其他方面的机理研究

张银萍等[18]观察小青龙汤对体外培养RBL-2H3细胞增殖及凋亡的影响，发现小青龙汤对体外培养RBL-2H3细胞有抑制增殖和促凋亡的作用，效果呈一定的浓度依赖性，提示小青龙汤治疗过敏性鼻炎可能与此有关。李科宇等[19]在探讨大鼠体内小青龙汤对茶碱药动力学的影响时发现小青龙汤组与对照组相比，茶碱清除率显著变小，清除半衰期和体内滞留时间显著延长，得出小青龙汤可能抑制大鼠体内茶碱代谢过程的结论。此外王筠默[20]将小青龙汤及其拆方制成醇提水剂，用离体兔耳灌流法，发现给药后小青龙汤及其拆方对离体兔耳血管灌流液的流出量较给药前明显增加，现象持续5～10min；将药液注射到大鼠腹腔，与对照组相比，发现大鼠足底温度先升温后降温的作用，机理尚不清楚。

5 结语

小青龙汤是治疗外感风寒、寒饮内停喘咳的常用方。其自古以来就备受各个医家的喜爱，临床运用甚为广泛。本方主治外感风寒、寒饮内停之证。风寒束表，皮毛闭塞，卫阳被遏，营阴郁滞，故见恶寒发热、无汗、身体疼痛。素有水饮之人，一旦感受外邪，每致表寒引动内饮。《难经·四十九难》说：“形寒饮冷则伤肺。”水寒相搏，内外相引，饮动不居，水寒射肺，肺失宣降，故咳喘痰多而稀；水停心下，阻滞气机，故胸痞；饮动则胃气上逆，故干呕；水饮溢于肌肤，故浮肿身重；舌苦白滑，脉浮为外寒里饮之佐证。对此外寒内饮之证，若不疏表而徒治其饮，则表邪难解；不化饮而专散表邪，则水饮不除。故治宜解表与化饮配合，一举而表里双解。小青龙汤方中麻黄、桂枝相须为君，发汗散寒以解表邪，且麻黄又能宣发肺气而平喘咳，桂枝化气行水以利里饮之化；干姜、细辛为臣，温肺化饮，兼助麻、桂解表祛邪；然而素有痰饮，脾肺本虚，若纯用辛温发散，恐耗伤肺气，故佐以五味子敛肺止咳、芍药和养营血，二药与辛散之品相配，一散一收，既可增强止咳平喘之功，又可制约诸药辛散温燥太过之弊；半夏燥湿化痰，和胃降逆，亦为佐药；炙甘草兼为佐使之药，既可益气和中，又能调和辛散酸收之品。药虽八味，配伍严谨，散中有收，开中有合，使风寒解、水饮去、宣降复，则诸症自平。近年来，随着小青龙汤在治疗哮喘、过敏性鼻炎、肺源性心脏病等疾病时取得了显著的疗效，对其的作用机理研究越来越受关注，并已经取得了一定的成果。从以上论述可知小青龙汤对机体许多靶点都有调节作用。目前对小青龙汤功效的研究主要集中于其对某种、某类疾病治疗效果的直观观察，针对其作用机制的研究虽有一些，但研究的广度和深度远远不够，因此尚需要进一步大量的研究来明确其作用机制。

[1] 谢培洪.小青龙汤及其拆方对哮喘发作期小鼠血清Th1/Th2影响的实验研究[D].郑州：河南中医学院，2014.

[2] 董翠香，曲政海，韩征利，等.人参五味子汤和小青龙汤二步序贯治疗对哮喘小鼠肺泡灌洗液INF-γ、IL-4水平及气道炎症的影响[J].山东医药，2011，51(13)：26-28.

[3] 陈红霞，周兆山.小青龙汤、射干麻黄汤及其合方对大鼠哮喘模型肺泡灌洗液IL-4/INF-γ影响的实验研究[J].吉林中医药，2010，30(4)：360-361.

[4] 郅琳，胡久略.小青龙汤对支气管哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞及 IL-4,INF-γ水平的影响[J].中国实验方剂学杂志，2012,18(21)：265-267.

[5] 杨帆.小青龙汤对哮喘大鼠肺组织中TGF-β1，Smad3蛋白表达的影响[D].桂林：桂林医学院，2014.

[6] 杨帆，易桂生.小青龙汤对哮喘大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响[J].河南中医，2014，34(6)：1041-1043.

[7] 莫碧文，苏海英，韦江红，等.TLR4、P-Akt在哮喘大鼠气道平滑肌迁移的作用及小青龙汤对其影响[J].中国药理学通报，2011，27(5)：723-728.

[8] 殷彬，周兆山，胡海波，等.小青龙汤、射干麻黄汤及其合方对哮喘模型大鼠血清IL-5及IL-13的影响[J].山东中医杂志，2011，30(5)：337-339.

[9] 卞雅莉.支气管哮喘的中医药基础研究进展[J].南京中医药大学学报，2005,21(5)：337.

[10] KUMAR RK,HERBERT C,FOSTER PS.Expression of growth factors byairway epithelial cells in a model of chronic asthma:Regulation andrelationship to subepithelial fibrosis[J]. Clinical and Experimental Allergy，2004，34(4)：567-575.

[11] 吴奎，王彦，毕玉田，等.小青龙汤对哮喘小鼠气道变应性炎症作用的研究[J].重庆医学，2014，43(17)：2145-2148.

[12] 韩征利，董翠香，曲政海，等.小青龙汤和人参五味子汤二步序贯治疗对于哮喘小鼠呼吸道炎症与重塑的影响[J].实用儿科临床杂志，2011,26(4):289-292.

[13] 王树鹏，郭晓东，李海波，等.加味小青龙汤及其拆方对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜病理形态和IL-4含量的影响[J].环球中医药，2012，5(3)：170-174.

[14] 王维赋，谭晓梅，梁少瑜，等.麻黄附子细辛汤和小青龙汤对过敏性鼻炎豚鼠作用的研究[J].中国实验方剂学杂志，2011,17(7)：176-178.

[15] 李丹，吕妍，唐方.小青龙汤对过敏性鼻炎大鼠症状积分及血清IgE IL-12 LTC4水平的影响[J].四川中医，2014,32(4):70-72.

[16] 王浩，李泽庚，彭波，等.小青龙汤对肺源性心脏病大鼠ANG-Ⅱ、NO及ET-1的影响[J].中华中医药杂志，2013,28(10)：3052-3054.

[17] 王浩，李达，徐彬，等.宣肺利水法对肺源性心脏病大鼠心肺相关指标的改变[J].世界科学技术——中医药现代化，2013，15(4)：760-761.

[18] 张银萍，朱吾元，赵变，等.小青龙汤对体外培养RBL-2H3细胞增殖及凋亡的影响[J].中华中医药学刊，2014，32(6)：1443-1445.

[19] 李科宇，杨长青，柴桢楠，等.在大鼠体内小青龙汤对茶碱药动学的影响[J].时珍国医国药，2011，22(3)：758-759.

[20] 王筠默，胡月娟，徐军，等.小青龙汤及其拆方对兔耳血管及大鼠足蹠温度的影响[J].中成药研究，1985(8):41.

(责任编辑：魏晓)

2015-01-27