T-SPOT.TB与结核蛋白芯片检测在结核性脑膜炎辅助诊断中的对比分析

吕翠环，郑立恒，王 红，张聪瑶，李玉静，朱桂云

(1.河北省胸科医院检验科,河北 石家庄 050041；2.河北省胸科医院病理科,河北 石家庄 050041)



·论 著·

T-SPOT.TB与结核蛋白芯片检测在结核性脑膜炎辅助诊断中的对比分析

吕翠环1，郑立恒1，王 红1，张聪瑶1，李玉静1，朱桂云2

(1.河北省胸科医院检验科,河北 石家庄 050041；2.河北省胸科医院病理科,河北 石家庄 050041)

目的探讨结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(Tcellsspottestoftuberculosisinfection,T-SPOT.TB)与结核蛋白芯片检测在结核性脑膜炎(tuberculousmeningitis，TBM)中的辅助诊断价值。方法采集TBM患者血标本分别进行T-SPOT.TB与结核蛋白芯片检测,并对2种方法进行评价分析。结果T-SPOT.TB检测TBM的敏感度和准确度分别为71.88%、77.97%，高于结核蛋白芯片检测的48.78%、60.29%(P<0.05或<0.01)，T-SPOT.TB和结核蛋白芯片检测TBM的特异度差异无统计学意义(85.19% vs 77.78%，P>0.05)。结论在辅助诊断TBM方面T-SPOT.TB检测方法优于结核蛋白芯片检测。

结核,脑膜；酶联免疫斑点测定；结核蛋白芯片检测doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.11.030

结核性脑膜炎(tuberculousmeningitis，TBM)是较常见的肺外结核病之一，其临床表现复杂、多样，病情进展迅速，诊断和鉴别诊断较为困难，易造成误诊而带来严重后果[1]。因此，寻找一种无创、快速和准确的诊断方法是提高TBM诊断水平的关键。当前较常用的快速诊断结核性脑膜炎的方法中涂片镜检和聚合酶链反应敏感度较差,且脑脊液标本不易获取。本研究以TBM患者的血液标本进行结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(Tcellsspottestoftuberculosisinfection,T-SPOT.TB)检测γ干扰素释放水平，并与结核蛋白芯片法检测比较，探讨二者对TBM的诊断价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年5月—2014年10月在河北省胸科医院临床确诊的TBM患者73例，均符合TBM诊断标准[2]。随机分为：T-SPOT.TB组32例，男性18例，女性14例，年龄11～74岁,平均(38.6±18.1)岁；结核蛋白芯片检测组41例，男性23例，女性18例，年龄11～77岁，平均(38.1±16.2)岁。所有患者均出现不同程度的发热、头痛、呕吐症状，脑膜刺激征阳性。另选取非TBM患者27例作为特异度检测的对照组，男性15例,女性12例，年龄7～78岁，平均(39.5±16.4)岁，其中病毒性脑炎18例,化脓性脑膜炎9例。

1.2 试剂与仪器T-SPOT.TB试剂盒来自英国OxfordImmunotech公司，结核蛋白芯片试剂盒及PBT-X2型生物识别判读仪均来自南京大渊生物技术公司。

1.3 方法

1.3.1T-SPOT.TB检测 ①外周血单个核细胞的分离、收集与计数；②体外抗原刺激与孵育；③结果判定：阴性对照孔斑点数为0～5个，抗原A或抗原B检测孔计数-阴性孔计数≥6判为阳性；如果阴性对照孔斑点数≥6，检测孔斑点数≥2倍阴性孔斑点数判为阳性。操作过程严格按照说明书进行。

1.3.2 结核蛋白芯片检测 由南京大渊生物技术公司应用该公司生产的结核抗体蛋白检测系统对血清标本进行检测，根据系统芯片阅读仪设置参数自动判别检测结果。采用本芯片检测结核分枝杆菌共有3个指标，分别是脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomanan,LAM)、相对分子质量16 000蛋白和38 000蛋白，其中任何1个指标阳性均计为结核分枝杆菌抗体阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0统计学软件分析数据，计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

TBM组和对照组患者均进行T-SPOT.TB和结核蛋白芯片检测。若以TBM组T-SPOT.TB和结核蛋白芯片阳性结果判为真阳性(a)、阴性结果判为假阴性(c)，对照组T-SPOT.TB和结核蛋白芯片阳性结果判为假阳性(b)、阴性结果判为真阴性(d)，按照敏感度=a/(a+c)×100%，特异度=d/(b+d)×100%，准确度=(a+d)/(a+b+c+d)×100%，计算出敏感度、特异度、准确度。

2种检测方法中敏感度比较差异有统计学意义(χ2=3.960,P=0.047)，特异度比较差异无统计学意义(χ2=0.491,P=0.480)，准确度比较差异有统计学意义(χ2=4.573,P=0.003)，见表1。

表1 2种检测方法的敏感度、特异度和准确度 (例数)

3 讨 论

随着相关结核感染性疾病诊断技术的不断问世，T-SPOT.TB检测成为诊断肺外结核病的重要手段，尤其是对TBM[3],T-SPOT.TB已成为目前敏感度较高的细胞学检测技术[4]。结核蛋白芯片反应是一种体液免疫，是由体内B细胞产生的免疫球蛋白,运用蛋白芯片技术联合检测LAM、相对分子质量38 000蛋白与16 000蛋白也可提高灵敏度[5]，本研究就2种检测方法的敏感度、特异度、准确度进行分析对比。

T-SPOT.TB原理是机体受到结核分枝杆菌感染后产生的记忆性T细胞，在再次受到结核分枝杆菌特异性抗原刺激时会释放γ干扰素，可以在体外对释放的γ干扰素水平或能有效释放γ干扰素的T细胞进行定量检测，从而判断患者是否为结核分枝杆菌的感染者。结核杆菌蛋白芯片检测原理是以微孔滤膜为载体,利用微数组技术将纯化的结核分枝杆菌LAM、基因工程生产并纯化的结核分枝杆菌16 000蛋白和38 000蛋白3种抗原固定在同一膜片上,并利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用,使抗原抗体反应在微孔滤膜上快速进行,以免疫金为标记物在膜上直接显色,通过芯片识别仪,在专门软件的支持下对不同抗原点阵的灰度值进行分析，实现3种抗原对抗体同步检测,其中任何1个指标阳性均提示结核分枝杆菌抗体阳性，从而快速对结核菌感染情况作出诊断。

本研究以化脓性脑膜炎和病毒性脑炎为对照组，对TBM患者血标本分别进行T-SPOT.TB及结核蛋白芯片检测，T-SPOT.TB检测的敏感度和准确度高于结核蛋白芯片检测(P<0.05或<0.01)，特异度差异无统计学意义(P>0.05)。T-SPOT.TB检测TBM的敏感度不同于曾剑锋等[6]、韦海旭等[7]的研究， 也低于肺结核及结核性胸膜炎等其他结核性疾病[8-9]。γ干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子[10]，在大多数免疫力正常的感染者中，获得性免疫能够控制却不足以清除结核感染，吞噬了结核分枝杆菌的巨噬细胞被纤维包裹形成肉芽肿而使感染局限，这时机体呈现一种无症状的隐性感染状态，而结核特异性记忆型T细胞在机体中长期存在[11]。机体再次感染结核菌后，受抗原刺激，记忆型T细胞能迅速活化增殖，释放γ干扰素。本研究TBM较一般结核患者检测阳性率低的原因，可能是部分TBM患者早期应用激素治疗从而影响到细胞免疫反应，且γ干扰素表达水平与TBM病程有相关性[12]。

结核蛋白芯片是一种诊断结核的重要标志物，尤其对结核菌检测阴性患者，但其对诊断TMB仍有其局限性[13]。本研究结果显示结核蛋白芯片检测的敏感度为48.78%(20/41)，低于其他结核性疾病[14-15]。可能是由于肺结核胞外菌体脱落复制直接刺激机体产生抗体[16]，另外在结核患者不同患病时间内体内抗体水平也不相同，故检测得出的敏感度也不相同。

T-SPOT.TB检测作为检测TBM的酶免疫学方法，敏感度、准确度较高，但检测价格昂贵，检测时间较长；而结核蛋白芯片检测方法简便、快速。对于临床症状不典型、抗酸杆菌检测阴性的TBM病例，如果条件允许，二者联合检测是更有意义的诊断辅助手段。

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(本文编辑：赵丽洁)

2015-08-24；

2015-10-26

河北省科学技术研究与发展计划(13277794D)；河北省科学技术研究与发展指导计划(132777269)

吕翠环(1966-),女,河北石家庄人,河北省胸科医院主任技师,医学学士,从事临床检验学研究。

R

B

1007-3205(2015)11-1345-03