DLC-1基因在晚期肺癌组织中的表达及与预后的相关性

高湘湘　葛伯建　林兰　刘益飞　金聪慧

DLC-1基因在晚期肺癌组织中的表达及与预后的相关性

高湘湘葛伯建林兰刘益飞金聪慧

目的 探讨DLC-1基因在晚期肺癌组织中的表达水平及与肺癌患者预后的关联。方法 对72例肺癌组织标本及癌旁组织进行DLC-1基因扩增检测，然后对患者随访1年。根据不同组别患者复发转移和生存情况，分析DLC-1基因的表达状况与预后的相关性。结果 72例肺癌标本组织中有9例的DCL-1基因表达阳性（12.5%），与之相对应的癌旁组织中有50例DCL-1基因表达阳性（66.7%），两者之间的差异有统计学意义（χ2=48.27，P＜0.001）。对72例肺癌患者随访1年后发现：DLC-1 基因的表达状况与患者的组织学、组织分化、复发或转移相关（χ2=18.67，P＜0.001），与患者的1年生存相关（χ2=6.81，P＜0.01）。结论 DLC-1基因在肺癌组织中表达缺失或者低表达，并与肺癌患者较差的临床预后相关。

DLC-1基因晚期非小细胞肺癌；mRNA；临床特征

原发性肺癌是世界范围发病率和死亡率都很高的疾病之一［1］。非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要病理类型，绝大多数NSCLC患者就诊时已经为晚期，没有根治性手术的机会，内科治疗在晚期非小细胞肺癌的治疗中占据重要地位［2-4］。目前，针对肿瘤细胞信号传导通路特异性分子靶点抗肿瘤治疗的相关研究和临床应用已成为了热点。作者通过检测DLC-1基因在未经治疗的晚期肺癌组织中的表达状况，并与肺癌患者的预后进行综合分析，来探讨DLC-1基因与肺癌发展的关系，探讨其对于肺癌治疗的预测价值和预后价值。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取江苏省南通市肿瘤医院2012年6月～2014年1月经肺穿刺并经由病理科确诊的IIIB肺癌患者38例及IV期肺癌患者34例，其中男45例，女27例，年龄56～79岁，平均年龄（62.5±6.2）岁，均接受铂类为主的全身化疗。患者取材前未接受过放疗、化疗或靶向治疗，肝、肾功能正常，排除孕妇、哺乳期妇女、精神疾病患者。每例肺癌标本均有自身配对的癌旁正常组织作为对照。获取标本后立即置入液氮冷却，再转移至-70℃冰箱长期保存。

1.2主要仪器

电泳仪购自Pharmacia Fine Chemicals公司，型号ECPS 3000/150；紫外分光光度计定量购自日本日立公司，型号U-2001；PCR扩增仪购自德国Biometra公司，型号Tgradient；高速低温离心机购自美国BECKMAN公司，型号AllegraTM RA 64R；凝胶图像分析仪购自美国BIO-RAD公司，型号Gel Doc XR+。

1.3总RNA提取方法

总RNA的提取对晚期肺癌织组、癌旁组织分别提取总RNA，紫外分光光度计定量。总RNA提取试剂盒R6834购自美国OMEGA公司，具体步骤参照说明书，提取的总RNA立即置于-70℃保存。

1.4逆转录反应操作

逆转录反应对肺癌织组、癌旁织组分别取3 μg总RNA按照试剂盒反应体系行逆转录反应。β-actin作为内参照，DLC-1基因及β-actin 引物序列合成均由上海生工公司设计合成，DLC-1基因mRNA引物正义链：5'-GCTT GTGAT TGGCTACGG-3'反义链：5'-CCACCT CTT GCTGT CCCT-3'。β-actin mRNA引物（内参）正义链：5'-CCCT GGACT TCGAGCAAGAGAT- 3'反义链：5'-GTT T TCT GC GCAAGT TAGG-3'。反应体系为20 μl，反应条件为：预变性95℃ 5 min，94℃ 30s，温度退火30 s，72℃ 1 min共35个循环；72℃延伸10 min。取5 μl扩增产物1%琼脂糖凝胶电泳，紫外光照显带观察在电泳条带上出现276 bp为阳性即DLC-1 基因的表达。

1.5评价方法

随访通过电话或住院随访对所有72例患者进行随诊，随访时间为肺癌确诊后1年。

1.6统计学处理

采用SPSS 14.0软件计算数据，计量资料采用t检验；率的比较采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1DLC-1基因的表达状况

肺癌标本组织中的DCL-1基因的阳性表达率为12.5%，与之相对应的癌旁组织中DCL-1基因的阳性表达率为66.7%，两者之间差异有统计学意义（χ2=48.27，P＜0.001），见图1。

2.2DLC-1基因的表达状况与晚期肺癌预后的关系

对72例晚期肺癌患者随访1年，结合DLC-1 mRNA的表达状态分析，可以看出DLC-1基因的表达缺失与患者的组织学、组织分化、复发或转移相关（P＜0.001），与患者的1年生存率也相关（P＜0.01）。

2.3生存分析

72例患者在随访期间共有6例失访，按统计学处理规则，失访数据按存活病例计算。死亡病例51例，均死于肿瘤复发、进展。Kaplan-Meier生存分析显示，两组比较，差异有统计学意义（χ2=5.459，P=0.019），见图2。

3　讨论

DLC-1基因当前被认为是一个新的抑癌基因，既往有研究者发现它在乳腺癌、卵巢癌、肝癌、前列腺癌等肿瘤组织中存在表达缺失现象［5］。我们的研究拟进一步探索它在晚期肺癌中的表达状况，以及对于临床治疗的预测价值和预后价值。在我们的前期研究中，已经探索了DLC-1基因在早期、可手术肺癌中的表达情况。我们通过RT-PCR方法对可手术的早期肺癌患者，分别取肺癌织组、癌旁织组和良性病变组织进行DLC-1基因扩增检测，发现DLC-1基因的表达缺失与肺癌的发生密切相关。肺癌组织中，DLC-1表达缺失的状况与癌旁组织和良性病变差异明显，而且DLC-1基因表达的缺失与否，与肿瘤的分期相关：对于Ⅱ期和Ⅲ期患者，DLC-1基因表达缺失的比例明显增高，差异有统计学意义。在此项研究中，我们关注DLC-1基因在晚期肺癌及癌旁组织中的表达情况，以及与患者复发转移及生存的关系。我们发现对于晚期肺癌，DLC-1基因在肺癌组织中明显呈表达缺失的状态，72例肺癌组织，只有9例表达阳性；与之相对应的是癌旁组织50例表达阳性，两者之间差异有统计学意义（χ2=48.27，P＜0.001）。将患者随访1年的数据与DLC-1基因的表达情况综合分析，我们发现对于未经治疗的晚期肺癌，DLC-1基因的表达缺失与差的预后相关。而且相对于DLC-1基因表达阳性的患者，DLC-1基因表达缺失患者更加容易发生复发或者转移，而且1年生存率也低于阳性组。这进一步验证了DLC-1基因作为抑癌基因，在晚期肺癌的发展中起到了一定的作用［6］。

肺癌的遗传学改变相关研究热点，主要集中于两个方面：第一，原癌基因表达、相关生长因子表达及其受体的研究［7］。第二，抑癌基因和其他生长调节基因功能丧失。这些基因的异常改变，除了与肺癌的发生有关外，还与其浸润、转移和复发有关，间接或直接地影响到肺癌的预后。DLC-1定位于人类染色体8p21-22，这一区域在很多恶性肿瘤中经常发生缺失，如肠癌、肝癌、乳腺、鼻咽癌、前列腺癌等。Wong等［8］研究发现DLC-1基因表达产物为RhoA和Cdc42特异性的GTP酶激活蛋白，与调控细胞增殖和黏附的信号传导通路关系密切，主要通过下调Rho的活性而抑制肿瘤。也有研究者证实DLC-1可通过GTP酶活性抑制肿瘤的转移。关于DLC-1基因在晚期肺癌中发挥抑制肿瘤的具体机制，我们还将进一步进行研究。

肺癌是一种异质性很强的疾病，“一刀切”式非选择性人群的研究和治疗逐渐被摒弃。接下来我们还将进一步研究不同的治疗方案与DLC-1基因表达状态之间的关系，希望在不远的将来，我们可以应用分子病理学来区分不同类型的肿瘤，对患者进行真正意义上的个体化治疗，这也会使越来越多的患者真正获益。

［1］Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources， methods and major patterns in GLOBOCAN 2012［J］. International Journal of Cancer，2015，136（5）：E359-E386.

［2］刘霜莉，舒榕. RNAi技术沉默Survivin基因抑制肺癌细胞株H1299增殖并诱导其凋亡［J］. 内科急危重症杂志，2015，21（4）：308-311.

［3］杜萍，刘丽宏. EML4-ALK融合基因阳性分子靶向药物研究进展［J］. 中国新药杂志，2015，24（16）：1856-1861.

［4］田红霞，张绪超，王震，等. MassARRAY质谱分析肺癌多基因突变方法的建立与应用［J］. 中国肿瘤临床，2015，42（17）：856-861.

［5］王展，李湘平，陈娟，等. ERCC1 rs1046282与肺癌铂类联合化疗毒副反应的相关性研究［J］.中国临床药理学与治疗学，2015，20（8）：923-927.

［6］林钢，王准，孙晓江，等. 可手术非小细胞肺癌淋巴结转移特点及其临床意义［J］. 中国肿瘤临床，2015，42（18）：921-925.

［7］Zarogoulidis K，Zarogoulidis P，Darwiche K，et al. Treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC） ［J］. J Thorac Dis，2013，5 suppl 4：S389-S396.

［8］DeSantis CE，Lin CC，Mariotto AB，et al. Cancer treatment and survivorship statistics， 2014［J］. CA: a cancer journal for clinicians，2014，64（4）：252-271.

Expression of DLC-1 Gene in Advanced Lung Cancer and Its Correlation With Prognosis

GAO Xiangxiang GE Bojian LIN Lan LIU Yifei JIN Conghui， Department of Medical Oncology， Affiated Tumor Hospital of Nantong University，Nantong 226001， China

Objective To study the expression of DLC-1 gene in the late lung cancer tissue and its relationship with the clinical characteristics of the patients. Methods DLC-1 gene levels were detected in 72 cases of lung cancer and pericarcinomatous tissues. The patients were followed up for one year. We analyzed the correlation between the expression of DLC-1 gene and clinical prognosis of the patients according the metastasis， recurrence， and overall surial. Results DCL-1 gene expression was positive in 72 cases （12.5%） in 9 cases of lung cancer tissues， and 50 were positive for DCL-1 gene expression （66.7%）in the corresponding adjacent tissues， there was significant difference between them （χ2=48.27， P ＜ 0.001）， of 72 cases of lung cancer patients were followed up for 1 year later found that DLC-1 Gene Expression in patients with tissue， tissue differentiation， recurrence or metastasis associated （χ2=18.67， P＜ 0.001）， and with a 1 year survival （χ2=6.81， P＜0.01）. Conclusion The expression of DLC-1 gene in lung cancer tissue is low or low， and it is associated with poor clinical prognosis in patients with lung cancer.

DLC-1 gene advanced non small cell lung cancer， mRNA，Clinical characteristic

R734

A

1674-9308（2015）33-0045-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.33.030

226001 南通大学附属肿瘤医院肿瘤内科

南通市应用研究科技计划资助项目（BK2012069）通讯作者：葛伯建，E-mail：doctorge@126.com