胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用*

潘文军，范文静，韩　单，李　维，朱宇凝，姜志胜，屈顺林△(南华大学医学院病理生理学教研室，湖南衡阳400;湖南省职业病防治院，湖南长沙40007;南华大学附属第二医院，湖南衡阳400)

胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用*

潘文军1，2，范文静1，3，韩单1，李维1，朱宇凝1，姜志胜1，屈顺林1△
(1南华大学医学院病理生理学教研室，湖南衡阳421001;2湖南省职业病防治院，湖南长沙410007;3南华大学附属第二医院，湖南衡阳421001)

目的:本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中胞红蛋白(CYGB)表达模式;研究CYGB在巨噬细胞氧化应激过程中的作用。方法: (1) Western blot检测RAW264. 7细胞在H2O2刺激不同时间CYGB的蛋白表达水平;检测RAW264. 7细胞在不同浓度H2O2刺激12 h时CYGB蛋白的表达水平。(2)构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型，将RAW264. 7细胞分为4组:对照组、0. 5 mmol/L H2O2处理组、0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB过表达组及0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表达组。12 h后，检测CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD) ;荧光定量PCR检测CYGB和NF-κB在细胞中的表达。结果: (1) Western blot结果显示: H2O2处理6、12和24 h组CYGB表达水平高于对照组，并且在12 h组CYGB表达水平最高，差异有统计学意义(P＜0. 05)。0. 25 mmol/L H2O2、0. 5 mmol/L H2O2和1 mmol/H2O2处理巨噬细胞12 h后CYGB表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P＜0. 05)。(2) Western blot结果显示: 0. 5 mmol/L H2O2处理组、0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB过表达组及0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表达组CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0. 05)。0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB过表达组的CYGB表达最高(P＜0. 05)，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表达组的CYGB表达较0. 5 mmol/L H2O2处理组低，差异有统计学意义(P＜0. 05)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)和ROS检测结果显示:与0. 5 mmol/L H2O2相比，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB过表达组中GSH-Px、SOD升高，LDH、MDA和ROS下降;与0. 5 mmol/L H2O2组相比，0. 5 mmol/L H2O2+ CYGB低表达组中GSH-Px和SOD下降，LDH、MDA和ROS升高。荧光定量PCR检测显示:与正常对照组比较，H2O2处理组CYGB和NF-κB表达均上调(P＜0. 05)。与H2O2对照组比较，CYGB过表达组CYGB表达较高，NF-κB表达较低(P＜0. 05) ; CYGB低表达组CYGB表达较低，NF-κB表达较高(P＜0. 05)。结论: CYGB在巨噬细胞中表达，在H2O2刺激时表达水平增加; CYGB在巨噬细胞氧化应激损伤过程中具有细胞保护作用。

国家自然科学基金资助项目(No.81100212) ;中国博士点基金新教师类联合项目(No.20114324120004) ;中国博士后科学基金资助项目(No.2012M511383) ;湖南省科技厅项目(No.2014FJ3014) ;湖南省教育厅课题(No.11C1094) ;南华大学高层次人才科研启动项目(No.2011XQD24)

△E-mail: qushunlin78@126.com