血管内皮生长因子含量表达与喉癌侵袭转移相关性

血管内皮生长因子含量表达与喉癌侵袭转移相关性

苏凯刘敩蔡郁孙立群

(吉林大学第二医院，吉林长春130041)

摘要〔〕目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)含量变化与喉癌侵袭转移的关系。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测68例喉癌患者血清VEGF含量与病理分级、临床分期及区域淋巴结转移等因素关系。结果喉癌转移组和喉癌非转移组病人血清中VEGF含量表达与正常对照组相比差异显著(P<0.01)。结论VEGF含量检测可以作为喉癌的复发和区域淋巴结转移的客观指标，动态监测对于指导临床治疗有重要意义。

关键词〔〕喉肿瘤；VEGF；ELISA

中图分类号〔〕R735.34〔文献标识码〕A〔

通讯作者：蔡郁(1976- )，女，主管护师，主要从事头颈肿瘤治疗研究。

第一作者：苏凯(1973-)，男，主管技师，主要从事头颈肿瘤研究。

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，喉癌的局部复发、区域淋巴结转移及远端转移是影响患者预后的主要因素〔1〕。因此，寻找与喉癌复发、转移相关的肿瘤标志物对预测肿瘤的生物学行为以及指导治疗有重要的临床意义。本研究应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同时期喉癌患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量变化，观察其与喉癌侵袭转移的相关性，旨在为喉癌的复发、转移及预后判断提供客观指标。

1材料与方法

1.1对象68例喉癌病人血清由我院住院病人提供。均经病理诊断喉鳞状细胞癌，手术前后均进行采血，分离血清冻存。其中男45例，女23例，平均年龄56岁；随机分为喉癌非转移组40例，喉癌转移组28例。根据美国抗癌协会第七版TNM分期，T116例，T224例，T318例，T410例；病理分级，Ⅰ级18例，Ⅱ级26例，Ⅲ级24例。抗人VEGF试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。取40例健康体检人员为对照组。各组年龄性别无明显差别。

1.2方法取-70℃冰箱冻存的人喉癌血清做1∶10倍稀释。分别加入含有VEGF抗体的酶标板内100μl，4复孔，置37℃5%二氧化碳培养箱内反应60min，取出后磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，5min/次。每孔内加入酶标抗体工作液100μl，置37℃ 5%二氧化碳培养箱内反应60min，取出后甩干，PBS洗3次，加入邻苯二胺工作液100μl，避光保温10min，每孔加入终止液50μl,立即于酶标仪492nm处测OD值，根据标准品OD值在半对数坐标纸上作图。结果乘以稀释倍数即为VEGF含量。

1.3统计学方法应用SPSS11.0软件进行t检验。

2结果

2.1手术前后血清中VEGF含量比较与术前比较，术后VEGF含量水平明显下降〔(489.7±16.2)ng/mlvs(261.4±9.6)ng/ml〕(P<0.01)。

2.2各组VEGF含量比较喉癌病人血清中VEGF总体水平高于正常对照组〔(236.8±6.9)ng/ml〕。但是喉癌转移组VEGF含量〔(567.5±19.1)ng/ml〕明显高于非转移组〔(438.4±13.3)ng/ml〕(P<0.01)。

2.3喉癌病人血清VEGF含量表达与病理分级相关性分析呈正相关关系，即病理分级越高，VEGF含量随之升高，Ⅰ级与Ⅱ级Ⅲ级相比〔(451.2±15.3)ng/ml，(495.5±13.8)ng/ml，(51.54±17.4)ng/ml〕差别显著(P<0.05)，但Ⅱ级Ⅲ级相比无显著差异。

2.4喉癌病人血清VEGF含量表达与临床分期相关性T1T2两组间VEGF含量水平〔(447.2±13.4)ng/ml，(468.2±16.2)ng/ml〕无统计学意义(P>0.05)，而T1、T2两组分别与T3、T4〔(521.6±16.8)ng/ml，(563.3±19.3)ng/ml〕相比差异显著(P<0.05)。

3讨论

近年来，喉癌治疗技术有了很大的发展，但是单纯手术治疗效果仍难让人满意，局部复发及远处转移率较高〔2〕。因此，目前许多学者从肿瘤分子生物学角度对喉癌细胞因子进行了研究，发现喉癌组织中VEGF含量异常表达，与肿瘤侵袭复发转移密切相关，肿瘤如果没有新生血管的支持，当肿瘤体积达到1mm3时就会停止生长并发生退化〔3〕，所以抑制VEGF表达就可以阻止肿瘤生长。因为临床分期是制定临床决策的主要因素，临床分期越高证明疾病的侵袭范围就越广〔4〕。所以VEGF含量检测可以作为临床分期的参考指标，为正确的临床分期提供理论依据。本研究结果表明随着病理分级的升高血清中VEGF含量亦升高。文献报道〔5〕，喉癌组织类型和组织分化程度是决定肿瘤行为及预后关键因素,掌握组织病理学的特征，将有助于选择早期筛查肿瘤标志物和有针对性的治疗方案尤其重要。VEGF是血管内皮细胞特异性生长因子，具有促进内皮细胞增殖，提高血管通透性等生物学作用，是目前发现最重要的促进肿瘤血管生成因子，因此，通过血清VEGF水平表达监测喉癌术后复发转移的发展规律，为肿瘤抗血管生成治疗带来了新的思路，由于血清肿瘤标志物的检测方法简便、经济、快速无创、尤其对晚期肿瘤的诊断及疗效的评估，预后判断有较高的临床实用价值。

4参考文献

1李晓明，宋琦.喉癌治疗后复发的外科手术治疗〔J〕.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2014；49(8)：701-3.

2黎学佳，叶进，庄士民,等.慢病毒介入的类表皮生长因子域基因沉默抑制喉癌Hep-2细胞增殖和细胞侵袭的研究〔J〕.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2014;49(8)：643-8.

3ChenHH,ChairL,WangSQ,et al.Angiopoietin-2inhibitsthegrowthoftonguecarcinomawithoutaffectingexpressionofvascularendothelialgrowthfactor〔J〕.IntJOralMaxillofacSurq,2011;40(6):628-32.

4PerignyM,BairatiI,HarveyI,et al.Roleofimmunohistochemicaloverex-pressionofmatrixmetalloproteinasesMMP-2andMMP-11intheprogno-sisofdeathbyovariancancer〔J〕.AmJClinPathol,2008;129(2):226-31.

5E1-KenawyAel-M,LotfyM,E1-KottA,et al.Significanceofmatrixmetal-loproeinase9andCD34expressionsinesophagealcarcinoma;correlationwithDNAcontent〔J〕.JClinGastroenterol,2005;39(9):791-4.

〔2015-03-22修回〕

(编辑李相军/滕欣航)