亚硫酸氢钠穿心莲内酯对人肾小管上皮HK-2细胞的毒性作用

摘要:目的　探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用。方法HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后，在经ASB作用2 h前，分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol·L －1、2-氨基-4(丁基磺酸亚氨)-丁酸(BSO)2 mmol·L －1及30 min前分别加入过氧化氢酶(CAT)1000 U·L －1、环孢素A(CsA)50 μmol·L －1，再经ASB作用24 h，MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总ATP酶(T-ATP)活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS); Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)蛋白的表达。结果　ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖，作用24和48 h后IC 50值分别为19．1±3．6和(11．6±3．9)g·L －1。ASB 20 g·L －1处理HK-2细胞24 h后，G 2/M期细胞由对照组的(23．3±1．0)%增至(37．0±0．8)%(P＜0．01)。与正常对照组相比，ASB 组LDH漏出率和ROS水平明显增加，MMP呈下降趋势;与ASB 20 g·L －1组相比，加入还原剂NAC后，细胞存活率和MMP水平明显增加(P＜0．05)，LDH和ROS水平明显降低(P＜0．05);加入CsA后，细胞存活率显著降低(P＜0．01)，LDH和细胞内ROS水平明显增加(P＜0．05)。随着ASB浓度增加，HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加，GSH，SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高。结论　ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢，改变细胞内氧化还原状态，耗竭细胞内GSH和SOD，导致细胞内ROS大量堆积，引发脂质过氧化作用，破坏细胞膜的通透性，导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放，进而引发细胞凋亡或坏死。

基金项目:国家自然科学基金(81001254);国家科技重大专项(2013ZX09302303);国家科技重大专项(2012ZX09301-003-008)

通讯作者:王全军，Tel:(010)68215929，E-mail: wangquanjunbeijing@163．com

(收稿日期: 2014-11-18接受日期: 2015-05-20)

(本文编辑:齐春会)