HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度的效果分析

金士萍

HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度的效果分析

金士萍

目的分析高效液相色谱法(HPLC法)测定人血浆中氯氮平浓度的效果。方法选用Eclipse plus C18色谱柱, 具体规格为100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作为流动性, 具体规格为冰醋酸调节pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速为1 ml/min, 检测波长为254 nm, 柱温定为30℃, 进样量为20 μl, 以乙醚为萃取液。碱化血浆后, 以Agilent固相萃取小柱将血浆中的氯氮平提取出来, 运用HPLC法对人血浆中氯氮平浓度进行检测。结果具有良好的线性关系的前提条件为血浆氯氮平的浓度在0.10～2.00 mg/L。最低检测限为5 μg/L(rsn=3)。对照品血浆的回收率高浓度为(92.1±3.1)%,低浓度为(105.8±7.6)%, 中间浓度为(96.7±8.2)%；日内和日间RSD高浓度分别为0.5%、7.1%, 低浓度分别为7.4%、7.6%, 中间浓度分别为4.6%、5.8%。结论HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度的效果良好,值得推广。

高效液相色谱法；人血浆中氯氮平浓度；效果

氯氮平是第一代非典型抗精神病药物, 镇静作用强, 在临床药物应用中具有强大的抗精神病效应［1］。氯氮平虽然对精神病的治疗效果显著, 但是也存在着不可忽视的弊端, 其不良反应主要为粒细胞缺乏症和癫痫发作［2］, 从而使氯氮平在临床上的应用受到限制。如果能够运用仪器检测, 得到可靠的血液中氯氮平药物浓度的量, 给患者正确的使用适宜的药物剂量, 相应的就可以避免或者减少不良反应的发生。随着医学技术的不断进步, 分析仪器在临床检验中得到应用,使用HPLC法进行药物浓度检查, 操作简单, 可以快速的完成药物浓度的检测, 但是在对于氯氮平药物的检测效果如何,是否会受到一些外界因素的影响和干扰, 影响检验结果的准确性。因此作者通过以下HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度的效果分析得以求证, 对临床精神疾病指导合理用药提供可靠依据, 具有重要的参考价值。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器

1.1.1 试药 购买上海九福制药厂生产的批号：020417的氯氮平对照品, 纯度为99.9%；购买天津市科密欧化学试剂有限公司生产的批号为20140102的甲醇, 属于HPLC专用；分析纯试剂包括乙醚、冰醋酸、三乙胺等。

1.1.2 仪器 Agilent公司生产的1260系列溶剂管理系统、二极管阵列检测器、固相萃取装置等；Millipore公司生产的Milli-Q纯水过滤仪；天津市东康科技有限公司生产的真空负压泵；北京医用离心机厂生产的LDZ5-2低速自动平衡离心机；上海精科实业有限公司生产的XW-80A旋涡混合器；上海上平仪器有限公司生产的FA/JA系列电子分析天平；杭州奥立仪器有限公司生产的PHS系列实验室pH计；天津市东康科技有限公司生产的DS系列超声波清洗器。

1.2 色谱条件 美国Agilent公司Eclipse plus C18色谱柱,具体规格为100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作为流动性, 具体规格为冰醋酸调节pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速为1 ml/min, 检测波长为254 nm, 柱温定为30℃,进样量为20 μl, 以乙醚为萃取液。

1.3 方法

1.3.1 配置对照品溶液 将1.30 mg氯氮平对照品精密称取出来, 在10 ml容量瓶中用甲醇稀释, 摇匀, 将对照品储备液配制出来, 浓度为130 mg/L, 将母液设定为该储备液(于4℃避光保存3个月稳定不变备用), 并将系列浓度的对照品溶液分别配制出来［3］。

1.3.2 处理血浆样品 在-20℃的温度条件下在暗处将冷冻保存的正常人肝素抗凝血浆自然熔融, 混匀后将1 ml取出来, 置于10 ml磨口试管中, 用微量注射器吸取标准应用液5 μl以及1 mol/L NaOH(氢氧化钠)溶液200 μl准确加入其中, 然后加入乙醚4 ml, 进行30 s的旋涡振荡, 并进行5 min离心,离心速率为3000 r/min, 静止分层, 将全部上清液倾取出来置于锥形离心管中, 进行固相萃取。将离心管置于40℃水浴在氮气流下将洗脱液吹干。预先用1 ml甲醇活化OASIS固相萃取小柱, 然后用1 ml水对其进行洗涤后备用, 用100 μl甲醇溶解离心管中的残留物, 用微量注射器吸取出20 μl在色谱仪上进样(流动相复溶和进样［4］)。

1.4 统计学方法 采用DAS2.0药物代谢动力学软件对数据进行回归分析。

2 结果

2.1 色谱行为 为了确保血样测定可靠性, 氯氮平在本法色谱分离条件下, 以 6.5 min的保留时间分离完整, 其检测不会受到血浆中内源性物质的干扰, 出峰完全。

2.2 制备标准曲线 将100 μl系列浓度的对照品溶液精密量取出来置于10 ml磨口试管中, 将1ml空白血浆加入其中,使血浆中对照品的浓度分别为0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/L, 操作过程中严格依据血浆样品处理方法进行。以对照品氯氮平峰面积(Y)线性回归其血浆中浓度(X), 将回归方程得出来, 即Y=1661491.3X+118958.4, r=0.9988(n=6)。从此处可以看出, 具有良好的线性关系的前提条件为血浆氯氮平的浓度在0.10～2.00 mg/L。最低检测限为5 μg/L(rsn=3)。

2.3 萃取回收率 在对含对照品血浆进行处理的过程中严格依据血浆样品处理方法进行, 进样前将固相萃取小柱处理, 比较其和对照品直接进样所得峰面积, 从而对方法的萃取回收率进行有效评价, 结果高浓度为2.00 mg/L, 低浓度为0.10 mg/L, 中间浓度为0.50 mg/L, 每种浓度进行5次重复, 高浓度的萃取回收率为(93.8±4.7)%, 低浓度的萃取回收率为(97.3±4.2)%, 中间浓度的萃取回收率为(96.9±5.5)%。

2.4 加样回收率和精密度 分别将100 μl不同浓度的对照品溶液量取出来, 向1 ml空白血浆加入, 使血浆中对照品浓度分别为0.10、0.50、2.00 mg/L, 操作过程中严格依据血浆样品处理方法进行, 日内进行6次测定, 隔日进行1次测定,结果高浓度为2.00 mg/L, 低浓度为0.10 mg/L, 中间浓度为0.50 mg/L, 对照品血浆的回收率高浓度为(92.1±3.1)%, 低浓度为(105.8±7.6)%, 中间浓度为(96.7±8.2)%；日内和日间RSD高浓度分别为0.5%、7.1%, 低浓度分别为7.4%、7.6%,中间浓度分别为4.6%、5.8%。

3 讨论

从本研究结果中可以看出, HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度的效果良好, 不仅具有较少的干扰、较高的灵敏度、较为简单的操作、准确性好、分析周期不长、方法很实用等,而且选用的试验试剂均为国产品价格低廉, 来源容易［5,6］。临床在检测血药浓度过程中测定大批量样本的要求, 能够在其作用下得到有效满足, 值得推广。

［1］张文英, 郭莉萍, 沈广虎.在线固萃取—高效液相色谱法检测人血清中氯氮平浓度.山东医药, 2013, 53(19):52.

［2］杨辉, 张冰, 李荣, 等.高效液相色谱法测定人血清中氯氮平浓度.中国实用医药, 2010, 5(20):92.

［3］楼江, 王峰, 李焕德.阳离子色谱柱-HPLC法测定人血浆中氯氮平及去甲氯氮平浓度.药物分析杂志, 2013(1):44-49.

［4］刘伟忠, 陈清霞, 朱军.等.RP-HPLC法同时测定人血浆中氯氮平、喹硫平浓度.中国药师, 2010, 13(7):930-932.

［5］马武翔, 杨颖琳.反相高效液相色谱法测定人血浆中氯氮平浓度.中国药房, 2003, 14(6):48.

［6］钱南萍, 马莹, 夏晓燕.HPLC法测定人血浆中氯氮平浓度.江苏药学与临床研究, 2006, 14(5):303-304.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.182

2014-11-26］

277103 山东省枣庄市精神卫生中心