微波固定在病理制片中的应用

张鹏，包磊，蔡红光，杨惠英，李美平，戈文舜

（绍兴市妇幼保健院，浙江 绍兴312000）

微波固定在病理制片中的应用

张鹏，包磊，蔡红光，杨惠英，李美平，戈文舜

（绍兴市妇幼保健院，浙江 绍兴312000）

目的探讨微波固定在常规病理切片及免疫组化制片工作中的效果。方法将30例不同类型的组织块随机分为实验组与对照组，实验组用微波固定，对照组用10%福尔马林液固定，行常规及免疫组化制片，观察制片时间及制片质量。结果实验组的常规制片效果及免疫组化制片效果均与对照组差异无统计学意义（P＞0.05），但大大缩短了固定时间。结论以微波技术进行固定是常规病理切片及免疫组化制片较实用的固定方法。

病理制片；固定；微波；生理盐水；福尔马林；免疫组化

在病理制片工作中，固定是整个制片过程中的第一步，也是最关键的一步，是制片质量优良与否的基础。如固定不良，在以后的制片阶段无法补救。

因此，制片质量的优劣首先取决于最初固定的适当与否。经过长期实践，本文对常规及免疫组化制片的固定方式进行改良，并与传统的固定方式相比较，以探讨病理制片的经验。

1 材料与方法

1.1材料 选择绍兴市妇幼保健院2013年手术切除的子宫、乳腺、卵巢新鲜标本共计30例，每例各取两块相同部位的组织，随机分为实验组和对照组各30块，每组共30个组织块制片。

1.2方法

1.2.1实验仪器S551松下微波炉，德国原装Leica RM2235切片机，Shandon Excelsior全自动密闭式脱水机，塑料脱水篮 （每层可容纳74个包埋盒），塑料包埋盒，医用生理盐水，一次性纸杯。

1.2.2实验方法 实验组：将组织取材为1cm× 1cm×（0.3~0.4）cm大小，投入装有0.9%医用生理盐水的一次性纸杯中，剂量50mL，置S551松下微波炉内中火定时120秒[1]，常规脱水、浸蜡、包埋、切片、染色后制成切片。对照组：取与实验组相同大小的组织块，以10%中性福尔马林为固定液，固定时间为4~6小时，与实验组同时进行脱水、浸蜡及切片、染色，所有切片均由本科副主任医师以上人员审阅。

1.2.3评价标准 （1）组织结构清晰：指切片影像上的各部细节及其结构的清晰程度；（2）染色鲜艳：指切片染色鲜明，透亮，色彩靓丽，红蓝对比强烈，胞核清晰；（3）染色均匀：指免疫组化切片细胞的阳性程度相对一致，无深浅不一；（4）定位准确：指不同抗体的阳性部位特异性强，能准确定位于相应的细胞膜、细胞核和细胞浆；（5）背景清晰：指免疫组化切片无非特异性着色。免疫组化制片效果反应强度（-）：镜下阳性细胞＜5%；（+）：镜下阳性细胞占5%~25%；（++）：镜下阳性细胞占25%~50%；（+++）：镜下阳性细胞＞50%。

1.3统计学处理 采用SPSS17.0软件进行统计，两种固定方法对常规切片、免疫组化的镜检效果采用Fisher确切概率法；两种固定方法对免疫组化反应强度的影响采用非参数检验中的秩和检验。

2 结果

2.1制片效果 组织结构和染色方面两组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），详见表1。

2.2免疫组化制片效果 两组对所有样本染色均匀、定位准确、背景清晰度以及反应强度均无统计学差异（均P＞0.05），详见表2。

3 讨论

微波作为一种病理学技术辅助手段，已广泛应用于常规制片、免疫组化等日常工作中。其原理为利用微波产生的超高速震动及穿透效应，提高组织内分子与溶剂分子的运动速度，加速组织中蛋白质凝固，以物理的方法使组织细胞固定、硬化，从而保持组织内生物活性物质及组织细胞的原有结构。

本文采用微波固定和福尔马林固定，两种方法均能顺利切片，切片完整，无断裂、破碎现象。两组切片镜下所见各种组织细胞形态完好，结构清晰，染色鲜艳，核浆比明显，染色质均清晰可见。免疫组化实验中，两种固定方法也均表现较好，染色均匀、定位准确、背景清晰，反应强度相仿，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

但微波固定只需要微波炉和生理盐水结合使用，减少了其它固定液对人体的有害刺激，经济环保。在固定效果方面并不逊色于福尔马林等常用固定液[2]，具有核膜清晰，染色质均匀等特点，且不需要更新染色程序和制片方法，更不会引起组织收缩。医用生理盐水能够较好地保持细胞结构，不会对细胞造成伤害，且具有一定的渗透压。在其作用下，组织细胞蛋白质得到沉淀性固定，同时又不影响细胞形态，使切片质量得到了较大的提高。在固定时间上，对照组固定需要4~6小时，实验组仅需120秒，在保证制片质量的同时大大缩短了固定时间，提高了日常工作效率。

当前免疫组化技术已经成为病理诊断不可或缺的辅助工具，微波快速固定可以获得与常规福尔马林固定相似的免疫组化阳性细胞数量，同时在染色、定位、背景清晰度等方面也与常规切片有较好地一致性。而在阳性反应强度方面，微波固定的组织切片获得了更好的实验效果，这可能是由于微波固定的组织促使标本内某些基团的暴露，又或是提高了固定剂的媒染作用，使组织细胞与染液的亲和力增大而产生了较强的染色反应。

以往类似报道微波设备往往以医用微波仪为主[3-5]，但其采购手续繁琐、费用高昂，普通基层实验室难以配备，本实验只需普通家用微波炉，价格低廉，购置方便，且实验效果与医用微波仪相同，具有较大的实用意义。

[1]王新成，李亚鲁，柳雅玲，等.单纯微波固定在组织制片中的应用.临床与实验病理学杂志，2005，21（2）：203

[2]王立东，孙予，郭花芹.微波固定组织与福尔马林固定组织的比较.临床与实验病理学杂志，1992，8（1）：52

[3]刘亚平，姜小军.微波无水乙醇双重固定在组织冰冻切片中的应用.宁夏医学杂志，1995，17（6）：363

[4]熊正文，范东升，李春光，等.微波二次固定提高肿瘤组织冰冻切片及苏木素-伊红染色质量的研究.解剖学杂志，1998，21（5）：474

[5]熊正文，李春光，商磊岩，等.微波辅助组织块预固定在提高冰冻切片质量中的作用.临床与实验病理学杂志，1998，14（1）：100