保健酒中总皂苷含量测定方法研究

徐媛+白少伟+庞文生+胡娟

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔树脂纯化样品，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测保健酒中总皂苷含量。三个批次的保健酒样品中总皂苷平均含量为53.5mg/100mL。

【关键词】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；总皂苷含量

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0030-01

总皂苷被认为是保健食品中的主要功效成分，广泛存在于多种药食两用、保健中药和保健食品当中，具有抗疲劳、促进记忆、保护心血管系统等作用。本保健酒以多味中药为主要原料，含有总皂苷和多糖等多种功效成分。依据《保健食品检验与评价技术规范（2003版）》[1]中保健食品总皂苷的测定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔树脂对样品进行纯化，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测总皂苷含量。

1 仪器与材料

UV-1800紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司），数显恒温水浴锅，10ml注射器，离心机，电子天平，水浴锅。

受试样品（本课题组自制）；人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品鉴定所），香草醛-冰乙酸溶液（称取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔树脂（Sigma化学公司，U.S.A.），中性氧化铝（层析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等试剂均为分析纯；

2 试验方法

2.1 人参皂苷Re标准溶液的配制 精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人参皂苷Re 2.0mg。

2.2 受试样品的处理 吸取1.0mL保健酒试样放蒸发皿中60℃水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。

2.3 样品柱层析

2.3.1 层析柱的制备 用10ml注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25ml 70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 试样总皂苷的吸附及洗脱 精确吸取1.0ml已处理好的试样溶液（见2.2），注入已处理的注射器内，待试样渗透柱内后，用25ml水洗柱，弃去洗脱液，再用25ml 70%乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。

2.4 标准管的制备 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸发皿中，水浴挥干（低于60℃），以下操作从“2.3层析柱…”起，与试样相同。待测吸收度值。

2.5 皂苷的显色与比色测定 在上述已挥干的接收液中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使残渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。

2.6 计算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：试样中总皂苷量（以总人参皂苷Re计，计算结果保留二位有效数字），g/100g（ml）；A1—被测液的吸光度值；A2—标准液的吸光度值；C—标准管人参皂苷Re的量，μg；V—试样稀释体积，ml；m—试样质量，g（ml）。

3 结果与讨论

3.1 测定结果 见表1。

3.2 讨论 层析柱中的中性氧化铝和大孔吸附树脂分别属于非极性无机和有机吸附剂，大孔树脂选择性强，理化性质稳定，吸附量大，对皂苷的吸附力强，而对其他物质吸附力差，易被水洗涤[2-3]。保证大孔树脂分离纯化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法对甘草皂苷进行定量测定时，显色反应过程中吸光度随加热时间和温度的改变而变化，测定时应严格控制测定时间，规范操作步骤[4]；样品从60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷却，精密加入醋酸，确保摇匀后进行测定，从而保证检测结果的高准确度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用时现配，否则空白值的颜色会加深，影响测定的结果。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 兰霞，王洪新.比色法测定甘草中总皂苷的含量[J].时珍国医国药，2007，18（4）：886-887.

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔树脂纯化样品，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测保健酒中总皂苷含量。三个批次的保健酒样品中总皂苷平均含量为53.5mg/100mL。

【关键词】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；总皂苷含量

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0030-01

总皂苷被认为是保健食品中的主要功效成分，广泛存在于多种药食两用、保健中药和保健食品当中，具有抗疲劳、促进记忆、保护心血管系统等作用。本保健酒以多味中药为主要原料，含有总皂苷和多糖等多种功效成分。依据《保健食品检验与评价技术规范（2003版）》[1]中保健食品总皂苷的测定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔树脂对样品进行纯化，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测总皂苷含量。

1 仪器与材料

UV-1800紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司），数显恒温水浴锅，10ml注射器，离心机，电子天平，水浴锅。

受试样品（本课题组自制）；人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品鉴定所），香草醛-冰乙酸溶液（称取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔树脂（Sigma化学公司，U.S.A.），中性氧化铝（层析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等试剂均为分析纯；

2 试验方法

2.1 人参皂苷Re标准溶液的配制 精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人参皂苷Re 2.0mg。

2.2 受试样品的处理 吸取1.0mL保健酒试样放蒸发皿中60℃水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。

2.3 样品柱层析

2.3.1 层析柱的制备 用10ml注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25ml 70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 试样总皂苷的吸附及洗脱 精确吸取1.0ml已处理好的试样溶液（见2.2），注入已处理的注射器内，待试样渗透柱内后，用25ml水洗柱，弃去洗脱液，再用25ml 70%乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。

2.4 标准管的制备 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸发皿中，水浴挥干（低于60℃），以下操作从“2.3层析柱…”起，与试样相同。待测吸收度值。

2.5 皂苷的显色与比色测定 在上述已挥干的接收液中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使残渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。

2.6 计算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：试样中总皂苷量（以总人参皂苷Re计，计算结果保留二位有效数字），g/100g（ml）；A1—被测液的吸光度值；A2—标准液的吸光度值；C—标准管人参皂苷Re的量，μg；V—试样稀释体积，ml；m—试样质量，g（ml）。

3 结果与讨论

3.1 测定结果 见表1。

3.2 讨论 层析柱中的中性氧化铝和大孔吸附树脂分别属于非极性无机和有机吸附剂，大孔树脂选择性强，理化性质稳定，吸附量大，对皂苷的吸附力强，而对其他物质吸附力差，易被水洗涤[2-3]。保证大孔树脂分离纯化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法对甘草皂苷进行定量测定时，显色反应过程中吸光度随加热时间和温度的改变而变化，测定时应严格控制测定时间，规范操作步骤[4]；样品从60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷却，精密加入醋酸，确保摇匀后进行测定，从而保证检测结果的高准确度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用时现配，否则空白值的颜色会加深，影响测定的结果。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 兰霞，王洪新.比色法测定甘草中总皂苷的含量[J].时珍国医国药，2007，18（4）：886-887.

【摘 要】 利用Amberlite-XAD-2大孔树脂纯化样品，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测保健酒中总皂苷含量。三个批次的保健酒样品中总皂苷平均含量为53.5mg/100mL。

【关键词】 保健酒；香草醛-高氯酸比色法；总皂苷含量

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0030-01

总皂苷被认为是保健食品中的主要功效成分，广泛存在于多种药食两用、保健中药和保健食品当中，具有抗疲劳、促进记忆、保护心血管系统等作用。本保健酒以多味中药为主要原料，含有总皂苷和多糖等多种功效成分。依据《保健食品检验与评价技术规范（2003版）》[1]中保健食品总皂苷的测定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔树脂对样品进行纯化，以人参皂苷Re为对照品，采用香草醛-高氯酸比色法检测总皂苷含量。

1 仪器与材料

UV-1800紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司），数显恒温水浴锅，10ml注射器，离心机，电子天平，水浴锅。

受试样品（本课题组自制）；人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品鉴定所），香草醛-冰乙酸溶液（称取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml），Amberlite-XAD-2大孔树脂（Sigma化学公司，U.S.A.），中性氧化铝（层析用，100-200目），正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等试剂均为分析纯；

2 试验方法

2.1 人参皂苷Re标准溶液的配制 精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人参皂苷Re 2.0mg。

2.2 受试样品的处理 吸取1.0mL保健酒试样放蒸发皿中60℃水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。

2.3 样品柱层析

2.3.1 层析柱的制备 用10ml注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25ml 70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 试样总皂苷的吸附及洗脱 精确吸取1.0ml已处理好的试样溶液（见2.2），注入已处理的注射器内，待试样渗透柱内后，用25ml水洗柱，弃去洗脱液，再用25ml 70%乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。

2.4 标准管的制备 吸取人参皂苷Re标准溶液（2.0mg/ml）100μl于蒸发皿中，水浴挥干（低于60℃），以下操作从“2.3层析柱…”起，与试样相同。待测吸收度值。

2.5 皂苷的显色与比色测定 在上述已挥干的接收液中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使残渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。

2.6 计算

X=A1A2×C×Vm×100100×1100

式中X：试样中总皂苷量（以总人参皂苷Re计，计算结果保留二位有效数字），g/100g（ml）；A1—被测液的吸光度值；A2—标准液的吸光度值；C—标准管人参皂苷Re的量，μg；V—试样稀释体积，ml；m—试样质量，g（ml）。

3 结果与讨论

3.1 测定结果 见表1。

3.2 讨论 层析柱中的中性氧化铝和大孔吸附树脂分别属于非极性无机和有机吸附剂，大孔树脂选择性强，理化性质稳定，吸附量大，对皂苷的吸附力强，而对其他物质吸附力差，易被水洗涤[2-3]。保证大孔树脂分离纯化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法对甘草皂苷进行定量测定时，显色反应过程中吸光度随加热时间和温度的改变而变化，测定时应严格控制测定时间，规范操作步骤[4]；样品从60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷却，精密加入醋酸，确保摇匀后进行测定，从而保证检测结果的高准确度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用时现配，否则空白值的颜色会加深，影响测定的结果。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003，223-224.

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim.Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J].Gltrason Sonochem，2001，8（4）：347-352.

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V.Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J].Pharm Chem J.，2004，38（4）：191-194.

[4] 兰霞，王洪新.比色法测定甘草中总皂苷的含量[J].时珍国医国药，2007，18（4）：886-887.