测定尼群地平片含量HPLC法的改进

聂世英

【摘 要】 目的：对尼群地平片进行含量测定的高效液相法；方法：色谱柱为Diamonsil（TM）-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（70：30），检测波长为237nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl。结果：再改条件下，尼群地平进样量在0～2.5μg范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为100.16%（n=9）。结论：本方法简便、准确、快捷，重复性良好，可用于尼群地平片剂的含量测定和质量控制。

【关键词】 尼群地平； 高效液相色谱； 含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0018-03

尼群地平（商品名落普思）为钙离子通道阻滞剂，属短效抗高血压药。能选择性地作用于外周血管，阻断其钙离子内流，松弛其平滑肌，扩张血管而降压，能显著扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量，保护缺血性心肌，用于各种类型的高血压，特别是伴有冠心病的高血压的治疗。目前《中国药典》2010年版收载尼群地平片的含量测定虽为高效液相色谱法，但操作较繁琐，流动相复杂，对仪器要求较高，为更简单有效控制尼群地平质量特建立了用HPLC法测定其含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent-1100高效液相色谱仪；岛津UV-2450紫外分光光度计；Aiamonsil-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；Mettler ToledoAE-100电子天平（瑞士Mettler公司）。

1.2 试药 尼群地平对照品来源 批号：100585-200602；中国药品生物检定所。

尼群地平原料药来源 由赤峰万泽制药有限公司提供。

尼群地平片来源 规格：10mg/片；天津太平洋制药有限公司生产；产品批号：080704.

甲醇为色谱纯；水为纯化水，自制。

2 液的制备

2.1 对照品溶液 精密称取尼群地平对照品25mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.2 原料药溶液 精密称取尼群地平原料药25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.3 供试品溶液 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg），置25ml量瓶中，加甲醇溶解（超声处理）并稀释至刻度，摇匀，静置即得。

2.4 阴性溶液 精密称取可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠（5∶1）0.19g（相当于2.5片的尼群地平片重），置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

3 实验方法的建立

3.1 检测波长的选择 精密称取尼群地平原料药0.050g置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取该溶液2ml置100ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制成每1ml中含20μg的溶液。扫描紫外图谱，见图-1.尼群地平在351nm、237nm、204nm有最大吸收，在351nm、204nm处的吸收值较小，用于高效液相色谱法测定时响应值小，在237nm处吸收值大，灵敏度高。因此选择237nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 取1mg/ml的原料药溶液作为供试品。根据尼群地平的溶解性，选用C18色谱柱，以甲醇-水（70：30）为流动相[1]，237nm为检测波长，柱温30℃；流速为1.0ml/min，进样10μl，计录色谱图-2.结果：尼群地平的保留时间为12min左右且与杂质峰的分离效果良好，因此选定甲醇-水（70∶30）为流动相。

3.3 进样量的选择 分别以不同体积不同浓度进样4次，记录色谱图结果见表1。

3.4 综上所述，色谱条件为：流动相为甲醇-水（70；30）；检测波长为237nm；柱温：30℃；流速为1.0ml/min，进样量为10μl（1μg）。

4 方法学考证

4.1 线性关系的考察 精密称取尼群地平对照品25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为储备液。

分别精密量取该溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，记录色谱图。结果如表2。

以尼群地平的浓度（X）为横坐标，相应的峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，见下图。

结果表明：尼群地平浓度在0～247μg/ml范围内线性关系良好，结果准确可靠。

4.2 精密度试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，连续进样5次，记录色谱图，计算尼群地平峰面积的RSD为0.09﹪。结果见表3.

4.3 稳定性试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀作为供试品。在0h、4h、8h、24h分别进样10μl，在上述色谱条件下，记录色谱图，结果见表4.计算尼群地平峰面积的RSD为0.94﹪。结果表明尼群地平在24h内稳定。

4.4 重复性试验 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg）置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀静置。精密量取该溶液的上清液1ml，置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制备5份，作为供试品溶液，进样测定其峰面积，结果见表5.

4.5 加样回收试验 以可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠为辅料，配制9份尼群地平片的供试品溶液，每3份为一组，分别精密加入尼群地平原料药20mg、25mg、30mg，配制成含量约为2.5片尼群地平片的80﹪、100﹪、120﹪的模拟处方溶液，加甲醇溶解并稀释至刻度，尼群地平的浓度分别为80、100、120μg/ml，分别进样10μl，测定其回收率。结果见表6。

。

5 样品含量测定

采用高效液相法测定天津太平洋制药有限公司生产的批号为080704的尼群地平片的含量。把尼群地平片配成每1ml中含0.1mg的尼群地平溶液，制备2份（各进样2次），在上述色谱条件下测定其含量，采用外标法进行计算。结果见表7。

6 讨论

HPLC 法与化学法测得尼群地平结果基本一致，但本方法具有简便、灵敏、快速、准确的特点，专属性高，可有效的控制尼群地平片的质量[2]。本方法与药典方法相比易掌握，避免了因终点不明确造成的结果误差。

参考文献

[1] 《中国药典》2010 年版（二部）；《欧洲药典》2008年版；《英国药典》2005.

[2]米振清，刘芹.HPLC法测定尼群地平片的含量[S].泰安市药品检验所 泰安 271000.

【摘 要】 目的：对尼群地平片进行含量测定的高效液相法；方法：色谱柱为Diamonsil（TM）-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（70：30），检测波长为237nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl。结果：再改条件下，尼群地平进样量在0～2.5μg范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为100.16%（n=9）。结论：本方法简便、准确、快捷，重复性良好，可用于尼群地平片剂的含量测定和质量控制。

【关键词】 尼群地平； 高效液相色谱； 含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0018-03

尼群地平（商品名落普思）为钙离子通道阻滞剂，属短效抗高血压药。能选择性地作用于外周血管，阻断其钙离子内流，松弛其平滑肌，扩张血管而降压，能显著扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量，保护缺血性心肌，用于各种类型的高血压，特别是伴有冠心病的高血压的治疗。目前《中国药典》2010年版收载尼群地平片的含量测定虽为高效液相色谱法，但操作较繁琐，流动相复杂，对仪器要求较高，为更简单有效控制尼群地平质量特建立了用HPLC法测定其含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent-1100高效液相色谱仪；岛津UV-2450紫外分光光度计；Aiamonsil-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；Mettler ToledoAE-100电子天平（瑞士Mettler公司）。

1.2 试药 尼群地平对照品来源 批号：100585-200602；中国药品生物检定所。

尼群地平原料药来源 由赤峰万泽制药有限公司提供。

尼群地平片来源 规格：10mg/片；天津太平洋制药有限公司生产；产品批号：080704.

甲醇为色谱纯；水为纯化水，自制。

2 液的制备

2.1 对照品溶液 精密称取尼群地平对照品25mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.2 原料药溶液 精密称取尼群地平原料药25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.3 供试品溶液 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg），置25ml量瓶中，加甲醇溶解（超声处理）并稀释至刻度，摇匀，静置即得。

2.4 阴性溶液 精密称取可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠（5∶1）0.19g（相当于2.5片的尼群地平片重），置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

3 实验方法的建立

3.1 检测波长的选择 精密称取尼群地平原料药0.050g置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取该溶液2ml置100ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制成每1ml中含20μg的溶液。扫描紫外图谱，见图-1.尼群地平在351nm、237nm、204nm有最大吸收，在351nm、204nm处的吸收值较小，用于高效液相色谱法测定时响应值小，在237nm处吸收值大，灵敏度高。因此选择237nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 取1mg/ml的原料药溶液作为供试品。根据尼群地平的溶解性，选用C18色谱柱，以甲醇-水（70：30）为流动相[1]，237nm为检测波长，柱温30℃；流速为1.0ml/min，进样10μl，计录色谱图-2.结果：尼群地平的保留时间为12min左右且与杂质峰的分离效果良好，因此选定甲醇-水（70∶30）为流动相。

3.3 进样量的选择 分别以不同体积不同浓度进样4次，记录色谱图结果见表1。

3.4 综上所述，色谱条件为：流动相为甲醇-水（70；30）；检测波长为237nm；柱温：30℃；流速为1.0ml/min，进样量为10μl（1μg）。

4 方法学考证

4.1 线性关系的考察 精密称取尼群地平对照品25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为储备液。

分别精密量取该溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，记录色谱图。结果如表2。

以尼群地平的浓度（X）为横坐标，相应的峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，见下图。

结果表明：尼群地平浓度在0～247μg/ml范围内线性关系良好，结果准确可靠。

4.2 精密度试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，连续进样5次，记录色谱图，计算尼群地平峰面积的RSD为0.09﹪。结果见表3.

4.3 稳定性试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀作为供试品。在0h、4h、8h、24h分别进样10μl，在上述色谱条件下，记录色谱图，结果见表4.计算尼群地平峰面积的RSD为0.94﹪。结果表明尼群地平在24h内稳定。

4.4 重复性试验 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg）置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀静置。精密量取该溶液的上清液1ml，置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制备5份，作为供试品溶液，进样测定其峰面积，结果见表5.

4.5 加样回收试验 以可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠为辅料，配制9份尼群地平片的供试品溶液，每3份为一组，分别精密加入尼群地平原料药20mg、25mg、30mg，配制成含量约为2.5片尼群地平片的80﹪、100﹪、120﹪的模拟处方溶液，加甲醇溶解并稀释至刻度，尼群地平的浓度分别为80、100、120μg/ml，分别进样10μl，测定其回收率。结果见表6。

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5 样品含量测定

采用高效液相法测定天津太平洋制药有限公司生产的批号为080704的尼群地平片的含量。把尼群地平片配成每1ml中含0.1mg的尼群地平溶液，制备2份（各进样2次），在上述色谱条件下测定其含量，采用外标法进行计算。结果见表7。

6 讨论

HPLC 法与化学法测得尼群地平结果基本一致，但本方法具有简便、灵敏、快速、准确的特点，专属性高，可有效的控制尼群地平片的质量[2]。本方法与药典方法相比易掌握，避免了因终点不明确造成的结果误差。

参考文献

[1] 《中国药典》2010 年版（二部）；《欧洲药典》2008年版；《英国药典》2005.

[2]米振清，刘芹.HPLC法测定尼群地平片的含量[S].泰安市药品检验所 泰安 271000.

【摘 要】 目的：对尼群地平片进行含量测定的高效液相法；方法：色谱柱为Diamonsil（TM）-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（70：30），检测波长为237nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl。结果：再改条件下，尼群地平进样量在0～2.5μg范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为100.16%（n=9）。结论：本方法简便、准确、快捷，重复性良好，可用于尼群地平片剂的含量测定和质量控制。

【关键词】 尼群地平； 高效液相色谱； 含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0018-03

尼群地平（商品名落普思）为钙离子通道阻滞剂，属短效抗高血压药。能选择性地作用于外周血管，阻断其钙离子内流，松弛其平滑肌，扩张血管而降压，能显著扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量，保护缺血性心肌，用于各种类型的高血压，特别是伴有冠心病的高血压的治疗。目前《中国药典》2010年版收载尼群地平片的含量测定虽为高效液相色谱法，但操作较繁琐，流动相复杂，对仪器要求较高，为更简单有效控制尼群地平质量特建立了用HPLC法测定其含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent-1100高效液相色谱仪；岛津UV-2450紫外分光光度计；Aiamonsil-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；Mettler ToledoAE-100电子天平（瑞士Mettler公司）。

1.2 试药 尼群地平对照品来源 批号：100585-200602；中国药品生物检定所。

尼群地平原料药来源 由赤峰万泽制药有限公司提供。

尼群地平片来源 规格：10mg/片；天津太平洋制药有限公司生产；产品批号：080704.

甲醇为色谱纯；水为纯化水，自制。

2 液的制备

2.1 对照品溶液 精密称取尼群地平对照品25mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.2 原料药溶液 精密称取尼群地平原料药25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.3 供试品溶液 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg），置25ml量瓶中，加甲醇溶解（超声处理）并稀释至刻度，摇匀，静置即得。

2.4 阴性溶液 精密称取可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠（5∶1）0.19g（相当于2.5片的尼群地平片重），置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

3 实验方法的建立

3.1 检测波长的选择 精密称取尼群地平原料药0.050g置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取该溶液2ml置100ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制成每1ml中含20μg的溶液。扫描紫外图谱，见图-1.尼群地平在351nm、237nm、204nm有最大吸收，在351nm、204nm处的吸收值较小，用于高效液相色谱法测定时响应值小，在237nm处吸收值大，灵敏度高。因此选择237nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 取1mg/ml的原料药溶液作为供试品。根据尼群地平的溶解性，选用C18色谱柱，以甲醇-水（70：30）为流动相[1]，237nm为检测波长，柱温30℃；流速为1.0ml/min，进样10μl，计录色谱图-2.结果：尼群地平的保留时间为12min左右且与杂质峰的分离效果良好，因此选定甲醇-水（70∶30）为流动相。

3.3 进样量的选择 分别以不同体积不同浓度进样4次，记录色谱图结果见表1。

3.4 综上所述，色谱条件为：流动相为甲醇-水（70；30）；检测波长为237nm；柱温：30℃；流速为1.0ml/min，进样量为10μl（1μg）。

4 方法学考证

4.1 线性关系的考察 精密称取尼群地平对照品25mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为储备液。

分别精密量取该溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，记录色谱图。结果如表2。

以尼群地平的浓度（X）为横坐标，相应的峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，见下图。

结果表明：尼群地平浓度在0～247μg/ml范围内线性关系良好，结果准确可靠。

4.2 精密度试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，连续进样5次，记录色谱图，计算尼群地平峰面积的RSD为0.09﹪。结果见表3.

4.3 稳定性试验 精密量取浓度为1mg/ml的储备液1ml置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀作为供试品。在0h、4h、8h、24h分别进样10μl，在上述色谱条件下，记录色谱图，结果见表4.计算尼群地平峰面积的RSD为0.94﹪。结果表明尼群地平在24h内稳定。

4.4 重复性试验 取尼群地平片剂20片，准确称定，研成细粉，精密称取尼群地平细粉适量（约相当于尼群地平25mg）置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀静置。精密量取该溶液的上清液1ml，置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。制备5份，作为供试品溶液，进样测定其峰面积，结果见表5.

4.5 加样回收试验 以可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠为辅料，配制9份尼群地平片的供试品溶液，每3份为一组，分别精密加入尼群地平原料药20mg、25mg、30mg，配制成含量约为2.5片尼群地平片的80﹪、100﹪、120﹪的模拟处方溶液，加甲醇溶解并稀释至刻度，尼群地平的浓度分别为80、100、120μg/ml，分别进样10μl，测定其回收率。结果见表6。

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5 样品含量测定

采用高效液相法测定天津太平洋制药有限公司生产的批号为080704的尼群地平片的含量。把尼群地平片配成每1ml中含0.1mg的尼群地平溶液，制备2份（各进样2次），在上述色谱条件下测定其含量，采用外标法进行计算。结果见表7。

6 讨论

HPLC 法与化学法测得尼群地平结果基本一致，但本方法具有简便、灵敏、快速、准确的特点，专属性高，可有效的控制尼群地平片的质量[2]。本方法与药典方法相比易掌握，避免了因终点不明确造成的结果误差。

参考文献

[1] 《中国药典》2010 年版（二部）；《欧洲药典》2008年版；《英国药典》2005.

[2]米振清，刘芹.HPLC法测定尼群地平片的含量[S].泰安市药品检验所 泰安 271000.