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无患子总皂苷的提取工艺及其抑菌活性研究

2015-01-20谭明辉霍光华

湖北农业科学 2014年22期
关键词:抑菌活性提取工艺皂苷

谭明辉 霍光华

摘要:采用单因素和正交设计试验,研究无患子(Sapindus mukorossi)总皂苷的提取工艺,得出无患子总皂苷的最优提取工艺为乙醇体积分数70%,提取时间为3.5 h,温度为70 ℃,料液比为1∶5,在此条件下无患子总皂苷的提取率为21.23%。抑菌试验表明,无患子粉末、水提取液和乙醇提取液对稻瘟病菌的EC50分别为0.21、0.18、0.12 mg/mL。利用大孔树脂对无患子乙醇提取液除杂,结果表明抑菌活性部位主要集中于70%乙醇洗脱液部位,在浓度为0.05 mg/mL时,其抑菌活性达到95.94%。

关键词:无患子(Sapindus mukorossi);皂苷;提取工艺;抑菌活性

中图分类号:TQ281 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2014)22-5511-04

无患子(Sapindus mukorossi)是无患子科无患子属的落叶乔木,国外广泛分布在日本、朝鲜等东南亚国家,国内各省皆有分布[1]。无患子在不同的地方有不同的叫法,在台湾被称为目浪树,在海南被称为苦患树,而在江西、广东和湖南都被称为肥珠子。无患子具有十分广泛的应用价值,其树型美观可以吸收汽车尾气;其种仁含油率高,是一种新型的制备生物柴油的原料[2];其果实中的皂苷具有极强的非离子表面活性,可作为天然洗涤剂。此外,无患子还具有十分重要的医学价值,能够用于喉痹肿痛、咳喘、白带、疮癣、肿瘤等的治疗[3]。

现代研究表明,无患子果皮中含有大量的皂苷,主要是三萜皂苷类[4-7]。目前,关于无患子皂苷的提取主要以水提法为主,但水提法容易使无患子中其他杂质浸出,从而导致无患子皂苷纯度降低。魏玉凤等[8]研究了水提-大孔树脂吸附法提取,并用超滤法分离提纯无患子皂苷;饶厚曾等[9]介绍了微波萃取法提取无患子皂苷的工艺。上述研究虽然对无患子皂苷的提取提出了一些新方法,但因其溶剂消耗量大、能耗高和产品纯度低等缺点,不利于工业化生产。本试验采用单因素试验和正交试验的方法对无患子总皂苷的提取工艺进行了优化,同时研究了无患子总皂苷的抗稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)活性,以期为无患子皂苷的工业化生产提供参考,同时为开发新型植物源杀菌剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

无患子采自江西农业大学校园内,由江西农业大学生物资源保护与利用研究所分类鉴定。无患子果晾干后,去核,将果皮用粉碎机粉碎并过40目筛,密封保存备用。

稻瘟病菌由南昌市生物资源保护与利用重点实验室提供,齐墩果酸、香草醛、冰醋酸、高氯酸、D101大孔吸附树脂购于天津农药厂,无水乙醇购于国药集团化学试剂有限公司。

1.2 试验仪器

AR1530/C型电子分析天平(奥豪斯上海有限公司),旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),TU-1900型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.3 试验方法

1.3.1 标准曲线的制作 精密称取干燥的齐墩果酸10.0 mg,用甲醇溶解并定容至10 mL,备用;精密称取香草醛0.500 0 g,用冰乙酸溶解并定容至10 mL,备用;分别精密吸取齐墩果酸甲醇溶液0、40、80、120、160、200、240 μL于比色管中,每组3次重复,水浴加热溶剂,先后加入配好的香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL(显色剂),充分摇匀,于70 ℃水浴加热20 min,取出后立即浸入冰水浴中冷却2~3 min,加入5 mL冰乙酸,在540 nm波长处测定其吸光度。

1.3.2 提取液皂苷含量测定[10] 用移液枪吸取一定体积的提取液,按测定标准曲线的方法测定样品提取液的吸光度,以去离子水为空白对照。

1.3.3 单因素试验 称取无患子粉末5.00 g, 在不同提取时间、提取温度、料液比(m/V,g∶mL,下同)和乙醇体积分数下提取。分别考察上述各因素对无患子总皂苷提取率和浸出率的影响。提取率和浸出率的计算公式如下:

提取率=■×100%

浸出率=■×100%

1.3.4 正交试验 在单因素试验的基础上,对乙醇体积分数(A)、提取温度(B)、料液比(C)和提取时间(D)进行L9(34)正交试验,试验因素与水平见表1。

1.3.5 大孔吸附树脂纯化无患子皂苷 大孔吸附树脂的预处理按文献[11]方法进行。

上样:称取无患子粉末20.00 g,按正交试验所得最佳工艺进行提取,旋转蒸发浓缩后,吸取10 mL(浓度为0.22 g/mL)上样于预处理好的大孔吸附树脂柱内,预吸附1 h, 然后分别用2倍柱体积的去离子水、30%乙醇、70%乙醇和95%乙醇进行洗脱,分段收集洗脱液,测定各洗脱液中皂苷含量。

1.3.6 无患子抑菌活性研究 称取一定量的无患子粉末,配成一系列不同浓度的含药平板,同时设置空白对照,用7 mm打孔器接种稻瘟病菌,28 ℃下培养7 d后测量菌落直径,计算抑菌率。将无患子水提液、乙醇提取液和经大孔树脂纯化后的洗脱液旋转蒸发浓缩,冷冻真空干燥后按同样的方法测定其抑菌活性。抑菌率的计算公式如下:

抑菌率=■×100%

1.4 数据分析与统计方法

每组试验重复3次,数据结果表示为“平均值±标准差”。利用Origin 8.5绘图;采用SPSS 17.0软件对试验结果进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 齐墩果酸标准曲线

以吸光度为纵坐标,齐墩果酸的质量(μg)为横坐标,绘制标准曲线见图1。经回归分析,得回归方程为y=0.002 1x-0.008 0,R2=0.997 7,线性关系较好。

2.2 单因素试验结果

2.2.1 提取时间对无患子总皂苷提取率的影响 在25 ℃下,以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数进行提取时,不同提取时间对无患子总皂苷提取率的影响见表2。由表2可知,不同提取时间对无患子总皂苷提取率有显著影响。随着提取时间的延长,原料中的总皂苷扩散到溶液中的量增加,即提取率逐渐增加;当时间达到4.5 h以后,提取率增加变缓进而趋于平衡。浸出率也受时间的显著影响,随着提取时间的增加,浸出率逐渐升高,从1.5 h的19.19%升高到5.5 h的28.78%,最后达到平衡状态。由此可以看出,为达到总皂苷提取率最大,最佳提取时间设定为4.5 h。

2.2.2 温度对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数提取4.5 h,不同提取温度对无患子总皂苷提取率的影响见表3。由表3可以看出,温度对无患子总皂苷提取率存在显著差异。总皂苷提取率随着温度的升高呈增大趋势,由25 ℃的11.72%增大到70 ℃的14.81%。当温度升高到80 ℃时,提取率下降为14.45%,但仍高于25℃的提取率。浸出率随着温度的升高同样呈增大趋势。25 ℃浸出率为28.60%,80 ℃为46.02%。这可能是由于温度过高导致无患子果皮中的其他成分被浸出所致。

2.2.3 料液比对无患子总皂苷提取率的影响 在70 ℃下,以60%的乙醇体积分数提取4.5 h, 不同料液比对无患子总皂苷提取率的影响见表4。从表4可以看出,料液比的不同对无患子总皂苷的提取率有显著影响。随着料液比的降低,无患子总皂苷提取率呈现增大趋势,当料液比下降到1∶6后,提取率逐渐趋于平缓。浸出率同样表现出类似的情况,随着料液比的下降,浸出率呈现增大趋势,当料液比为1∶7时,浸出率仍然在增大,这可能是无患子中的其他成分被乙醇提取出来。因此,考虑到无患子总皂苷的纯度问题,料液比应选为1∶5。

2.2.4 乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶5的料液比,在70 ℃提取4.5 h,不同的乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响见表5。由表5可以看出,不同体积分数的乙醇对无患子总皂苷提取率存在显著影响。当乙醇体积分数为50%~70%时,无患子总皂苷提取率随着乙醇体积分数的增大逐渐增大,而当乙醇体积分数高于70%时,提取率开始逐渐下降,乙醇体积分数为95%提取率下降到11.34%。浸出率随着乙醇体积分数的增大呈现先增大后减少的趋势,当乙醇体积分数为50%~70%时,浸出率逐渐增大,而当乙醇体积分数达到95%时,浸出率下降为24.53%。由此可以说明,乙醇体积分数为70%时有利于无患子总皂苷的提取。

2.3 正交试验结果

采用正交试验进一步考察乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间4个因素对无患子总皂苷提取率的影响,结果见表6。由极差分析可知,各因素对无患子总皂苷提取率的影响顺序为乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比,最优组合为A3B3C2D1,即乙醇体积分数为70%,提取温度为70 ℃,料液比为1∶5,提取时间为3.5 h,在该条件下无患子总皂苷提取率为21.23%。

2.4 无患子总皂苷的抑菌活性

无患子粉末、无患子水提取液和无患子乙醇提取液对稻瘟病菌的抑菌活性见表7。从表7可以看出,无患子具有较强的抑制稻瘟病菌活性。其中,乙醇提取液的抑菌活性强于水提取液,EC50为0.12 mg/mL。

无患子乙醇提取液经大孔吸附树脂纯化后,各洗脱部位的皂苷含量和抑菌活性见表8。从表8中可以看出,大孔吸附树脂能除去较多杂质,使无患子总皂苷的纯度有了较大的提高。同时,在皂苷浓度为0.05 mg/mL时,70%乙醇洗脱液对稻瘟病菌的抑菌率达到了95.94%,相比无患子粉末和无患子乙醇提取液的抑菌活性均有较大的提高。

3 小结与讨论

无患子皂苷具有十分广泛的应用价值,但其分离纯化存在一定的困难,导致其工业化生产受阻。本研究采用单因素试验,考察了乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间对无患子总皂苷提取率的影响,并用正交试验优化了提取工艺。最佳提取工艺为乙醇体积分数70%,提取温度70 ℃,料液比1∶5,提取时间3.5 h,此时无患子总皂苷的提取率为21.23%。大孔吸附树脂对无患子总皂苷进行纯化,可以除去乙醇提取液中的糖类等水溶性杂质。醇提-大孔吸附树脂分离纯化无患子皂苷具有成本低,产品得率高,工艺简单等优点,具有较好的工业化应用前景。抑菌试验研究表明,无患子具有较强的抗稻瘟病菌活性,这主要是由于无患子果皮中富含三萜皂苷。本研究为无患子皂苷的工业化生产提供了理论依据。同时,也为无患子作为生物农药的开发利用提供了参考。有关无患子皂苷单体的分离纯化以及无患子皂苷的抑菌机理有待进一步研究。

参考文献:

[1] NAKAYAMA K, FUJINO H, KASAI R, et al. Solubilizing properties of saponins from Sapindus mukurossi Gaertn[J]. Chem Pharm Bull(Tokyo), 1986, 34(8):3279-3283.

[2] SUN S D, KE X Q, CUI L I, et al. Enzymatic epoxidation of Sapindus mukurossi seed oil by perstearic acid optimized using response surface methodology[J]. Industrial Crops Products, 2011, 33(3):676-682.

[3] 中国常用中草药彩色图谱[M]. 贵阳:贵州科学技术出版社, 1997.

[4] TAMURA Y. Antimicrobial activities of saponins of pericarps of Sapindus mukorossi on dermatophytes[J]. Nat Med, 2001, 55(1):11-16.

[5] 长尾常敦.关于肿瘤细胞增殖抑制成分的研究(14):无患子果皮中的活性成分[J].国外医学(中医中药分册), 2002, 24(4): 246-247.

[6] HUANG H C,LIAO S C,CHANG F R, et al. Molluscicidal Saponins from Sapindus mukorossi,inhibitory agents of golden apple snails Pomacea canaliculata[J]. J Agric Food Chem, 2003, 51(17):4916-4919.

[7] HUANG H C,TSAI W J,LIAW C C,et al.Anti-platelet aggregation triterpene saponins from the galls of Sapindus mukorossi[J]. Chem Pharm Bull, 2007, 55(9): 1412-1415.

[8] 魏玉凤,解 辉,余锦城,等. 超滤法分离提纯无患子皂苷[J]. 膜科学与技术,2008(2):85-88.

[9] 饶厚曾,桑成涛. 微波萃取法提取无患子皂苷工艺[J]. 辽宁石油化工大学学报,2006, 26(4):70-72.

[10] 唐青涛,邱海燕,廖伟玲,等. 紫外分光法测定无患子果皮中总皂苷的含量[J]. 天然产物研究与开发,2008, 20(5): 84-86.

[11] 马育彪,何宇新,彭镰心,等. 无患子皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺[J]. 中国实验方剂学杂志,2011, 17(8): 23-25.

(责任编辑 龙小玲)

2.2.1 提取时间对无患子总皂苷提取率的影响 在25 ℃下,以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数进行提取时,不同提取时间对无患子总皂苷提取率的影响见表2。由表2可知,不同提取时间对无患子总皂苷提取率有显著影响。随着提取时间的延长,原料中的总皂苷扩散到溶液中的量增加,即提取率逐渐增加;当时间达到4.5 h以后,提取率增加变缓进而趋于平衡。浸出率也受时间的显著影响,随着提取时间的增加,浸出率逐渐升高,从1.5 h的19.19%升高到5.5 h的28.78%,最后达到平衡状态。由此可以看出,为达到总皂苷提取率最大,最佳提取时间设定为4.5 h。

2.2.2 温度对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数提取4.5 h,不同提取温度对无患子总皂苷提取率的影响见表3。由表3可以看出,温度对无患子总皂苷提取率存在显著差异。总皂苷提取率随着温度的升高呈增大趋势,由25 ℃的11.72%增大到70 ℃的14.81%。当温度升高到80 ℃时,提取率下降为14.45%,但仍高于25℃的提取率。浸出率随着温度的升高同样呈增大趋势。25 ℃浸出率为28.60%,80 ℃为46.02%。这可能是由于温度过高导致无患子果皮中的其他成分被浸出所致。

2.2.3 料液比对无患子总皂苷提取率的影响 在70 ℃下,以60%的乙醇体积分数提取4.5 h, 不同料液比对无患子总皂苷提取率的影响见表4。从表4可以看出,料液比的不同对无患子总皂苷的提取率有显著影响。随着料液比的降低,无患子总皂苷提取率呈现增大趋势,当料液比下降到1∶6后,提取率逐渐趋于平缓。浸出率同样表现出类似的情况,随着料液比的下降,浸出率呈现增大趋势,当料液比为1∶7时,浸出率仍然在增大,这可能是无患子中的其他成分被乙醇提取出来。因此,考虑到无患子总皂苷的纯度问题,料液比应选为1∶5。

2.2.4 乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶5的料液比,在70 ℃提取4.5 h,不同的乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响见表5。由表5可以看出,不同体积分数的乙醇对无患子总皂苷提取率存在显著影响。当乙醇体积分数为50%~70%时,无患子总皂苷提取率随着乙醇体积分数的增大逐渐增大,而当乙醇体积分数高于70%时,提取率开始逐渐下降,乙醇体积分数为95%提取率下降到11.34%。浸出率随着乙醇体积分数的增大呈现先增大后减少的趋势,当乙醇体积分数为50%~70%时,浸出率逐渐增大,而当乙醇体积分数达到95%时,浸出率下降为24.53%。由此可以说明,乙醇体积分数为70%时有利于无患子总皂苷的提取。

2.3 正交试验结果

采用正交试验进一步考察乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间4个因素对无患子总皂苷提取率的影响,结果见表6。由极差分析可知,各因素对无患子总皂苷提取率的影响顺序为乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比,最优组合为A3B3C2D1,即乙醇体积分数为70%,提取温度为70 ℃,料液比为1∶5,提取时间为3.5 h,在该条件下无患子总皂苷提取率为21.23%。

2.4 无患子总皂苷的抑菌活性

无患子粉末、无患子水提取液和无患子乙醇提取液对稻瘟病菌的抑菌活性见表7。从表7可以看出,无患子具有较强的抑制稻瘟病菌活性。其中,乙醇提取液的抑菌活性强于水提取液,EC50为0.12 mg/mL。

无患子乙醇提取液经大孔吸附树脂纯化后,各洗脱部位的皂苷含量和抑菌活性见表8。从表8中可以看出,大孔吸附树脂能除去较多杂质,使无患子总皂苷的纯度有了较大的提高。同时,在皂苷浓度为0.05 mg/mL时,70%乙醇洗脱液对稻瘟病菌的抑菌率达到了95.94%,相比无患子粉末和无患子乙醇提取液的抑菌活性均有较大的提高。

3 小结与讨论

无患子皂苷具有十分广泛的应用价值,但其分离纯化存在一定的困难,导致其工业化生产受阻。本研究采用单因素试验,考察了乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间对无患子总皂苷提取率的影响,并用正交试验优化了提取工艺。最佳提取工艺为乙醇体积分数70%,提取温度70 ℃,料液比1∶5,提取时间3.5 h,此时无患子总皂苷的提取率为21.23%。大孔吸附树脂对无患子总皂苷进行纯化,可以除去乙醇提取液中的糖类等水溶性杂质。醇提-大孔吸附树脂分离纯化无患子皂苷具有成本低,产品得率高,工艺简单等优点,具有较好的工业化应用前景。抑菌试验研究表明,无患子具有较强的抗稻瘟病菌活性,这主要是由于无患子果皮中富含三萜皂苷。本研究为无患子皂苷的工业化生产提供了理论依据。同时,也为无患子作为生物农药的开发利用提供了参考。有关无患子皂苷单体的分离纯化以及无患子皂苷的抑菌机理有待进一步研究。

参考文献:

[1] NAKAYAMA K, FUJINO H, KASAI R, et al. Solubilizing properties of saponins from Sapindus mukurossi Gaertn[J]. Chem Pharm Bull(Tokyo), 1986, 34(8):3279-3283.

[2] SUN S D, KE X Q, CUI L I, et al. Enzymatic epoxidation of Sapindus mukurossi seed oil by perstearic acid optimized using response surface methodology[J]. Industrial Crops Products, 2011, 33(3):676-682.

[3] 中国常用中草药彩色图谱[M]. 贵阳:贵州科学技术出版社, 1997.

[4] TAMURA Y. Antimicrobial activities of saponins of pericarps of Sapindus mukorossi on dermatophytes[J]. Nat Med, 2001, 55(1):11-16.

[5] 长尾常敦.关于肿瘤细胞增殖抑制成分的研究(14):无患子果皮中的活性成分[J].国外医学(中医中药分册), 2002, 24(4): 246-247.

[6] HUANG H C,LIAO S C,CHANG F R, et al. Molluscicidal Saponins from Sapindus mukorossi,inhibitory agents of golden apple snails Pomacea canaliculata[J]. J Agric Food Chem, 2003, 51(17):4916-4919.

[7] HUANG H C,TSAI W J,LIAW C C,et al.Anti-platelet aggregation triterpene saponins from the galls of Sapindus mukorossi[J]. Chem Pharm Bull, 2007, 55(9): 1412-1415.

[8] 魏玉凤,解 辉,余锦城,等. 超滤法分离提纯无患子皂苷[J]. 膜科学与技术,2008(2):85-88.

[9] 饶厚曾,桑成涛. 微波萃取法提取无患子皂苷工艺[J]. 辽宁石油化工大学学报,2006, 26(4):70-72.

[10] 唐青涛,邱海燕,廖伟玲,等. 紫外分光法测定无患子果皮中总皂苷的含量[J]. 天然产物研究与开发,2008, 20(5): 84-86.

[11] 马育彪,何宇新,彭镰心,等. 无患子皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺[J]. 中国实验方剂学杂志,2011, 17(8): 23-25.

(责任编辑 龙小玲)

2.2.1 提取时间对无患子总皂苷提取率的影响 在25 ℃下,以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数进行提取时,不同提取时间对无患子总皂苷提取率的影响见表2。由表2可知,不同提取时间对无患子总皂苷提取率有显著影响。随着提取时间的延长,原料中的总皂苷扩散到溶液中的量增加,即提取率逐渐增加;当时间达到4.5 h以后,提取率增加变缓进而趋于平衡。浸出率也受时间的显著影响,随着提取时间的增加,浸出率逐渐升高,从1.5 h的19.19%升高到5.5 h的28.78%,最后达到平衡状态。由此可以看出,为达到总皂苷提取率最大,最佳提取时间设定为4.5 h。

2.2.2 温度对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶3的料液比,60%的乙醇体积分数提取4.5 h,不同提取温度对无患子总皂苷提取率的影响见表3。由表3可以看出,温度对无患子总皂苷提取率存在显著差异。总皂苷提取率随着温度的升高呈增大趋势,由25 ℃的11.72%增大到70 ℃的14.81%。当温度升高到80 ℃时,提取率下降为14.45%,但仍高于25℃的提取率。浸出率随着温度的升高同样呈增大趋势。25 ℃浸出率为28.60%,80 ℃为46.02%。这可能是由于温度过高导致无患子果皮中的其他成分被浸出所致。

2.2.3 料液比对无患子总皂苷提取率的影响 在70 ℃下,以60%的乙醇体积分数提取4.5 h, 不同料液比对无患子总皂苷提取率的影响见表4。从表4可以看出,料液比的不同对无患子总皂苷的提取率有显著影响。随着料液比的降低,无患子总皂苷提取率呈现增大趋势,当料液比下降到1∶6后,提取率逐渐趋于平缓。浸出率同样表现出类似的情况,随着料液比的下降,浸出率呈现增大趋势,当料液比为1∶7时,浸出率仍然在增大,这可能是无患子中的其他成分被乙醇提取出来。因此,考虑到无患子总皂苷的纯度问题,料液比应选为1∶5。

2.2.4 乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响 以1∶5的料液比,在70 ℃提取4.5 h,不同的乙醇体积分数对无患子总皂苷提取率的影响见表5。由表5可以看出,不同体积分数的乙醇对无患子总皂苷提取率存在显著影响。当乙醇体积分数为50%~70%时,无患子总皂苷提取率随着乙醇体积分数的增大逐渐增大,而当乙醇体积分数高于70%时,提取率开始逐渐下降,乙醇体积分数为95%提取率下降到11.34%。浸出率随着乙醇体积分数的增大呈现先增大后减少的趋势,当乙醇体积分数为50%~70%时,浸出率逐渐增大,而当乙醇体积分数达到95%时,浸出率下降为24.53%。由此可以说明,乙醇体积分数为70%时有利于无患子总皂苷的提取。

2.3 正交试验结果

采用正交试验进一步考察乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间4个因素对无患子总皂苷提取率的影响,结果见表6。由极差分析可知,各因素对无患子总皂苷提取率的影响顺序为乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比,最优组合为A3B3C2D1,即乙醇体积分数为70%,提取温度为70 ℃,料液比为1∶5,提取时间为3.5 h,在该条件下无患子总皂苷提取率为21.23%。

2.4 无患子总皂苷的抑菌活性

无患子粉末、无患子水提取液和无患子乙醇提取液对稻瘟病菌的抑菌活性见表7。从表7可以看出,无患子具有较强的抑制稻瘟病菌活性。其中,乙醇提取液的抑菌活性强于水提取液,EC50为0.12 mg/mL。

无患子乙醇提取液经大孔吸附树脂纯化后,各洗脱部位的皂苷含量和抑菌活性见表8。从表8中可以看出,大孔吸附树脂能除去较多杂质,使无患子总皂苷的纯度有了较大的提高。同时,在皂苷浓度为0.05 mg/mL时,70%乙醇洗脱液对稻瘟病菌的抑菌率达到了95.94%,相比无患子粉末和无患子乙醇提取液的抑菌活性均有较大的提高。

3 小结与讨论

无患子皂苷具有十分广泛的应用价值,但其分离纯化存在一定的困难,导致其工业化生产受阻。本研究采用单因素试验,考察了乙醇体积分数、提取温度、料液比和提取时间对无患子总皂苷提取率的影响,并用正交试验优化了提取工艺。最佳提取工艺为乙醇体积分数70%,提取温度70 ℃,料液比1∶5,提取时间3.5 h,此时无患子总皂苷的提取率为21.23%。大孔吸附树脂对无患子总皂苷进行纯化,可以除去乙醇提取液中的糖类等水溶性杂质。醇提-大孔吸附树脂分离纯化无患子皂苷具有成本低,产品得率高,工艺简单等优点,具有较好的工业化应用前景。抑菌试验研究表明,无患子具有较强的抗稻瘟病菌活性,这主要是由于无患子果皮中富含三萜皂苷。本研究为无患子皂苷的工业化生产提供了理论依据。同时,也为无患子作为生物农药的开发利用提供了参考。有关无患子皂苷单体的分离纯化以及无患子皂苷的抑菌机理有待进一步研究。

参考文献:

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(责任编辑 龙小玲)

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