瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠抗凝血实验

卞 海， 杨 帆， 张 静， 宋 燕， 陈皖晴， 王雅娟*

（1.安徽中医药大学，安徽合肥230038；2.安徽省中医院，安徽合肥230031）

瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠抗凝血实验

卞 海1， 杨 帆2， 张 静2， 宋 燕2， 陈皖晴1， 王雅娟1*

（1.安徽中医药大学，安徽合肥230038；2.安徽省中医院，安徽合肥230031）

目的探讨瓜蒌薤白白酒汤在大、中、小剂量下对硬膜下血肿模型大鼠的治疗作用以及对血清中炎症因子的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、阳性组 （天丹通络胶囊）、瓜蒌薤白白酒汤大、中、小剂量组，每组10只，同时建立硬膜下血肿模型。各组连续灌胃14 d后麻醉大鼠，进行腹主动脉取血，比较血肿面积，测定血液流变性中的凝血酶原水平、凝血酶含量和纤维蛋白原水平，观察各项指标的差异性及瓜蒌薤白白酒汤大、中、小剂量组对硬膜下血肿的治疗作用，并比较其治疗效果。结果瓜蒌薤白白酒汤大、中、小剂量组能够减小硬膜下血肿模型大鼠血肿面积，降低血浆中凝血酶水平，升高纤维蛋白原和凝血酶原水平，其中中剂量和大剂量组效果更显著。与模型组比较，以上3组差异均具有统计学意义 （P＜0.01，P＜0.05）。结论瓜蒌薤白白酒汤能减小血肿面积，从而起到脑保护作用，并且能降低血液中凝血酶水平，升高纤维蛋白原和凝血酶原水平，发挥抑制凝血系统的功能，从而对硬膜下血肿具有治疗作用。

瓜蒌薤白白酒汤；硬膜下血肿；凝血酶；纤维蛋白原

硬膜下血肿（subdural hematoma，SDH）是指颅内出血血液积聚在硬脑膜下腔，在颅内血肿中发生率最高。根据伤后血肿发生的时间，分为急性硬膜下血肿 （伤后3天以内）、亚急性硬膜下血肿 （伤后3天至3周内发生）和慢性硬膜下血肿。在神经外科的颅内血肿疾病中，最为常见［1］。由于易患人群比较特殊，硬膜下血肿一旦发生，不易自愈，通常需采用手术治疗，但治疗效果并不是十分理想，死亡率达 1.5% ～8%，术后复发率达9.2% ～26.5%［2］。症状较轻的硬膜下血肿患者，可采用中医中药活血化瘀法促进脑部积液的吸收，治疗硬膜下血肿［3-4］。中医学认为，本病的病理机制为痰瘀互结，清窍被蒙，故治疗必须化瘀、涤痰兼而顾之，达到瘀血祛而新血生，促进血肿吸收的目的［5-6］。化瘀涤痰方即以化瘀、涤痰为大法，可加快血肿吸收，改善血肿引起的眩晕、肢体麻木等症状，作为一种非手术疗法，不失简便有效。瓜蒌薤白白酒汤出自东汉张仲景 《金匮要略》，由瓜蒌、薤白、白酒组成，功用通阳散结、行气祛痰。本实验旨在观察瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿动物模型凝血功能的影响，对其治疗硬膜下血肿作用及其机制进行初步探讨，为临床用药提供实验依据。

1 实验的材料与方法

1.1 实验动物与药物 取60只雄性SD大鼠，体质量均为（200±15）g，由安徽长临河医药科技有限公司动物中心提供，许可证号：SCXK（苏）2007-0004；瓜蒌薤白白酒汤由瓜蒌24 g、薤白12 g、白酒适量，三味同煮，浓缩，使每1 m L浓缩液含生药1.0 g；阳性药为天丹通络胶囊 （山东凤凰制药股份有限公司，批号1301233）。

1.2 实验试剂与器材 水合氯醛 （青岛宇龙海藻有限公司，批号20110305）；大鼠凝血酶检测试剂盒 （赛奥生物科技 （青岛）有限公司，批号CK-E75129C）；大鼠凝血酶原检测试剂盒 （上海源叶生物技术有限公司，批号CKE75063C）；大鼠纤维蛋白原检测试剂盒 （上海邦奕生物科技有限公司，批号10335R）；牙骨粉 （登腾 ［北京］医疗器械商贸有限公司，批号3633612）；EDTA-Na2抗凝管（北京美科生物技术开发公司，批号2014038）；电子秤（华鹰衡器有限公司）；GTR16-2低温离心机 （安徽时代离心机有限公司）；SM-12D电热恒温水槽 （南京舜玛仪器设备有限公司）；DNM-9602A酶标分析仪 （上海邦奕生物科技有限公司）。

1.3 模型制备 取60只成年雄性SD大鼠，7 d的适应性饲养后，手术开胸，注射3.5%水合氯醛 （1 mL/100 g），麻醉大鼠，将SD大鼠头部鼠毛剃去4 cm×4 cm，消毒，在正中处，打开3 cm的切口，将大鼠右侧的头皮、肌层部位分别剥离；然后进行眼眦取血约5 mL，用牙科钻在头顶钻出骨孔，定位于前囟右下侧2.5 mm处，半径约0.5 mm，向硬膜下腔隙注射自体血液，自体血液经眼眦取出，5 min后拔出，封闭骨孔，缝合，滴加头孢以抗感染。假手术组大鼠造模方法与模型组相同，但不注射自体血液。

1.4 分组及给药 造模后，将大鼠随机分为假手术组、阳性对照组 （天丹通络胶囊）、模型组、瓜蒌薤白白酒汤 （大，中，小）剂量组，每组10只。按剂量灌胃给药，剂量如下：瓜蒌薤白白酒汤大剂量组为55.53 g/kg；瓜蒌薤白白酒汤中剂量组为28.27 g/kg；瓜蒌薤白白酒汤小剂量组为13.13 g/kg；阳性药组 （天丹通络胶囊）为0.53 g/kg；假手术组和模型对照组灌胃给予同等容量蒸馏水；连续给药15 d。

1.5 处理动物 15 d后，末次给药1 h后，注射3.5%水合氯醛 （1.0mL/100 g）麻醉，打开腹腔，腹主动脉采血，将取出的血液放入EDTA-Na2抗凝管，低温离心15 min，后取出血浆放入EP管中，并以3 000 r/min离心15 min将EP管中的血离心取得血清。取鼠脑 （去除小脑），用冰生理盐水冲洗脑组织并称定质量，比较硬膜下血肿区域的面积，并置-20℃冰箱中保存待测。

1.6 数据处理 采用均数±方差 （x±s）表示，采用SPSS 17.0统计分析软件，单因素方差分析，以统计数据P＜0.05为标准，并认为有统计学意义。

2 实验结果

2.1 比较硬膜下血肿模型大鼠血肿面积 对比假手术组大鼠右侧脑，模型组大鼠右侧血肿面积较大，提示血肿块消散不好；大、中、小剂量组对比模型组均有改善，其中大剂量组效果最明显，作用与阳性药相当，中剂量组次之，小剂量组有效，但效果欠佳。见图1。

图1 硬膜下血肿模型大鼠血肿面积

2.2 比较硬膜下血肿模型大鼠凝血酶水平 与假手术组比较，模型组凝血酶水平升高较多，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与模型对照组比较，瓜蒌薤白白酒汤的中剂量组、大剂量组凝血酶水平下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图2。

图2 硬膜下血肿模型大鼠凝血酶水平

2.3 比较硬膜下血肿模型大鼠凝血酶原、纤维蛋白原水平

同假手术组比较，模型对照组凝血酶原水平下降较多，两者差异具有统计学意义 （P＜0.01），与模型对照组比较，瓜蒌薤白白酒汤大剂量组、中剂量组、小剂量组的凝血酶原水平上升，此差异具有统计学意义 （P＜0.01）；与假手术组比较，模型组纤维蛋白原水平下降，差异具有统计学意义 （P＜0.01），与模型组比较，瓜蒌薤白白酒汤大剂量组、中剂量组、小剂量组纤维蛋白原水平上升，差异也具有统计学意义 （P＜0.01，P＜0.05）。见表1。

表1 硬膜下血肿模型大鼠凝血酶原、纤维蛋白原水平（x±s，n=10）

3 讨论

凝血过程是一系列的酶促反应过程，最后使血浆中的可溶性纤维蛋白原变成不可溶的纤维蛋白［7］。凝血酶原在凝血机制中起着中心主导的作用，在激活的因子Ⅴ，和由血小板或其他细胞提供的磷脂表面存在的情况下，凝血酶原激活形成了凝血酶。凝血酶是一种重要的蛋白水解酶，对多种凝血因子起到水解作用，能直接作用于血液中的纤维蛋白原，促使其AB肽链断裂转变为具有凝血活性的纤维蛋白，从而引发凝血和血栓生成［8-10］。正常情况下，凝血酶原、凝血酶及纤维蛋白原处于动态平衡中。制备大鼠硬模下血肿模型时，注入的自体血液中凝血酶原被激活，促使大量凝血酶的生成，生成的凝血酶可通过受体途径激活神经元、胶质细胞使之产生并释放大量细胞因子和毒性物质而损伤血脑屏障导致其通透性改变［6］。从而使凝血因子进入血液循环引起血液中凝血酶急剧上升，而凝血酶原水平同时下降。在凝血酶的这种催化作用下，导致纤维蛋白原水平下降［11-13］。

造模成功后凝血酶原被激活，水平迅速降低，血液中凝血酶迅速升高，使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，从而纤维蛋白原水平降低纤维蛋白水平升高；给药后，各指标趋于正常值，并好于正常值，其中凝血酶水平降低，凝血酶原和纤维蛋白原水平升高，提示大鼠硬膜下血肿正在逐渐减少，甚至消失。

瓜蒌薤白白酒汤通过降低了血液中凝血酶的水平，从而降低纤维蛋白的水平来发挥抗凝血作用，凝血酶水平的降低也使对血脑屏障的通透性降低从而一定程度上保护了血脑屏障起到脑保护作用。瓜蒌薤白白酒汤通过阻断凝血酶原向凝血酶的转化作用，进一步降低凝血酶的水平，同时通过阻断凝血酶对纤维蛋白原的激活作用而进一步降低纤维蛋白的水平。

参考文献：

［1］陶志强.慢性硬膜下血肿的病因和发病机制［J］.中华神经外科疾病研究杂志，2009，8（2）：190-192.

［2］苏少波.慢性硬膜下血肿发病机制研究进展［J］.国际神经病学神经外科学杂志，2009，36（3）：221-223.

［3］李中秋，陆兵勋，吕田明.胶原酶Ⅳ肝素生理盐水立体定向注入尾状核建立脑出血大鼠模型［J］.临床军医杂志，2009，37（4）：546-547.

［4］吴雪茹，吴启端，符惠燕.加味瓜蒌薤白白酒汤抗凝和溶纤作用的实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20（1）：88-89.

［5］韩 岚，许 钒，章小兵，等.桃红四物汤活血化瘀作用的实验研究［J］.安徽中医学院学报，2007，26（1）：36-38.

［6］王成华，干 磊，余晓琪，等.化瘀涤痰方治疗慢性硬膜下血肿临床研究［J］.新中医，2012，44（11）：39-41.

［7］史旭波，胡大一.血栓形成与凝血机制及调节［J］.临床荟萃，2007，22（14）：989-991.

［8］郑国庆，黄汉津，王小同.脑出血后凝血酶的作用与抗凝血酶治疗［J］.国外医学脑血管疾病分册，2005，13（3）：199-202.

［9］瞿新艳.水蛭的抗凝血作用研究［J］.现代中西医结合杂志，2010，19（13）：1582-1583.

［10］李 琪.血清白介素IL-2，IL-6，IL-8与急性脑梗死关系探讨［J］.中国误诊学杂志，2009，9（18）：4304-4305.

［11］郭梅凤，孙宝玲.急性颅脑损伤患者血清TNF-α和IL-2水平的变化及临床意义［J］.实用临床医学，2012，13（3）：1-3.

［12］Hong H J，Kim Y J，Yi H J，et al.Role of angiogenic growth factors and inflammatory cytokine on recurrence of chronicsubdural hematoma［J］.Surg Neurol，2009，71（2）：161-165.

［13］张予阳，刘 岩，付守廷.脑缺血与炎症反应［J］.中国药理学通报，2006，22（1）：5-9.

R285.5

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：1001-1528（2015）06-1333-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.039

2015-01-16

2013年度安徽省高等学校省级自然科学研究项目 （KJ2013A173）；2014年度安徽省自然科学基金项目 （1408085QH181）

卞 海（1981—），男，硕士，研究方向为药理学。Tel：13956062588，E-mail：bianhai410@126.com

*通信作者：王雅娟（1980—），女，博士，副教授，研究方向为药理学。E-mail：wangyajuan8003@126.com