血叶兰显微结构分析与性状描述

李洪燕+罗曼妮+黄少漫+冯婉莹+郑学殷

摘要：采用生药学方法，用FAA固定法、石蜡切片法及番红-固绿双重染色法对血叶兰进行显微结构分析及性状描述。结果表明，血叶兰根茎有18个纤维管束，排成间断的环形，每个环间距不等；叶、花、根茎、粉末均有草酸钙砂晶体；叶片横切面表皮细胞较大，且下表皮细胞大于上表皮细胞，有环式气孔，有副卫细胞2～3环，每环有3个细胞。

关键词：血叶兰；显微结构；生物学指标；根茎横断面；鉴定依据

中图分类号：S567.201文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）11-0275-03

血叶兰别称石蚕、真金草、石上莲，为兰科血叶兰属植物，血叶兰以全草入药，全年可采，洗净鲜用或晒干，性味甘，是民间传统的中草药，有滋阴润肺、清热凉血之功效，可用于治疗肺结核咯血、神经衰弱、食欲不振等症[1-4]。血叶兰生于水边阴湿处的石面上，分布在广东省、江西省、湖南省、四川省、贵州省、浙江省等地[5-6]。目前有关血叶兰显微结构及性状分析研究尚未见报道。本研究采用生药学方法，对血叶兰进行显微结构鉴别及性状分析，旨在为开发血叶兰相关产品提供理论依据[7-8]。

1材料与方法

1.1材料与试剂

血叶兰由广州健民医药连锁有限公司提供，经广东省中药研究所鉴定为血叶兰属。福尔马林、乙醇、醋酸、二甲苯、石蜡（均为分析纯）均来自广州化学试剂厂。

1.2仪器与设备

恒温箱（广州仪器分析厂），RM-2155型石蜡切片机（江西仪器玻璃厂），XYH-4A光学显微镜（上海光学仪器厂）。

1.3方法

1.3.1样品处理工艺流程[9]

取材→固定→脱水处理→透明处理→透蜡→包埋→染色。取材：选用新鲜药材，切成长约50mm的小段。固定：将药材放入到FAA固定液中浸泡固定24h以上。脱水处理：将固定的药材依次放入体积分数为70%、85%、95%、100%的乙醇溶液中浸泡1、2、2、3h。透明处理：将上述药材放入等量的纯乙醇与二甲苯混合液中浸泡2h，再转入二甲苯溶液中浸泡2h。透蜡处理：将已透明处理的材料与二甲苯溶液一起倒入用于包埋的小烧杯中，将熔解的石蜡轻轻倒入烧杯。当石蜡在小烧杯上层凝固4～5cm时，将小烧杯放入35～37℃恒温箱中熔蜡，让石蜡缓慢熔解并渗透到二甲苯当中。包埋处理：将烧杯移到50～60℃恒温箱内（高于石蜡熔点），石蜡熔化后，倒去含有二甲苯的石蜡，加入纯石蜡。每隔1h换1次纯石蜡，共换3次，倒入纸盒定型，冷却。采用番红-固绿染色法[10-11]染色。注意事项：选取新鲜并具有代表性的药材，切成小段，迅速放入固定液中。尽量从低浓度乙醇开始脱水处理，否则极易发生细胞脱水。透蜡与包埋处理时，随时用针将材料展开。

1.3.2性状研究前处理取适量新鲜血叶兰，放入恒温箱中干燥，对血叶兰的叶片、花、根等进行研究[12]。

2结果与分析

2.1显微结构

2.1.1血叶兰叶片结构

血叶兰花瓣涂片厚度约为0.9mm，由图1、图2可知，血叶兰叶子上下表面细胞呈多边形，四周壁平直，细胞排列致密。叶片上表皮无气孔，气孔主要分布在下表皮，以环形结构为主。副卫细胞有2个环，每个环有3～4个细胞，副卫细胞由内到外逐渐增多增大。血叶兰叶面两侧都有淡褐色绒毛，下表皮分布最多，由多细胞构成，外形类似泡沫[13]。

血叶兰花瓣涂片厚度约1.2mm，由图3、图4可知，上下表皮细胞外围都有角质层，细胞以类方型为主，长轴直径较大；下表皮细胞数量远远多于上表皮，上下表皮细胞的内侧均有椭圆形的小细胞，内含草酸钙砂晶体；下表皮细胞有多个气孔，且下表皮内侧有厚角组织，1～3层左右。栅栏细胞外形类似短柱，排列无规则，通过主脉。相近的海绵细胞个体较大，多为短圆形，个体散在，排列疏松。两类细胞内含有淀粉小颗粒，均未见脐点层纹。主脉维管束分上下两排。上下维管束均有草酸钙砂晶体散在，晶体较细碎，当中有少量淀粉颗粒分布。横切面上下表皮均有淡褐色绒毛，由多细胞构成，外形类似泡沫[14]（表1）。

2.1.2血叶兰花瓣切面结构由图5、图6可知，血叶兰花瓣切面表皮最外层有淡褐色非腺毛，由多细胞构成，外形类似泡沫。在表皮位置有些部位发生了木栓化，木栓化细胞瘤状，2～3列，淡黑色。表皮细胞有1列，个体较小，多为圆形，排列紧凑，细胞外层披有薄薄一层角质层；表皮细胞内侧有厚角组织，由5～7列细胞组成，外形为不规则圆形。皮层细胞比较大，以多角型为主，细胞壁较为平直，排列致密，细胞之间间隔很小。细胞内含有大量的草酸钙结晶体，晶体形态小，单个存在；同时存在淀粉颗粒，数量不多，隐约见到脐点纹。维管束约15个，大小不统一，外韧形，间断环形排列，另有2个排列在细胞内侧。石细胞较小，壁厚，可见有纹孔，孔沟与断层纹不易见，形状多为圆形，单个分布在维管束鞘外围或之上。韧皮部分约占整个维管束鞘的1/3，多由不规则形状细胞组成。木质部导管有5～7个细胞，细胞壁薄，多数散个存在，只有少数出现2个相连[15]（表2）。

2.1.3血叶兰根茎切面结构血叶兰根茎横切面呈椭圆形，长径为10.0mm，厚度为2.1mm。由图7、图8可知，根茎表皮呈淡褐色，有1列细胞，椭圆形，排列致密；细胞外壁有角质层，部分表皮的外侧有5～9层木栓化细胞，呈红褐色，椭圆形，个别部位有圆形突起。皮层较宽，由20～30列细胞组成，淡褐色，约占整个切面半径的1/3，多数为椭圆形，排列致密，细胞壁平直，细胞间隙小。其中草酸钙簇晶体较少，草酸钙砂晶体多。淀粉颗粒较多，单粒或2～5粒结合，多圆形。维管束外韧型，形状大小不一，约15个，单个存在或2～5个相连，排成环状。有1列薄层壁细胞所组成的维管鞘，呈方形。石细胞1列，存在于维管束与皮层之间，类圆形，壁较厚，细胞腔大，可见孔沟，各个层纹不易见，单个或2～5个相连。韧皮部分较小，多由不规则的多边形或者类椭圆形细胞组成。束中有明显的形成层，2～5层，呈长方形，排列密致。木质部较宽，导管大，多角形，细胞壁较薄，单个或2～5个相连。木质纤维较多，细胞多数无规则，壁较厚，木化。木薄壁细胞有多个，多数相连。髓部较宽，约占根茎横切面的1/3，细胞较大，多是不规则形状，细胞壁平直，排列整齐。髓部细胞内有草酸钙砂晶体，晶体细碎。淀粉单粒或2～7粒相连，多数形状无规则，未见脐点层。髓部射线细胞，细胞较大，类方形，有1～15列，每列有10～15个细胞。易见石细胞，形状类方形，壁较薄，胞腔大，可见孔沟、纹孔、断层纹（表3）。endprint

2.2粉末形状

血叶兰干燥全草粉末为淡黑色，有淡淡的兰香味，淀粉颗粒较多，形状无规则。纤维多为梭形，细胞腔较大，内径21～23μm，两端尖锐，细胞腔内有可见纹孔，直径26～40μm。细胞导管多螺纹状，直径18～40μm。石细胞较多，形状无规则，壁厚6～7μm。

2.3血叶兰形状描述

2.3.1叶片血叶兰叶片表面光滑平整。叶片形状多为长椭圆形或长椭圆状披针形，长6～11cm，宽2～3cm。叶片对生，全草下部叶片常枯萎，中段叶片有短柄，叶片比较大，经常出现三全裂或三深裂。全草上部叶片较小。叶片先端渐小，边缘有细齿或不规则粗齿，两边沿脉疏有少量柔毛，无腺点。叶片有淡淡草香，叶片捏碎后有明显的兰花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐状，形似蚕，茎节生根，叶呈紫黑色，有金红色或银白色脉纹。花苞呈粉红色，花呈白色，秋季开花，观赏价值较高。

2.3.3根茎

血叶兰根状茎呈圆形，表面为棕褐色，有点粗糙，有木纤维瘤，呈散点分布。节较大，呈结节状，每节约7～9cm。根须长短不一，约2～5cm。每个结节两侧有残留的叶痕，叶柄残基中间稍凹。血叶兰根茎质地柔软，韧劲大，不容易折断。

3结论

本研究表明，血叶兰根茎有18个纤维管束，排成间断的环形，每个环间距不等；叶、花、根茎、粉末均有草酸钙砂晶体；叶片的横切面表皮细胞较大，且下表皮细胞大于上表皮细胞，有环式气孔，有副卫细胞2～3环，每个环有3个细胞，可作为血叶兰的鉴定依据。

参考文献：

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，2002：299-300.

[2]中国科学院.中国植物志[M].北京：科学出版社，2004：349-350.

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[7]崔兆杰，邱琴，刘廷礼，等.佩兰挥发油化学成分的研究[J].药物分析杂志，2002，22（2）：117-122.

[8]冯丽，杨群，王怡林.傅里叶变换红外光谱分析三种彝药材[J].光谱实验室，2007，24（4）：542-545.

[9]林振兴.观赏南药资源血叶兰的研究进展[J].福建热作科技，2012，37（2）：4-5.

[10]曾聪彦，田素英，梅全喜，等.布渣叶的性状与显微鉴别[J].中药材，2009，32（8）：1211-1212.

[11]谈远锋，原鲜玲，丘芬，等.壮药石上莲的性状和显微鉴别研究[J].安徽农业科学，2012，40（22）：11248-11250，11391.

[12]何灵秀，罗集鹏.泽兰和佩兰的本草考证与紫外光谱法鉴别[J].中药材，2005，28（7）：549-551.

[13]刘杰，金岩.佩兰挥发油的提取与GC-MS分析及其抑菌活性研究[J].河北农业科学，2011，15（3）：150-154.

[14]SinghGD，KaiserP，YoussoufMS，etal.InhibitionofearlyandlatephaseallergicreactionsbyEuphorbiahirtaL.[J].PhytotherapyResearch，2006，20（4）：316-321.

[15]张群，张学华，王蓓.藿香、佩兰如何区别应用[J].中医杂志，2010，51（2）：138.

[16]桑旭峰，林海伦.一种佩兰新伪品的比较鉴别[J].中南药学，2004，2（4）：240.

[17]叶淑静.血叶兰与泽兰的考辨[J].海峡药学，2008，20（11）：67-69.

[18]饶秋容，张芬，何伟强.血叶兰的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2003，39（1）：36-36.

[19]张青云，杨涛.佩兰及其混淆品短舌紫菀的鉴别[J].淮海医药，2004，22（5）：431.endprint

2.2粉末形状

血叶兰干燥全草粉末为淡黑色，有淡淡的兰香味，淀粉颗粒较多，形状无规则。纤维多为梭形，细胞腔较大，内径21～23μm，两端尖锐，细胞腔内有可见纹孔，直径26～40μm。细胞导管多螺纹状，直径18～40μm。石细胞较多，形状无规则，壁厚6～7μm。

2.3血叶兰形状描述

2.3.1叶片血叶兰叶片表面光滑平整。叶片形状多为长椭圆形或长椭圆状披针形，长6～11cm，宽2～3cm。叶片对生，全草下部叶片常枯萎，中段叶片有短柄，叶片比较大，经常出现三全裂或三深裂。全草上部叶片较小。叶片先端渐小，边缘有细齿或不规则粗齿，两边沿脉疏有少量柔毛，无腺点。叶片有淡淡草香，叶片捏碎后有明显的兰花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐状，形似蚕，茎节生根，叶呈紫黑色，有金红色或银白色脉纹。花苞呈粉红色，花呈白色，秋季开花，观赏价值较高。

2.3.3根茎

血叶兰根状茎呈圆形，表面为棕褐色，有点粗糙，有木纤维瘤，呈散点分布。节较大，呈结节状，每节约7～9cm。根须长短不一，约2～5cm。每个结节两侧有残留的叶痕，叶柄残基中间稍凹。血叶兰根茎质地柔软，韧劲大，不容易折断。

3结论

本研究表明，血叶兰根茎有18个纤维管束，排成间断的环形，每个环间距不等；叶、花、根茎、粉末均有草酸钙砂晶体；叶片的横切面表皮细胞较大，且下表皮细胞大于上表皮细胞，有环式气孔，有副卫细胞2～3环，每个环有3个细胞，可作为血叶兰的鉴定依据。

参考文献：

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[16]桑旭峰，林海伦.一种佩兰新伪品的比较鉴别[J].中南药学，2004，2（4）：240.

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[18]饶秋容，张芬，何伟强.血叶兰的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2003，39（1）：36-36.

[19]张青云，杨涛.佩兰及其混淆品短舌紫菀的鉴别[J].淮海医药，2004，22（5）：431.endprint

2.2粉末形状

血叶兰干燥全草粉末为淡黑色，有淡淡的兰香味，淀粉颗粒较多，形状无规则。纤维多为梭形，细胞腔较大，内径21～23μm，两端尖锐，细胞腔内有可见纹孔，直径26～40μm。细胞导管多螺纹状，直径18～40μm。石细胞较多，形状无规则，壁厚6～7μm。

2.3血叶兰形状描述

2.3.1叶片血叶兰叶片表面光滑平整。叶片形状多为长椭圆形或长椭圆状披针形，长6～11cm，宽2～3cm。叶片对生，全草下部叶片常枯萎，中段叶片有短柄，叶片比较大，经常出现三全裂或三深裂。全草上部叶片较小。叶片先端渐小，边缘有细齿或不规则粗齿，两边沿脉疏有少量柔毛，无腺点。叶片有淡淡草香，叶片捏碎后有明显的兰花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐状，形似蚕，茎节生根，叶呈紫黑色，有金红色或银白色脉纹。花苞呈粉红色，花呈白色，秋季开花，观赏价值较高。

2.3.3根茎

血叶兰根状茎呈圆形，表面为棕褐色，有点粗糙，有木纤维瘤，呈散点分布。节较大，呈结节状，每节约7～9cm。根须长短不一，约2～5cm。每个结节两侧有残留的叶痕，叶柄残基中间稍凹。血叶兰根茎质地柔软，韧劲大，不容易折断。

3结论

本研究表明，血叶兰根茎有18个纤维管束，排成间断的环形，每个环间距不等；叶、花、根茎、粉末均有草酸钙砂晶体；叶片的横切面表皮细胞较大，且下表皮细胞大于上表皮细胞，有环式气孔，有副卫细胞2～3环，每个环有3个细胞，可作为血叶兰的鉴定依据。

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[12]何灵秀，罗集鹏.泽兰和佩兰的本草考证与紫外光谱法鉴别[J].中药材，2005，28（7）：549-551.

[13]刘杰，金岩.佩兰挥发油的提取与GC-MS分析及其抑菌活性研究[J].河北农业科学，2011，15（3）：150-154.

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[15]张群，张学华，王蓓.藿香、佩兰如何区别应用[J].中医杂志，2010，51（2）：138.

[16]桑旭峰，林海伦.一种佩兰新伪品的比较鉴别[J].中南药学，2004，2（4）：240.

[17]叶淑静.血叶兰与泽兰的考辨[J].海峡药学，2008，20（11）：67-69.

[18]饶秋容，张芬，何伟强.血叶兰的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2003，39（1）：36-36.

[19]张青云，杨涛.佩兰及其混淆品短舌紫菀的鉴别[J].淮海医药，2004，22（5）：431.endprint