江苏某规模猪场猪繁殖与呼吸综合征血清抗体监测及分析

2015-01-15管远红王海燕傅宏庆王健程汉曹斌王涛

江苏农业科学 2014年11期

管远红+王海燕+傅宏庆+王健程汉+曹斌+王涛

摘要：2011年7月至2013年6月间按照流行病学抽样的方法对江苏省某规模猪场进行PRRS血清监测。每月14日或15日分别采集空怀母猪、保育猪、育肥猪的血清样品，共2089份，应用商品化IDEXX公司的ELISA试剂盒对PRRS抗体进行血清学监测。结果表明，无论是空怀母猪、育肥猪还是保育猪，抗体阳性率均较高，其中空怀母猪比保育猪和育肥猪的抗体水平更高。血清学监测结果表明，该猪场免疫程序合理，疫苗免疫效果好，免疫后抗体水平较高，且补免及时。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征；血清学调查；抗体检测；ELISA

中图分类号：S852.5文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）11-0237-02

猪繁殖与呼吸综合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）主要引起怀孕母猪后期流产、产死胎和木乃伊胎，仔猪呼吸道症状和断奶前死亡率升高等。该病最早于1987年在美国被发现，随后迅速蔓延全球各养猪业发达的国家和地区（北美洲，1987年；欧洲，1990年；亚洲，1991年）。该病毒于1991年由荷兰Lelystad中央兽医研究所在猪肺泡巨噬细胞中首次分离得到，并命名为Lelystad病毒（PRRSV欧洲型代表株），1992年美国研究人员在CL2621细胞上也分离到PRRSV（美洲型代表株VR2332）。我国于1996年由郭宝清首次分离报道该病毒，并证明为美洲型PRRSV感染所致[1-2]。为明确使用PRRS疫苗的种猪场血清抗体消除规律，以便更好地免疫控制PRRS的感染，本试验用商品化的ELISA试剂盒对江苏某规模猪场不同日龄猪群进行了PRRS疫苗免疫后的血清学监测，现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1材料

被检血清样品采自江苏省某自繁自养规模猪场不同生长阶段的免疫猪群；猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA检测试剂盒购自IDEXX公司（lot：40959-W531）；其他试剂均为国产分析纯试剂。

1.2确定样本采集数量

收集该规模猪场的资料，尤其是不同生长期猪群体的大小和群体的变动情况。为准确了解猪群中PRRS抗体水平，根据统计学、流行病学确定试验样本抽样数为30份，在抽样的过程中考虑实际操作的可行性，对部分样本量进行了调整。

1.3免疫程序

商品猪在4周龄时注射高致病性猪蓝耳弱毒苗1头份，母猪每年免疫3次。

1.4血清的分离

前腔静脉无菌采集猪血2mL，分离血清-70℃保存。

1.5血清中PRRS特异性抗体的检测

使用IDEXX公司ELISA检测试剂盒测定PRRS抗体水平，具体操作按照说明书进行，测定650nm处吸光度D650nm。

结果统计和判断：阳性对照平均值减去阴性对照平均值≥0.015，且阴性对照平均值<0.015，试验数据有效。阴阳性判断：计算样本D值与阳性对照平均值之比（S/P），S/P≥0.4判为阳性，S/P<0.4判为阴性。

2结果与分析

2.1样本数量的确定

按照统计学的方法计算出的样本数进行采集，共采集血样2089份（表1），制备血清，-70℃保存备用。

2.2样品检测

使用IDEXX公司ELISA检测试剂盒对2089份不同时期、不同阶段猪群中血清样品的PRRS抗体水平进行测定，结果（图1、图2、图3）发现，总的阳性率很高，平均达90%以上。保育猪的PRRS抗体阳性率在85.7%～100%之间，育肥猪的PRRS抗体阳性率在76.7%～96.4%之间、空怀母猪的PRRS抗体阳性率96.3%～100%。其中，育肥猪PRRS抗体阳性率相对较低，且整齐度也较差；空怀母猪的PRRS抗体阳性率较高，阳性值也较高，整齐度好（数据未显示）。

3小结和讨论

自从PRRS出现以来，国内外建立了许多PRRS抗体检测方法和检测试剂盒[3-8]，并对其进行了评价，其中IDEXX公司生产的PRRS抗体检测试剂盒应用最广泛，因此笔者选

择了可信度相对较高的IDEXX公司生产的试剂盒。大量的研究结果表明，PRRS自传入我国后在国内的蔓延范围非常广泛，包括国内的土种猪感染率都很高[9-12]。在我国自繁自养的种猪群中类似调查还比较少，也没有连续的监测。

本研究共采集了江苏省某规模猪场不同类型的猪血清2089份，应用ELISA法检测PRRS抗体，结果发现抗体阳性率很高，在90%以上，不同种类猪群之间没有明显差异，不同时间差异也不明显，偶尔出现抗体水平稍低的月份。其中空怀母猪的抗体水平比保育猪和育肥猪更高。结果表明，该猪场免疫程序合理，免疫后抗体水平较高，且补免及时。

在采样过程中，样本数量虽然可以通过统计学、流行病学方法，按照一定的置信度和群体大小来确定，然而在实际操作过程中非常困难，一些不可预测因素影响，如动物在生产环节中的不同阶段、采样随机性和可实现性、动物捕捉的难度等都会有一定的影响。例如，本试验最初设计对种公猪进行血清采样，但是由于种公猪的种用特征、性情暴躁、獠牙对操作者的危险性等评价，最终决定放弃，而仅对部分精液进行了采集和检测（数据未发表）。流行病学调查在实际操作中会有很多因素影响采样量和置信度，应予以校正或者评价。

在养猪生产实践中，PRRS疫苗免疫后的效果评价非常重要，以此作为参考进行免疫程序的制定和修订，能更好地控制PRRS的感染。但是，由于IDEXX公司的商品化试剂盒成本非常高，很多养殖户和养殖企业无法负担高昂的检测和监测成本，因此加强国产试剂盒的研发和应用势在必行。

参考文献：

[1]郭宝清，陈章水，刘文兴，等.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病，1996（2）：3-7.endprint

[2]陈博文，孙颖杰，罗长保，等.猪繁殖和呼吸系统综合征的血清学检测及病毒的分离和鉴定（初报）[J].中国兽医杂志，1996，22（5）：6-8.

[3]AlbinaE，LeforbanY，BaronT，etal.Anenzymelinkedimmunosorbentassay（ELISA）forthedetectionofantibodiestotheporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus[J].AnnRechVet，1992，23：167-176.

[4]YaharaY，OhkuboY，KariwaH，etal.Evaluationofenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA）andimmunofluorescentantibody（IFA）testforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus（PRRSV）antibodyinpigsfromconventionalfarms[J].TheJournalofVeterinaryMedicalScience，2002，64（7）：583-588.

[5]SeuberlichT，TratschinJD，ThürB，etal.Nucleocapsidprotein-basedenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionanddifferentiationofantibodiesagainstEuropeanandNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus[J].ClinicalandDiagnosticLaboratoryImmunology，2002，9（6）：1183-1191.

[6]冷章明.基于猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白及抗原表位的间接ELISA检测方法的建立[D].武汉：华中农业大学，2013.

[7]吴忆春.猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用[J].中国畜牧兽医，2013，7（7）：51-55.[HJ1.68mm]

[8]孙晶.猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程双标记疫苗株ELISA鉴别诊断方法的建立[D].北京：中国农业科学院，2013.

[9]刘沫飞，李蕾，郑辉，等.2010—2011年我国五省PRRSV分离株ORF5基因遗传变异分析[J].动物医学进展，2012，33（12）：6-11.

[10]黄伟坚，卢桂娟，陈樱，等.南方三省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查研究[J].中国预防兽医学报，2007，29（2）：150-154.

[11]陈光明，刘玉华，金彩莲，等.泰州地区外表健康猪群猪繁殖与呼吸综合征血清学调查[J].江苏农业科学，2012，40（10）：196-197.

[12]王小敏，何孔旺，周忠涛，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析[J].华北农学报，2014，1（1）：232-238.endprint