RP－HPLC 测定苎麻不同部位中3 个三萜酸异构体的含量

邹盛勤，周兰姜

(江西省天然药物活性成分研究重点实验室，宜春学院 化学与生物工程学院，江西 宜春 336000)

苎麻Boehmeria nivea(L. )Gaud. 是荨麻科苎麻属植物，又名野麻、野苎麻等，广泛分布于我国南方地区，生于山谷林边或草坡，是重要的水土保持植物和民间草药，以湖北、湖南、江西及四川为最多，其中长江流域产量占我国总产量的90%以上。［1］苎麻主要以叶、根入药， 《本草纲目》记载苎麻“甘，寒，无毒”，具有凉血、止血、散瘀的功效，主治跌扑瘀血，创伤出血等。［2］

研究表明，苎麻根、叶具有广泛的生物活性，止血和安胎效果优良，且有防治心脑血管疾病和治疗肝、肺疾病的药效作用。［1，3］文献报道苎麻属植物主要含有三萜酸类、黄酮类、蒽醌类、有机酸和生物碱类等化学成分，［4－7］其中三萜酸类成分种类丰富，含有坡模酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸等及其衍生物。［8］但目前苎麻作为药用资源，其相应的研发基础主要集中于化学成分的分离及定性鉴别，质量标准尚未建立，严重影响其开发利用。本实验结合参考文献，建立了RP－HPLC 同时测定苎麻不同部位中白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的含量，为苎麻药材的开发利用和质量标准制定提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

乙 腈 为 色 谱 纯 (J＆K SCIENTIFIC LTD. )，95%乙醇为分析纯(天津市永大化学试剂有限公司)，水为超纯水，白桦脂酸对照品(批号10039－200812，南昌贝塔生物科技有限公司)，齐墩果酸对照品(批号110709－201106，中国食品药品检定研究院)，熊果酸对照品 (批号110742－201304，中国食品药品检定研究院)。苎麻于2013年11 月采自江西省宜春市郊(盛花期)，经鉴定为荨麻科植物苎麻Boehmeria nivea (L. )Gaud. 的全草。

1.2 仪器

Waters 高效液相色谱仪(515 泵，2996 光电二极管阵列检测器，Empower 中文色谱数据工作站);HP－DR05 高纯水机(上海广创通用设备有限公司);CP225D 准微量天平(德国赛多利斯公司);FY177 中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);超声波清洗器(江西华特精密仪器有限公司)。

2 结果与分析

2.1 白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸检测波长的确定

采用PAD 检测器对白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品溶液进行全波段扫描，流动相中3 组分均在201.0nm 左右有最大紫外吸收，但在此波长处乙腈存在较强的末端吸收。［9］为减少噪音影响，提高信噪比，选择210nm 为检测波长信噪比高，峰形对称，在消除噪音干扰的同时白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸均达到基线分离。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液

分别准确称取白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品7.66mg，1.84mg，4.70mg，置于10mL 棕色容量瓶中，适量流动相溶解，定容，振荡均匀，制成含白桦脂酸0.766mg/mL，齐墩果酸0.184mg/mL 和熊果酸0.470mg/mL 的对照品混合溶液。

2.2.2 苎麻样品溶液

取阴干后苎麻不同部位样品，于75℃下干燥6h，粉碎过筛。取苎麻的花、叶、茎、根和全草粉末样品，分别约为1.0g，精密称定，置于50mL 具塞锥形瓶中，加入95%乙醇50mL，称重，超声提取45min，冷却至室温后用95%乙醇补足损失的重量，振荡均匀后用0.45μm 微孔滤膜过滤，得样品溶液。

2.3 色谱条件

色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5μm)，流动相为乙腈∶ 水∶ 乙酸(80∶ 20∶ 0.2，v/v)，流速为1.0mL/min，检测波长210nm，柱温为25℃。在选定的色谱条件下，对照品和苎麻样品溶液中白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸均实现基线分离，峰形对称，理论塔板数均大于11000。对照品及苎麻样品的HPLC 谱图见图1。

图1 对照品(A)和苎麻样品(B)的HPLC 色谱Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference(A)substances and samples of Boehmeria nivea(B)

2.4 精密度试验

准确吸取对照品混合溶液20μL，连续进样5次，通过峰面积来计算出色谱系统的精密度，白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD 分别为0.8% (n=5)，0.7% (n =5)和0.4% (n =5)，仪器精密度良好。

2.5 方法重现性试验

取同一苎麻叶样品5 份，每份约1.0g，精密称定。按“2.2.2”项下方法制备样品溶液。准确吸取各样品溶液20μL 进样分析，外标法计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的含量，其RSD 分别为1.2% (n=5)、1.3% (n =5)和1.5% (n =5)，样品制备方法重现性良好。

2.6 加样回收率试验

精密称定已知白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸含量的苎麻叶样品6 份，加入约与样品中3 组分含量相当的对照品，按“2.2.2”项下方法制备苎麻样品溶液，精密吸取20μL 注入高效液相色谱仪，外标法计算含量，白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为100.4% (RSD =1.9%)、98.0%(RSD=2.2%)和96.2% (RSD=1.6%)。

2.7 线性关系试验

分别精密吸取“2.2.1”项下制备的对照品混合溶液50、200、500、1000、2000、3000μL 置于10mL 容量瓶中，加流动相至刻度，定容，得白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品混合系列溶液。分别吸取20μL，根据选定的色谱条件进样并计算出对照品的峰面积，以对照品的进样溶度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。

表1 线性关系考察结果Table.1 Investigation results and linear relations

2.8 样品含量定量分析

精密吸取不同部位苎麻样品溶液20μL 进样，重复3次，按“2.3”项下选定色谱条件测定样品中3 个异构体的峰面积积分值，外标法计算含量。苎麻样品中白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸含量的测定结果见表2。

表2 苎麻不同部位中白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的含量测定结果(mg/g，n=3)Table.2 Contents of three triterpenic acids in different parts of Boehmeria nivea (mg/g，n=3)

3 讨论

在苎麻的不同部位中，白桦脂酸含量花中最高，为1.517 mg/g，在茎中最低，为0.212mg/g;齐墩果酸含量在叶中最高，为1.750mg/g，在茎中最低，为0.237mg/g;熊果酸含量在叶中最高，为3.875mg/g，在茎中最低，为0.327mg/g。3 个三萜酸(花中白桦脂酸除外)在苎麻中呈规律性分布，不同部位含量均为叶﹥根﹥花﹥茎，同一部位含量均为熊果酸﹥齐墩果酸﹥白桦脂酸，且含量差异较为明显，白桦脂酸主要存在于苎麻花中。

本试验建立的反相高效液相色谱法样品处理简单，简便快速，分离效果好，可同时测定苎麻不同部位中3 个五环三萜酸异构体(白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸)的含量，为苎麻中三萜酸的定量分析及其开发利用提供了依据。

［1］廖丽萍，肖爱平，冷鹃，等. 苎麻根、叶化学成分及药用研究概况［J］. 中国麻业科学，2013，35(3):163－166.

［2］李文武，丁立生，李伯刚. 苎麻根化学成分的初步研究［J］. 中国中药杂志，1996，(7):427－428.

［3］熊维新，李开泉. 苎麻的药用开发价值［J］. 江西中医学院学报，2006，(3):51－52.

［4］许琼明，陈国庆，范金胤. 苎麻根化学成分研究［J］. 中国中药杂志，2009，(20):2610－2612.

［5］邵立军，王建农. 苎麻根化学成分研究［J］. 中药材，2010，(7):1091－1093.

［6］陈国庆，刘艳丽，谢茜，等. 苎麻根化学成分研究［J］.中草药，2009，40(5):683－686.

［7］刘闯，邹冲，郭志勇，等. 苎麻叶化学成分研究［J］. 中国中药杂志，2010，35(11):1432－1434.

［8］夏爱军. 中药苎麻根抗乙肝病毒活性及其化学成分研究［D］. 北京:中国中医科学院，2010.

［9］ 谭荣，王毓杰，张雨欣，等.HPLC 测定藏药风毛菊中茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯的含量［J］. 中国中药杂志，2014，39(6):1054－1057.