HPLC检测食品中偶氮玉红

刘超 景赞

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）

HPLC检测食品中偶氮玉红

刘超 景赞

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）

采用高效液相色谱对食品中偶氮玉红进行检测。建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以甲醇、10mmol/L乙酸铵为流动相的检测方法。结果表明：该方法所测得的偶氮玉红在0～100.0μg/mL内具有良好的线性，检出限为0.15mg/kg，加标回收率为89.2%～97.5%。该方法具有分析速度快、操作方便、重现性好、灵敏度高等特点。该方法适合食品中偶氮玉红的分析检测。

食品；偶氮玉红；高效液相色谱

偶氮玉红（Azorubine），又名酸性红，为人工合成色素，通过重氮化4-氨基萘磺酸和4-羟基萘磺酸之间的偶合反应合成，大量食用合成色素后，对人身体健康会造成潜在危害。食品添加剂使用标准（《GB2760-2014》）[1]规定偶氮玉红可用于冷冻饮品，如可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果，还有焙烤食品馅料及表面用挂浆（仅限饼干夹心），然而某些不法分子为增加产品色泽，在食品中超范围或非法添加偶氮玉红，对人们的健康造成危害。目前国家尚未发布食品中偶氮玉红的检测方法，国内对食品中偶氮玉红的检测也是鲜有报道；喻凌寒等[2]使用高效液相色谱检测食品中偶氮玉红，但前处理较为繁琐。因此研究能够准确、快速的检测食品中偶氮玉红的检测方法是十分必要且具有现实意义的。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

辣椒粉，二荆条辣椒面，四川省青川县川珍实业有限公司；

西瓜汁，乐山麦尚饮品店；

辣椒酱，香辣豆豉酱，李锦记集团；

以上产品均购买于2015年7月14号。

偶氮玉红标准品，Sigma-Aldrich；甲醇，色谱纯；

乙醇、氨水、乙酸、乙酸锌、亚铁氰化钾，均为分析纯；水，GB/T6682规定的一级水。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪，岛津DGU-20A；

分析天平（精确度0.01mg），德国赛多利斯集团，CP225D；

水浴恒温振荡器，常州冠军仪器制造有限公司，SHA-B；

自动旋涡混合器，天津药典标准仪器厂，ZH-2；低速离心机，四川蜀科仪器有限公司，TD420。

1.3 标准溶液的制备

1.3.1 偶氮玉红标准储备液

称取0.01g偶氮玉红标准品，加水溶解并定容至10mL，此溶液浓度为1mg/mL。

1.3.2 偶氮玉红标准工作溶液

根据试验需要将偶氮玉红储备液，用水分别稀释成浓度为0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0μg/mL的标准工作溶液。

1.4 试样提取与净化

1.4.1 辣椒粉

称取粉碎样品5.0g于50mL离心管中，用15mL乙醇：氨水（75∶25）振荡提取两次，合并提取液，提取液在氮吹仪上吹至5mL左右，用乙酸调至pH=5，待Oasis Wax前处理小柱（6cc/150mg）净化。

1.4.2 西瓜汁

准确量取5.0mL样品于50mL离心管中，乙酸调至pH=5后，待OasisWax前处理小柱（6cc/150mg）净化。

1.4.3 辣椒酱

准确称取试样5.0g于50mL离心管中，加入5mL水溶解，摇匀，加入2mL 0.106g/mL亚铁氰化钾溶液，2mL 0.22g/mL乙酸锌溶液，4000r/min离心10min，取上清液，再用15mL乙醇∶氨水（75∶25）振荡提取1次，4000r/min离心10min，合并上清液。提取液在氮吹仪上吹至5mL左右，用乙酸调至 pH=5，待 Oasis Wax前处理小柱（6cc/150mg）净化。

1.4.4 净化

将Oasis Wax柱（6cc/150mg）依次用6mL甲醇、6mL水活化，将上述提取液移入已活化好的Oasis Wax柱（6cc/150mg）待样液完全流出后，依次用6mL 0.5%甲酸甲醇溶液，6mL水淋洗，弃去全部淋洗液，最后用6mL 25%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液氮气吹干（45℃），用水定容至10mL。

1.5 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3，4.6×150mm，5μm；

进样体积：10μL；

流速：1.0mL/min；柱温：40℃；

检测波长：516nm[3]；

流动相：A-甲醇，B-10mmol/L乙酸铵，梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件Table 1 Mobile phase condition

2 结果讨论

2.1 液相色谱柱的选择

Inertsil ODS-3代表了当今世界上新一代C18反相填料，它的基质是一种新型的高纯硅胶，这种硅胶不仅纯度高达99.999%，而且颗粒球形对称度好，表面均匀光滑，从而使硅胶的理化性质更加均一，载体机械强度大，键合度及柱效更高，更由于GL Sciences公司高超的化学键和技术，使得Inertsil ODS-3成为世界上最好的C18反相填料之一。

鉴于此，在本试验中使用Inertsil ODS-3（4.6×150mm，5μm）作为分析柱。

2.2 线性范围

根据偶氮玉红的灵敏度，用空白样品提取液分别配成 浓 度 为 0μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的系列标准工作溶液，4℃保存，现用现配；以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线方程见图1。

图1 偶氮玉红标准曲线回归方程Fig.1 Standard curve regression equation of azorubine

图1显示，偶氮玉红的标准曲线如下：

可见，偶氮玉红在0～100.0μg/mL范围内，线性良好。

2.3 检出限

由自动进样器吸取20μg/mL的偶氮玉红标准工作溶液10μL，注入色谱仪中，平行进样3次，求出仪器检出限的平均值，而后求出方法检出限，结果见表2。

表2 偶氮玉红检出限Table 2 Detection limit of azorubine

由表2可知，仪器平均检出限为0.763×10-2μg，方法检出限为1.5mg/kg，可见，仪器和方法灵敏度很高。

2.4 回收率

准确称取9份混匀的试样各5g或5mL（精确至0.01g）置于50mL离心管中，准确加入偶氮玉红储备液，使偶氮玉红含量分别为0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL，其他步骤同1.3、1.4。

由表3可知，偶氮玉红方法回收率为89.2%～97.5%。符合GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测中的规定（80%～110%）。

表3 偶氮玉红加标回收率Table 3 Adding standard recovery of azorubine

2.5 重复性

偶氮玉红中间液稀释成3μg/mL标准溶液，由自动进样器吸取净化后的样品溶液10μL，注入色谱仪中，记录色谱图，测定峰面积。计算出RSD值。结果发现，RSD 为1.20%，说明该方法重复性良好。

3 实际样品分析

用上述方法对市场上的辣椒酱、辣椒粉进行测定，结果表明：偶氮玉红在所测样品中未检出。可能是所检测的辣椒酱或者辣椒粉厂家在产品中并没有使用偶氮玉红。

4 结论

建立了高效液相色谱仪检测食品中的偶氮玉红的方法，此方法检出限为1.5mg/kg，在0～100.0μg/mL取得良好线性范围，方法回收率为89.2%～97.5%，方法重复性为1.20%。所建方法能够满足实际检测的需要。

[1]中华人民共和国卫生部.GB2760-2014食品安全国家标准·食品添加剂使用标准[S].北京：中华人民共和国卫生部,2014.

[2]喻凌寒,牟德海,苏流坤,等.高效液相色谱-二极管阵列检测器联用检测食品中的偶氮玉红 [J].分析实验室,2006,23(2)∶216-219.

[3]中华人民共和国卫生部.GB/T28309-2012食品安全国家标准·食品添加剂酸性红（偶氮玉红）[S].北京∶中华人民共和国卫生部,2012.

Detection of Azorubine in Food Using HPLC

LIU Chao JING Zan
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center，Leshan 614000，China)

In the paper,the author tested azorubine in food with HPLC method.The method was developed with novel HPLC column Inertsil ODS-3.Mobile phase was methyl alcohol,10mmol/L ammonium acetate.There was a good linear in 0～100.0μg/mL,its detection limit was 0.15mg/kg.And adding standard recovery was 89.2%～97.5%in azorubine using method.There were advantages in the method,such as fast,easy,reproducible and relatively sensitive.Therefore,the method was suitable for the detection of azorubine in food.

Food;azorubine;HPLC

TS2073

A

1008-1038(2015)10-0041-03

2015-07-13

刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全