133 例霍奇金淋巴瘤中EBERs 表达与临床分期、疗效相关性分析

胡利娟 钟 茜 胡小山 聂 豪 周 旻

霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma，HL)，是发生于淋巴组织的恶性肿瘤，与非霍奇金淋巴瘤(NHL)统称为恶性淋巴瘤。HL 是西方国家中最常见的肿瘤之一，其发病率高达每年3/100 000，以青年人居多，在我国约占所有淋巴瘤的10%。其病理组织学特征表现为正常淋巴组织结构破坏、多种反应性细胞浸润的背景中散在特征性Reed -Sternberg 细胞(RS 细胞)及其变异型。随着多药物化疗和/或放疗技术的发展和应用，HL 的治疗率高达80% ～90%［1］。然而，晚期患者预后仍然不理想，存在难治性、治疗后复发，尤其是自体干细胞移植后复发患者的中位生存时间很少超过3 年。因此，需要我们继续寻找新的治疗靶点，准确评估其预后。EBV 感染与约40%霍奇金淋巴瘤(HL)的发病相关，EBV 表达的非编码RNA(EBERs)部分HL 中表达，但其功能和机制并不清楚。

本研究收集了我院2000 ～2013 年期间133 例霍奇金淋巴瘤(HL)患者的石蜡组织标本以及详细的临床资料，进行了EBERs 原位杂交染色，并根据染色情况针对HL 的临床分期和疗效进行了初步分析，并报告如下:

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2000 年1 月～2013 年12 月之间在中山大学附属肿瘤医院住院，并经病理学及免疫组化检查确诊的霍奇金淋巴瘤133 例，男96 例，女37 例，男∶女=2.6∶1;发病年龄3 ～75 岁，中位发病年龄为39.0 岁;其中Ⅰ期20 例，Ⅱ期52 例，Ⅲ期41 例，Ⅳ期20 例。

1.2 诊断及分期方法

浅表淋巴结采用活检手术切取，腹腔淋巴结采用粗针穿刺或手术切除活检。病理学诊断包括HE 染色、免疫组化检查。分期基本检查包括:头颈部、胸部、腹部CT 或全身PET/CT，骨髓细胞学检查。按Ann Arbor 分期系统分期。

1.3 治疗方法及疗效评价

所有患者用ABVD 方案化疗4 ～6 个疗程，即阿霉素(ADM)20 mg/m2、静脉滴注、第1 和第15 天，博来霉素(BLM)10 mg/m2、静脉滴注、第1 和第15 天，长春碱(VLB)6 mg/m2静脉滴注、第1 和第15 天，达卡巴嗪(DTIC)375 mg/m2、第1 和第15 天，28 d 为一个周期。疗效评价采用WHO 标准，即完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)或复发、死亡。其中CR+PR 为总有效(OR)，SD、PD、复发、死亡为无效。

1.4 EBERs 原位杂交染色

使用EBER 原位杂交试剂盒(ISH5022，中杉金桥生物技术有限公司)，具体步骤参考试剂盒说明书。染色阳性率计算:每例标本中EBERs 阳性的肿瘤细胞占所有肿瘤的百分比。

1.5 统计学方法

分别计算各组患者化疗的有效率(ORR)。采用SPSS 21.0 软件进行统计学分析，统计描述资料分析采用卡方检验或Fisher 精确检验。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EBERs 表达与HL 临床分期的相关性分析

133 例霍奇金淋巴瘤患者的石蜡切片进行EBERs 原位杂交染色，结果发现52 例为EBERs 阳性，阳性率为39%(52/133)，从染色结果看，阳性病例中的EBERs 的表达率高低不同(见图1)，结合患者的临床分期，进行统计分析，发现EBERs 的阳性率和临床分期呈正相关性(r =0.3150，P =0.000 2)，见图2。提示EBERs 表达高的患者临床分期较晚。

2.2 EBV 感染对HL 化疗疗效的影响

133 例HL 患者中，EBV 阳性的患者52 例，化疗有效为24 例，总有效率为46.2%(24/52);EBV 阴性患者81 例，化疗有效54 例，总有效率为66.7%(54/81)，后者高于前者，经卡方检验后，差异有统计学意义(χ2=5.495，P =0.019 1)，见图3。

图1 不同霍奇金淋巴瘤标本中EBERs 表达的阳性率不同

图2 霍奇金淋巴瘤中EBERs 的表达与临床分期呈正相关

图3 EBV 阳性组化疗有效率低于阴性组

3 讨论

EBV 在EBV 阳性的霍奇金淋巴瘤病例中的重要作用逐步得到证实。首先，HRS 细胞中很多受体酪氨酸激酶的表达和EBV 之间存在反比关系［2］。其次，体外实验证实EBV 解救残缺的生发中心B 细胞从而避免凋亡［3-5］。西方国家中，约40%的经典型霍奇金淋巴瘤的HRS 细胞中含有EBV［6］，在中美和南美洲儿童霍奇金淋巴瘤的EBV 感染率高达90%，AIDS 患者的HRS 细胞中EBV 达100%［7］。在EBV(+ )HRS 细胞中表达三个病毒蛋白(EBNA1、LMP1、LMP2A)和两个非编码RNAs(BARTs 和EBERs)。EBNA1 几乎表达于所有的EBV 感染的细胞中，与EBV 基因组的复制和维持病毒颗粒的稳定性有关。EBNA1 可以上调CCL20 从而吸引调控的T 细胞(T Reg)以及下调抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶- k，从而参与霍奇金淋巴瘤的发病［8-9］。癌基因LMP1 转化的裸鼠可以发生B 细胞淋巴瘤。膜蛋白LMP1 模拟CD40 受体，激活NF -kB 信号通路［10］。此外，在HRS 细胞中，EBV 与TNFAIP3 突变之间存在反比关系，提示EBV 在促进TNFAIP3 突变的机制中发挥重要作用。

由上可见，EBV 感染在HL 的发病过程中起到重要作用，而EBERs 的表达是否在HL 的发生发展过程中发挥重要作用、以及对于HL 的治疗产生什么影响尚不清楚。我们收集的病例中进行EBERs 原位杂交染色，发现不同的病例其阳性率是不同的，因此联合HL 的临床分期急性相关性分析，结果发现EBERs 的表达和临床分期呈正相关;此外，将EBV 感染是否阳性进行分组，分别分析其化疗总有效率，发现和EBV 阴性患者相比，EBV 阳性的患者化疗总有效率较低，提示EBERs 可以作为霍奇金淋巴瘤患者的独立预后因素。但是EBERs 在HL 的发病过程中具体的功能和分子机制，尚需要进一步研究。

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