复方槲皮素乳膏的制备和质量控制

魏传梅，胡丽敏，樊其忠，孙绍伟，高培民

(滨州医学院附属医院药学部，山东滨州 256603)

复方槲皮素乳膏的制备和质量控制

魏传梅，胡丽敏，樊其忠，孙绍伟，高培民

(滨州医学院附属医院药学部，山东滨州 256603)

目的 研究复方槲皮素乳膏的制备，并建立其质量控制方法。方法拟定处方组成与制备工艺,用高效液相色谱法测定浓度,并进行稳定性实验。结果该制剂呈黄色细腻乳膏。槲皮素在0.053～1.696 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，8-甲氧补骨脂素(8-MOP)在0.053～1.696 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8)，倍他米松在0.100～1.000 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，处方量槲皮素、8-MOP和倍他米松的平均回收率依次为99.83%、99.52%和99.74%(n=9)。3批制剂样品经过12个月的长期稳定性考察，各项指标均符合要求。结论该制剂处方组成合理，制备工艺可行，制剂质量稳定可控。

槲皮素；倍他米松；8-甲氧补骨脂素；制备；质量控制

随着白癜风病因研究进展，治疗白癜风在常用促使黑素合成的药物基础上，加强抗胆碱治疗和抗过氧化治疗[1-2]。研究表明槲皮素可以通过上调酪氨酸酶活性和清除氧自由基促进黑素生成[3]，外用可以促进棕黄色豚鼠皮肤黑素的合成及黑素细胞的增殖[4]。含槲皮素的中药菟丝子常作为治疗白癜风的外用制剂[5-6]。本实验改进了已应用20年的祛白脂乳膏，加入具有促黑素生成和抗过氧化剂双重作用的槲皮素，同时增加抗胆碱药山莨菪碱浓度[7]，用强效糖皮质激素丙酸倍他米松取代了弱效糖皮质激素地塞米松，制成复方槲皮素乳膏。本实验就该制剂的制备及质量控制方法进行探讨，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验器具 日本岛津LC-2010 CHT高效液相色谱仪(紫外-可见检测器)；LC岛津色谱工作站；HH-8型数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；JJ-1型增力电动搅拌机(江苏省金坛市医疗仪器厂)；202型电热恒温(鼓风)干燥箱(山东潍坊精鹰医疗器械有限公司)；80-2型离心机(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；pHS-3C型pH计(上海精密科学仪器制造有限公司)；FA2204B电子天平(上海精密科学仪器制造有限公司)；762紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；超声清洗器(上海致金仪器设备有限公司)

1.1.2 实验药品 槲皮素标准品(批号100081-200907，浓度96.5%)；8-甲氧补骨脂素(8-MOP)标准品(批号100437-200601，浓度99.3%)；倍他米松标准品(批号100118-201204，浓度99.3%)；山莨菪碱标准品(批号100249-201303，浓度99.8%)，以上标准品购自中国食品药品检定所。槲皮素原料药(陕西天地源生物科技有限公司，批号HPS-131001，浓度大于或等于95.0%)；8-甲氧补骨脂素原料药(江苏迪赛诺制药有限公司，批号20111102，浓度99.0%)；倍他米松原料药(天津天药药业股份有限公司，批号NBE130801，浓度99.0%)；山莨菪碱原料药(河南普瑞制药厂，批号20130510，浓度98.3%)；二甲亚砜(莱阳开发区精细化工厂，批号20130512)；单硬脂酸甘油酯(湖南尔康制药有限公司，批号20140202)；液体石蜡(吉化江城油脂化工厂，批号20130901)；甘油(湖南尔康制药有限公司，批号20130409)；白凡士林(江西德成制药厂，批号20140201)；十二烷基硫酸钠(湖南尔康制药有限公司，批号20120901)；十八醇(湖南尔康制药股份有限公司，批号20121004)；丙二醇(湖南尔康制药有限公司，批号20131107)；其他辅料符合药用规格。

1.2 方法

1.2.1 处方 8-MOP 0.10 g，倍他米松0.10 g，槲皮素0.10 g，山莨菪碱0.50 g，盐酸适量，二甲基亚砜适量，液体石蜡11.00 g，白凡士林21.20 g，单硬脂酸甘油酯6.90 g，十八醇6.50 g，十二烷基硫酸钠1.20 g，甘油6.00 g，丙二醇6.00 g，尼泊金乙酯0.05 g，纯化水适量制成100 g。

1.2.2 制备 称取处方量白凡士林、液体石蜡、十八醇、单硬脂酸甘油酯，80 ℃水浴加热溶解为油相；十二烷基硫酸钠、甘油、丙二醇、尼泊金乙酯及适量纯化水，80 ℃水浴加热溶解为水相；山莨菪碱80 ℃水浴加热溶解于1 mol/L盐酸溶液后加入水相中；将80 ℃油相匀速加入水相中，100 r/min搅拌乳化10 min，冷却至约50 ℃，继续搅拌加入被适量二甲基亚砜溶解的8-MOP、倍他米松、槲皮素，称质量加水至100 g，冷却得成品。

1.2.3 质量控制

1.2.3.1 性状 本品为黄色均匀、细腻乳膏。

1.2.3.2 pH值 取样品5 g,加纯化水25 mL,稀释后,测定pH值为5.5～6.5。

1.2.3.3 检查 装量、粒度和微生物限度检查均符合中国药典2010年版二部附录乳膏剂项下有关规定。

1.2.3.4 浓度测定方法

1.2.3.4.1 检测波长的确定 配制适当浓度的山莨菪碱、槲皮素、8-MOP和倍他米松溶液，在200～400 nm波长范围内扫描。山莨菪碱在210 nm有最大吸收，槲皮素在217、252、374 nm有最大吸收，8-MOP最大吸收波长为250 nm，倍他米松的最大吸收波长为240 nm，结合上述各组分的百分吸收系数和色谱峰形，确定槲皮素、8-MOP和倍他米松3组分的测定波长为250 nm。

1.2.3.4.2 溶液的配制 分别精密称取干燥至恒重的槲皮素、8-MOP和倍他米松溶液53.0、53.0、50.0 mg于100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，超声振荡使药品溶解，最终配制成槲皮素、8-MOP和倍他米松的浓度分别为530、530、500 μg/mL阳性对照品储备液(a部分)，备用。精密量取复方槲皮素乳膏约2.5 g置烧杯中，加甲醇约60 mL，将烧杯置80 ℃热水浴加热，充分搅拌，使乳膏溶解后，转移至100 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冰浴冷却1 h，取出，迅速滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，滤液作为供试品溶液(b部分)。按处方组成、比例和制备工艺，制成不含槲皮素、8-MOP和倍他米松，含山莨菪碱的阴性对照制剂，按“b部分”方法制得阴性对照溶液(c部分)。

1.2.3.4.3 色谱条件及系统适应性实验 色谱柱：Inert Sustain C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相∶甲醇-磷酸盐缓冲液(pH 6.64)=50∶50，波长：250 nm，流速：1 mL/min，检测波长：250 nm，进样量：20 μL，柱温：25 ℃。理论塔板数以槲皮素、8-MOP和倍他米松计算均不低于4 000。上述色谱条件测定样品的色谱图见图1。

A：样品；B：阳性对照液；C：阴性对照液。1：槲皮素；2:尼泊金乙酯；3：8-MOP；4：倍他米松；5：山莨菪碱。

图1 HPLC 色谱图

1.2.3.4.4 线性关系考察 精密量取1 mL阳性对照品储备液用甲醇定容于10 mL容量瓶中，取上述溶液1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0、32.0 μL进样，记录色谱图。以进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线。

1.2.3.4.5 精密度实验 精密量取阳性对照品储备液，配制成含有一定质量浓度槲皮素、8-MOP和倍他米松的混合溶液，依“色谱条件及系统适应性实验”项下色谱条件，在日内和日间(5 d内)分别进样6次。

1.2.3.4.6 重复性实验 取同一批的复方槲皮素乳膏样品6份，按“溶液的配制”的“b部分”方法制备成供试品溶液，测定。

1.2.3.4.7 稳定性实验 将同一批号(20131212)样品的供试品溶液，室温下放置0、2、4、6、8、12、24 h时，按“色谱条件及系统适应性实验”项下色谱条件测定峰面积。

1.2.3.4.8 回收率实验 模拟处方比例加入槲皮素对照品、8-MOP对照品和倍他米松对照品标示量的80%、100%、120% 制成不同的模拟样品,按“溶液的配制”的“b部分”同法制备,测定回收率。

1.2.4 制剂考察

1.2.4.1 浓度测定 取3个批次的复方槲皮素乳膏剂(每批号3份)，按“溶液的配制”的“b部分”方法制备供试品溶液，按“色谱条件及系统适应性实验”色谱条件测定。

1.2.4.2 稳定性实验

1.2.4.2.1 光照实验 取1批样品,除去外包装置于无色透明的密闭容器中,放置在强度2 000 Lx 光照条件下(相当于一般室内照度),分别于0、2、4、6、8、10 d 观察制剂外观,并进行有关测定。10 d后，酸碱度、黏度均未变化。按“溶液的配制”的“b部分”同法制备供试品溶液，按“色谱条件及系统适应性实验”项下色谱条件测定。

1.2.4.2.2 离心实验[8]取样品10 g,装入带刻度的离心管中,以2 500 r/min 转速离心30 min,观察乳膏有无分层现象。

1.2.4.2.3 耐热耐寒实验 取样品10 g,装入包装盒内加盖,分别置55 ℃干燥箱恒温6 h,置-15 ℃冰箱24 h,观察乳膏有无分层现象[8]。

1.2.4.2.4 稳定性考察 将样品加盖密闭，于温度(25±2)℃、相对湿度(60±5)%的条件下，放置12个月，按拟定的质量控制标准检测。

1.2.4.3 皮肤刺激性实验 取6只健康家兔,左右侧背部分别剃毛约2.5 cm2,分别在左侧处涂乳膏剂,右侧处涂空白基质,24 h 后观察皮肤刺激反应。重复实验3次，观察皮肤是否产生发红、发疹、水泡等现象。

2 结 果

2.1 质量控制

2.1.1 线性关系考察 槲皮素在0.053～1.696 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)，8-MOP在0.053～1.696 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8)，倍他米松在0.100～1.000 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)。其回归方程分别为槲皮素Y=4 198 547.45X-341 63.70；8-MOPY=9 549 055.44X+28 656.48，倍他米松Y=3 302 544.25X-146 750.03。

2.1.2 方法精密度 测定峰面积结果，槲皮素日内和日间相对标准偏差(RSD)分别为0.29%和0.45%(n=6)；8-MOP的日内和日间RSD分别为为0.30%和0.56%(n=6)；倍他米松的日内和日间RSD分别为为0.16%和0.47%(n=6)。

2.1.3 方法重复性 槲皮素平均浓度为0.998 7 mg/g，(RSD=0.65%，n=6)；8-MOP平均浓度为0.987 8 mg/g，(RSD=1.05%，n=6)；倍他米松平均浓度为0.999 0 mg/g，(RSD=0.72%，n=6))。表明测定方法重复性良好。

2.1.4 方法稳定性 槲皮素、8-MOP和倍他米松浓度的RSD分别为0.69%(n=6)、0.55%(n=6)和0.59%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.5 方法回收率 处方量槲皮素、8-MOP和倍他米松的平均回收率依次为99.83%(RSD=0.29%，n=9)、99.52%(RSD=0.62%，n=9)、99.74%(RSD=0.44%，n=9),见表1。

表1 槲皮素、8-MOP和倍他米松加样回收率结果(n=9)

2.2 制剂考察

2.2.1 浓度测定 槲皮素、8-MOP和倍他米松的浓度依次为标示量的99.65%(RSD=0.35%，n=3)、98.90%(RSD=0.79%，n=3)和99.33%(RSD=0.74%，n=3)。

2.2.2 稳定性实验 (1)光照实验：槲皮素、8-MOP和倍他米松的含量依次为标示量的92.35%、98.45%和99.20%。(2)离心实验：乳膏无分层现象。(3)耐热耐寒实验：乳膏无分层现象。(4)稳定性考察：槲皮素、8-MOP和倍他米松的含量依次为标示量98.45%(RSD=0.35%，n=3)、99.25%(RSD=0.45%，n=3)和99.10%(RSD=0.34%，n=3)。

2.2.3 皮肤刺激性实验 皮肤未产生发红、发疹、水泡等现象,即该乳膏剂对皮肤无刺激性。

3 讨 论

槲皮素、8-MOP和倍他米松不溶于水,需用适量二甲亚砜将三者溶解于油相。槲皮素在pH在6～7左右时稳定，山莨菪碱水溶液pH为9。为获得稳定的槲皮素加入了一系列浓度的盐酸溶液以调节含山莨菪碱基质酸碱性在pH5.5～6.5范围内，制得的乳膏稳定性符合要求。由于样品为乳膏剂型，制剂中含有大量的油脂性及类脂性基质，在样品提取过程中，水浴温度低于70 ℃时，乳膏剂在甲醇中的溶解度下降，对提取效果有影响，但高于80 ℃对槲皮素的稳定性有影响，因此提取时控制温度80 ℃的热水浴，并在温度下降至70 ℃之前完成转移。由于槲皮素易发生光解,对照品与水解样品制备过程中均应注意避光,制剂应避光贮存。

由于山莨菪碱在250 nm处的吸收较弱，故未与其余组分同时测出。参考文献[9-11]对色谱条件进行摸索，随着不同体积比的甲醇-水(65∶35、60∶40、50∶50)流动相极性的增加，基质峰与8-MOP峰逐渐分离，分离度大于1.5，符合含量测定要求。为改善槲皮素峰形，缩短出峰时间，更换流动相为甲醇∶磷酸盐缓冲液(pH 6.64)=50∶50，3种待测组分均在30 min内出峰，且与杂质峰分离良好。

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Preparation and quality control of compound quercetin creams*

WeiChuanmei,HuLimin,FanQizhong,SunShaowei，GaoPeiming

(DepartmentofPharmacology,theAffiliatedHospitalofBinzhouMedicalUniversity，Binzhou,Shandong256603，China)

Objective To study the preparation of quercetin compound cream and establish its standard of quality control.Methods The composition of recipe and manufacturing technique were designed.The content of components were determined by HPLC,and its stability tests were carried out.Results The product was a kind of yellow smooth cream.The linear ranges were 0.053-1.696 μg for quercetin(r=0.999 9)，0.053-1.696 μg for 8-methoxypsoralen(r=0.999 8)and 0.100-1.000 μg for betamethasone(r=0.999 9).The average recovery rate were 99.83%,99.52%,and 99.74% of quercetin,8-methoxypsoralen,and betamethasone(n=9).After 12 months′ long term stability test,all the 3 batches of sample preparations were in line with relevant regulations.Conclusion The designed recipe was reasonable,and the manufacturing technique was feasible,with stable and controllable quality．

quercetin；betamethasone；8-methoxypsoralen；preparation；quality control

术与方法·

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.23.023

滨州市科技发展计划(2013ZC1801)。

魏传梅(1972-)，副主任药师，硕士，主要从事医院药学研究。

R282

A

1671-8348(2015)23-3236-03

2015-02-08

2015-07-10)