蒿甲醚粉针剂对裸鼠体内移植人肺腺癌A549 的抑制作用

余春洁，王 鹏，胡慧媛，贾艳琪，施 娟，徐洪吕

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，占新发肿瘤病例的14.5%，居各类肿瘤死亡病例的首位，严重威胁人们健康，影响其生活质量，且肺癌病死率高，多数患者在明确诊断时即有转移，5 年生存率约维持在15%［1］。治疗肺癌的方法有很多，但是化学药物的毒性、手术和放射疗法对人体正常组织的损伤容易导致肿瘤复发，因此，寻找低毒性、特异性杀伤肺癌细胞的药物和方法一直是医学探索的热点。20 世纪60 年代，我国科研人员从植物青蒿中提取出抗疟有效成分青蒿素，随后其在临床中迅速取代奎宁等传统抗疟药，被WHO 称为治疗疟疾的最大希望。近年研究发现，青蒿素及其衍生物有明确的抗肿瘤和抑制肿瘤血管生成的作用［2］，其作用与bcl－2 基因、PCNA基因表达下调和bax 蛋白表达升高相关［3］。蒿甲醚 (Artemether)为青蒿素的脂溶性衍生物，是含过氧桥结构的倍半萜内酯化合物，在临床上治疗恶性疟和脑型疟有显著疗效［4］，并有治疗疟疾、血吸虫、免疫调节等作用［5］，其可选择性杀伤肿瘤细胞而对正常组织细胞的毒性较小，与传统化疗药物不存在交叉耐药［6］。有研究显示，蒿甲醚能抑制U251 细胞生长，呈剂量和时间依赖性［7］，同时其与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用，能促进肿瘤细胞凋亡，机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关［8］。本研究旨在探讨蒿甲醚对裸鼠体内移植人肺腺癌A549 细胞株生长的抑制作用，为肺癌的临床用药研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选取雌性裸鼠32 只，鼠龄6 ～7 周;体质量20 ～23 g，购于上海实验动物中心。

1.1.2 主要药品和试剂 蒿甲醚粉针剂(1 ml:80 mg/支，批号:H10900011)由昆明制药厂股份有限公司生产，0.9%氯化钠溶液(100 ml:0.9 g/瓶，批号:200511003)由昆明南疆制药有限公司生产。

1.1.3 细胞系 人肺腺癌细胞系A549 细胞由昆明医科大学实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 实验分组与剂量 按裸鼠体质量将其分为不同的层，再对每一层的裸鼠进行编号，采用随机数字表法将裸鼠分为低、中、高剂量组和对照组，各8 只。裸鼠接种人肺腺癌A549 细胞24 h 后，高剂量组给予蒿甲醚粉针剂120 mg/kg、中剂量组为80 mg/kg、低剂量组为54 mg/kg，对照组给予0.9%氯化钠溶液10 mg/kg，连续给药12 d 后处死裸鼠，剥离肿瘤，称肿瘤质量。抑瘤率= (1－实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量) ×100%［9］。

1.2.2 移植瘤模型的建立 取对数生长期的A549 细胞，PBS洗涤，调整细胞密度，制备成2 ×106个/0.2 ml 的细胞悬液，分别接种于裸鼠腋下。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0 软件包进行统计学分析，计量资料以(x ±s)表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用q 检验，计数资料采用χ2检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4 组死亡情况 实验期间，低、中剂量组各有1 只裸鼠死亡，高剂量组和对照组无裸鼠死亡。

2.2 4 组抑瘤率比较 4 组抑瘤率比较，差异有统计学意义(P ＜0.05)。其中高剂量组抑瘤率高于低、中剂量组，差异有统计学意义(P ＜0.05);低、中剂量组抑瘤率比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。平均瘤质量随蒿甲醚的剂量增加而减少，见图1。

表1 4 组体内肿瘤质量及抑癌率比较Table 1 Comparison of tumor mass and suppressor ratio in 4 groups

图1 4 组平均瘤质量随蒿甲醚剂量变化图Figure 1 The average tumor weight change with dose artemether in 4 groups

3 讨论

蒿甲醚对多种肿瘤具有一定的抑制作用已经被诸多研究证实。左曙光等［10］研究表明，与青蒿素相比，蒿甲醚水溶性更好，吸收更快，具有更强的抗肿瘤活性，蒿甲醚可以抑制人慢性髓性白血病细胞株K562 细胞增殖，影响细胞周期，诱导肿瘤细胞凋亡。早期国内外学者就蒿甲醚对人肺腺癌A549 的作用也做了一些研究。郭燕等［11］研究结果显示，蒿甲醚可显著抑制人肺腺癌A549 细胞株生长，其细胞毒作用与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。钱海洪等［12］研究发现，蒿甲醚与顺铂联用可以明显抑制人肺腺癌A549 细胞生长，两药单用和联用时随着药物浓度增加，其效应也增加。但以上研究均是体外细胞培养研究。本研究在裸鼠体内种植人肺腺癌A549，研究蒿甲醚在体内对人肺腺癌A549 的抑制作用。

本研究结果显示，对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组平均抑瘤率比较，有明显差异，其中高剂量组抑瘤率高于低、中剂量组;同时，低、中、高剂量组抑瘤率逐渐升高。因此，蒿甲醚对裸鼠体内移植人肺腺癌A549 有一定的抑制作用，且随着蒿甲醚剂量的增加而增强。另外，低剂量组与中剂量组抑瘤率比较，无明显差异，可能是实验中操作不当导致的误差引起，也可能是因为人肺腺癌A549 对高剂量的蒿甲醚更为敏感，因此仍需进一步实验进行研究。

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2 朱启顺，伍治平，高诚伟，等. 蒿甲醚对SD 大鼠原位脑胶质瘤抑制及抗血管生成的研究［C］. 第五届中国肿瘤学术大会曁第七届海峡两岸肿瘤学术会议、国际肿瘤细胞与基因治疗学会会议、第二届中日肿瘤介入治疗学术会议论文集，2008.

3 Singh NP，Lai HC. Artemisinin induces apoptosis in human cancer cells［J］. Anticancer Res，2004，24 (4):2277－2280.

4 Eckstein－Ludwig U，Webb RJ，Van Goethem ID，et al. Artemisinins target the SERCA of plasmodium falciparum ［J］. Nature，2003，424 (6951):957－961.

5 Utzinger J，Xiao SH，Tanner M，et al. Artemisinins for schistosomiasis and beyond ［J］. Curr Opin Investig Drugs，2007，8 (2):105－116.

6 伍治平，高诚伟，吴永贵，等. 蒿甲醚对SD 大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤实验［J］. 肿瘤防治研究，2010，37 (6):614－617.

7 李杨，邓兴力，李玉，等. 蒿甲醚对人胶质瘤细胞系U251 细胞凋亡的影响［J］. 中国临床神经外科杂志，2013，18 (5):289－291.

8 万成亮，蒋永新，寸英丽，等. 蒿甲醚与顺铂联用对Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用及其机制探讨［J］. 昆明医学院学报，2011，32(3):21－26，24.

9 万成亮，蒋永新，寸英丽，等. 蒿甲醚与顺铂联用对Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用［J］. 时珍国医国药，2011，22 (12):2924－2926.

10 左曙光，刘淳，刘馨，等. 蒿甲醚对K562 细胞作用的体外实验研究［J］. 实用医学杂志，2010，26 (20):3680－3682.

11 郭燕，王俊，章必成，等. 蒿甲醚对人肺腺癌A549 细胞体外生长的影响［J］. 医学研究生学报，2007，20 (3):233－235，239.

12 钱海洪，胡义德. 顺铂与蒿甲醚联用增强对人肺腺癌A549 细胞的抑制作用［J］. 四川医学，2006，27 (2):111－113.