联合检测血清 GP73，AFP，AFP-L3及AFU在原发性肝癌诊断中的作用

徐瀚峰，王礼学，朱传东，朱小方，丁 婕，俞 晨

(东南大学附属第二医院肿瘤科，江苏南京 210003)

目前我国肝癌的发病率仍然较高，且呈不断上升的趋势。目前对于肝癌的诊治方法较少，最重要的是早期发现，早期手术治疗可以取得良好的疗效，但是肝癌的早期诊断仍然困难，不少患者发现时已是晚期，目前反应原发性肝癌的早期诊断指标仍以AFP为主，但是有相当部分的患者肝癌早期AFP并不升高，且有30% ～40%的患者始终无AFP的明显升高，且在多种原因引起的肝细胞损伤时也会出现AFP的升高，从而出现诊断偏差，因此我们需要发现更多的血清学标志物帮助肝癌的早期发现。高尔基体糖蛋白(Golgiprotein-73，GP73)是新近发现的一种肝癌相关蛋白，日益增多的研究表明，GP73在肝癌诊断中具有可能的应用价值，是一种潜在的血清肿瘤标志物［1－2］。AFP异质体(AFP-L3)也是新近发现的肝癌相关指标。本研究探讨联合检测血清GP73，AFP，AFP-L3 以及 α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)在肝癌诊断中的意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2012年6月—2013年6月在我院住院的原发性肝癌患者81例，其中男性65例，女性16例，平均年龄(56.2±3.7)岁;肝硬化患者72例，男性57例，女性15例，平均年龄(53.8±4.2)岁;慢性乙型肝炎患者28例，男性20例，女性8例，平均年龄(42.1±2.8)岁，另选取我院门诊健康体检者27例做为健康对照组，其中男性19例，女性8例，平均年龄(43.8±1.8)岁。所有肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎患者的诊断均符合《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》及《慢性乙型肝炎防治指南》［3］。

1.2 方法 GP73测定采用德国EVOLIS酶联免疫定量方法检测，试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供，肝癌判定值为≥150 μg·L－1;试剂盒均在有效期内，严格按照使用说明书操作。血清AFP浓度测定采用化学发光法，使用AXSYM试剂盒(美国ABBOTT公司)，并在全自动生化仪上进行测定;AFP异质体测定经过离心柱两步清洗去除不结合AFP，再经离心洗脱获得AFP-L3，该离心柱由北京热景生物技术有限公司提供，同样在全自动生化仪上进行测定;AFU在全自动生化仪上进行测定。全自动生化仪为AEROSET(美国ABBOTT公司)产品。

1.3 标本采集 所有标本均在早晨收集空腹血，置于促凝管中3～4 mL，分离后获得血清置于－20°冰箱中保存待检。

1.4 统计方法 本数据采用Spss 19.0进行分析，由于高尔基体糖蛋白73、AFP-L3、AFP、AFU数据呈偏态分布，采用中位数(四分位数)表示，计数资料采用卡方检验，P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 各组检验结果统计 GP73正常值范围0～150 μg·L－1，AFP-L3正常值范围0～10%，AFP 正常值范围0 ～13.4 μg·L－1，AFU 正常值范围 2～25 U·L－1。各组检验结果采用中位数及四分位数表示，统计结果见表1。

2.2 各项检验指标的灵敏度、特异度、准确度 从检验指标中我们可以发现，在肝癌诊断中，单项检测中特异度最高的为AFP-L3达到了88.8%，灵敏度最高的为 AFP达到了60.5% ，准确度最高的为AFP达到73.2%，而联合检测组中，特异度、灵敏度、准确度分别为 89.2%、60.5% 及77.03%，高于各单项检查组。见表2。

表1 各组检验结果统计

表2 各单项检测指标及联合检测的灵敏度、特异度、准确度

2.3 ROC曲线 GP73、AFP异质体、AFP、AFU以及联合检测对肝癌鉴别诊断效果采用ROC曲线分析GP73、AFP-L3、AFP、AFU以及联合检测鉴别肝癌与非肝癌的效果，曲线下的面积分别为:0.704、0.704、0.701、0.559、0.765;各自的95%置信区间分别为:0.631 ～0.778、0.628 ～0.779、0.623～0.78、0.476 ～0.642、0.694 ～0.835(图1)。通过 ROC 曲线分析将联合检测临界值设定在:182.28(根据灵敏度+特异度最大原则)，此时的灵敏度为60.5%，特异度为89.2%。

图1 ROC曲线图

2.4 联合检测的卡方分析 对 GP73、AFP异质体、AFP及AFU检测指标与联合检测指标进行卡方检验，其P值远小于0.05，因此在a=0.05的检验水准下，可以认为联合检测与各单项检测相比有统计学差异。联合检测的阳性检出率更高。见表3。

表3 各单项检测指标与联合检测指标阳性率卡方分析

3 讨论

原发性肝癌发病率位居我国前列，病死率居我国第2位，且有不断上升的趋势。大部分肝癌患者确诊时已至晚期，表明目前常用的血清肝癌诊断标志物不能满足临床需求。AFP是常用的肝癌诊断指标，但是其敏感度仅为40%～65%，30%左右的肝癌患者AFP为阴性［4］。因此，需要进一步寻找有效的血清标志物来提高肝癌的早期诊断率。

近几年报道GP73可能成为一种肝癌诊断的新型血清标志物。高尔基体糖蛋白(GP73)是存在于高尔基体的跨膜蛋白，Kladney等［5］在2000年首次发现该蛋白，该蛋白在肝细胞中表达很少，主要由胆管上皮细胞表达。Hann等［6］发现GP73在肝癌中升高尤为明显，提示其可能成为肝癌的一个新的血清标志物。

AFP是一种糖蛋白分子，其糖链的合成与降解过程是在细胞内进行的，经糖基转移酶和水解酶协同完成。其糖链结构存在异质性。经小扁豆凝集素(LCA)亲和电泳，AFP分成3个条带，根据电泳迁移率大小依次为AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3。肝癌发生时AFP糖链结构可产生异质性，与非恶性肝病产生的糖链结构存在显著差异，具有特异性，因而可以把AFP异质体作为肝癌标记物，比AFP定量具有更高的特异性［7］。有研究表明，AFP-L3的测定不仅在良恶性肝病的鉴别诊断及原发性肝癌的早期诊断方面比AFP测定更有价值，而且可以作为肝癌的预后指标［8］。

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体内各种组织、细胞及体液中，在肝、肺、脑、肾、胰、白细胞以及血清、尿液等中均含此酶，主要作用是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖蛋白及糖苷的水解代谢，在免疫反应、信号转导等多种方面发挥重要作用，多种研究发现，AFU的测定在多种疾病的诊断及治疗中都有积极的作用［9］。研究表明，AFU可作为结直肠癌、口腔癌、肝癌等肿瘤早期诊断标志物及抗肿瘤治疗效果的指示因子，已引起广泛的关注［10］。1980年首先发现原发性肝癌患者血清AFU升高，具有较高的特异性和灵敏性，在多项研究中发现AFU可作为原发性肝癌的肿瘤标志物［11－12］。

本研究分别检测了肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者及健康体检者的GP73、AFP、AFP-L3及AFU，通过联合各项指标来观察对于肝癌的诊断。在研究中发现，联合检测组中，特异度、灵敏度、准确度分别为 89.2%、60.5% 及 77.03%，均高于各单项检测组。对高尔基体糖蛋白、AFP异质体、AFP及AFU检测指标与联合检测指标进行卡方检验，其P＜0.05，联合检验与各单项检验相比有统计学差异。表明联合检验的阳性检出率更高。通过ROC曲线可以发现，联合检测组的线下面积最大为0.765，高于各单项组。因此可以发现联合检测有利于提高肝癌的早期检出率，并有助于肝硬化、慢性肝炎相鉴别。

综上所述，联合检测GP73、AFP-L3、AFP及AFU有利于临床提高肝癌的诊断率，并有效的减少单项检测的偏差，由于检测技术的成熟及便利，值得在临床工作中推广。

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