红细胞冷凝集对血细胞分析检验的影响及处理方法

孙建伟

辽宁省抚顺矿务局总医院检验科，辽宁抚顺 113008

血细胞分析仪是临床实验室检查常用的检验仪器之一，血细胞分析结果的质量直接关系到对病人的诊断和分析，但在血常规的日常检测中经常会遇到很多影响因素，例如：血小板假性减少症，红细胞凝集(冷凝集)，脂血/溶血，有核红细胞，白细胞增多，疟疾，采样、抗凝不当等。因此，在血常规的检测过程中做好质量控制是至关重要的。在血细胞分析中我们发现有些患者的红细胞极容易发生凝集，使RBC、 HCT 假性降低，MCV、MCH、MCHC 假性升高。造成血常规的检验结果不正常，对临床做出错误的引导。为了及时发现和准确排除红细胞冷凝集对血细胞分析仪的影响，该实验选择了从2013年1月—2014年5月共20例红细胞冷凝集的标本在3 种不同条件下检测: ①普通室温（20℃）；②37 ℃水浴30 min 后立即检测；③25 ℃条件下37 ℃水浴30 min 后立即检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 仪器与试剂日本Sysmex 公司生产的XE-5000 全自动血液分析仪及配套原装试剂、日本奥林巴斯光学株式会社生产的双筒显微镜。原厂配套正常浓度和高浓度质控品。

1.1.2 标本 从2013年1月—2014年5月抚顺矿务局医院住院患者血常规标本中，通过镜检筛选出20例红细胞冷凝集标本。所有标本均按常规全血细胞检测，血细胞分析仪每半年校准一次。每日测定正常浓度和高浓度2 个浓度的质控品，结果均在控。标本通过静脉采血2 mL，加入EDTA-K2 抗凝的真空管内，轻轻地颠倒混匀。于采集后4 h 内，在XE-5000 全自动血液分析仪检测完毕。其中男性12 人，女性8 人。其中包括肺炎支原体10例，传染性单核细胞增多症3例，多发性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病2例，恶性淋巴瘤2例。

1.2 方法

将20例红细胞冷凝集的标本采用不同的方法处理后，在日本Sysmex 公司生产的XE-5000 全自动血液分析仪检测。血液分析仪所使用的试剂为原厂配套。显微镜为日本奥林巴斯光学株式会社生产。瑞士吉姆萨染液由贝索生物技术公司提供。①普通室温(20 ℃)； ②37 ℃水浴30 min; ③25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min。记录3 种不同条件下红细胞﹑红细胞压积、血红蛋白﹑红细胞各项参数﹑白细胞﹑血小板的值。该仪器以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，电阻抗法测定红细胞和血小板，比色法测定血红蛋白。以上3 种方法检测的同时观察管壁红细胞聚集的情况，检测各推两张血涂片，瑞士吉姆萨染色，双筒显微镜镜检。

1.3 统计方法

使用SPSS17.0 软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t 检验。

2 结果

红细胞冷凝集的标本在3 种不同的环境下检测时可发现：普通室温时，红细胞、白细胞、血小板均有异常报警（Agglut 和Turb/Hb）。红细胞直方图可见异常的大红细胞峰。管壁上有细砂粒样凝集颗粒；血涂片发现血膜上有许多细小颗粒，显微镜下可见红细胞大量聚集在一起。

37 ℃水浴30 min 后，15例标本未发现抗凝管管壁有凝集颗粒，试管壁上的小片状凝块消失，红细胞分布图形正常，无报警信息。镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。其余5例标本仍然提示红细胞、白细胞、血小板有异常报警（Agglut 和Turb/Hb）,红细胞直方图异常。

表1 普通室温（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min 20例测定结果（±s）

表1 普通室温（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min 20例测定结果（±s）

普通室温37 ℃水浴后37 ℃水浴25 ℃室温测定组别7.05±0.25 7.12±0.30 7.10±0.29 WBC(×109/L)1.25±0.10 3.85±0.13 3.98±0.15 RBC(×1012/L)124±2.0 122±1.0 123±1.0 HGB(g/L)18.2±0.05 35.2±0.03 37.2±0.06 HCT(%)145.6±2.40 91.4±3.10 93.4±2.50 MCV(fL)99.2±1.60 31.7±1.20 30.9±3.0 MCH(pg)681±15 346±12 330±14 125±10 130±8 128±14 MCHC(g/L) PLT(×109/L)

室温25 ℃时，标本37 ℃水浴30 min 后，20例标本均未出现报警信息。管壁无凝集颗粒，镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。

从表1 可以看出，①普通室温(20 ℃)和37 ℃水浴30 min 的结果比较，WBC、HGB、PLT 差异无统计学意义（P＞0.05）。而红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P＜0.05）；②37℃水浴30 min 和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min 的结果比较，WBC、HGB、PLT 差异无统计学意义 （P＞0.05）。而红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P＜0.05）。

3 讨论

冷凝集素是冷反应型抗红细胞抗体，在受冷后可使红细胞出现聚集[1]。在0~4 ℃时最易和红细胞膜抗原结合,是较强的使红细胞凝集的一种自身免疫性抗体, 可存在于正常人的血清中,抗体多数是IgM 型。低效价的冷凝集素一般无临床意义,通常16 ℃以下可使红细胞发生凝集,30 ℃以上不发生凝集[2]。这种自身凝集反应是可逆的，当环境温度升高后，凝集的红细胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗体，但滴度较低，在1∶16 以下。正常情况下，不会导致不良反应。但当机体处于感染等病理情况时，机体的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反应[4]。很多疾病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原体感染、癌症、白血病、妊娠等都可以出现冷凝集反应[5]。

该实验中，20例标本在普通室温 （20 ℃）,37 ℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min 3 种条件测定时,WBC﹑PLT﹑HGB 的计数结果差异无统计意义（P＞0.05）。在研究中发现，当标本出现冷凝集时，数个红细胞凝集在一起，血细胞分析仪只对体积相当的红细胞或小红细胞进行了分析，而大红细胞团块完全被忽略，这就导致了不合逻辑的红细胞计数降低和高MCV。而HGB 是红细胞溶解后采用比色方法测定，故冷凝集对HGB 无影响。对于由RBC、HGB、HCT 计算的参数MCV、MCH、MCHC 则造成假性偏高。很多文献[6-7]报道了标本发生冷凝集时的处理方法，如经37 ℃水浴不同时间后立即进行检测，进行血浆置换，重新采血后立即测定。37 ℃水浴后在不同的仪器上检测。对试剂和样本进行双重加温，这些方法使冷凝集的标本得到了很好地处理。在本实验中，37 ℃水浴30 min 纠正了15例冷凝集标本，但仍存在5例标本出现冷凝集现象。而在水浴的同时提高室内温度到25 ℃，对于5例冷凝集素效价高﹑红细胞聚集程度强的标本得到了很好地处理。从表中可以看出，20例标本在37 ℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min 两种条件检测时，红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的差异有统计学意义(P＜0.05）。这与石恩荣在冷凝集对血液分析仪检测结果的影响的报道是一致的。在该实验中WBC、HGB、PLT 差异无统计学意义（P＞0.05）。由于XE-5000 是以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，故对WBC 没有影响。冷凝集对PLT的影响报道并不一致，该实验显示PLT 计数未受影响。在冷凝集的标本检测中，重新采血不但增加了患者的压力，而且病房标本立即检测很难做到。进行血浆置换可造成血小板和白细胞的丢失，置换次数越多丢失现象越严重。这可能与吸弃血浆时WBC﹑PLT 被一起吸掉有关。在该实验中，水浴的同时升高温度避免了让患者重新采血的压力，避免了血浆置换WBC﹑PLT 的丢失，且操作简单，对冷凝集的处理效果较好。一般的实验室很容易做到。

综上所述当遇到疑似冷凝集标本，如RBC，HGB 比例严重不符时（正常人HGB 和RBC 的比例为30∶1），首先观察试管内标本状态，仔细观察红细胞分布的直方图和出现的报警信息，同时检测冷凝素的效价。当标本确定为冷凝集后，37 ℃水浴30 min 后，可以利用空调提高室内的温度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影响。在日常工作中，尤其是冬天温度较低的时候，经常会遇到标本发生冷凝集情况。正确识别和处理冷凝集标本的异常检测结果，对临床准确评估患者的病情非常重要。可避免发出错误的检验报告,影响临床检验治疗

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