Oct4和Wnt1在食管鳞癌中的表达及其相关性

李秀娟 金春亭 范 婕 李玉珍 李海军 刘军超 (河北北方学院病理教研室，河北 张家口 075000)

Wnt通路由一系列癌基因和抑癌基因编码的蛋白质组成，其在调节胚胎发育与肿瘤发生、发展等关键的生理、病理过程中起重要作用〔1〕。Wnt1为Wnt通路中关键的信号分子。Oct4为干细胞转录调控因子，是调节胚胎及组织发育，参与胚胎干细胞和原始生殖细胞自我更新，维持细胞全能性所必需的转录因子〔2〕。近来研究表明 Oct4在多种肿瘤组织〔2～5〕中均有表达，提示其可能在肿瘤发生发展中发挥重要作用。本实验研究Oct4和Wnt1蛋白在食管鳞癌中的表达及相互关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 河北北方学院第一附属医院病理科2010年6月至2011年12月期间切除的食管癌存档标本蜡块65例为食管癌组。全部病例术前未经任何治疗，经手术后病理切片证实均为食管鳞状细胞癌。其中高分化鳞癌16例，中分化鳞癌13例，低分化鳞癌36例;有淋巴结转移34例，无淋巴结转移31例;外膜浸润28例，无外膜浸润37例。另取24例正常食管黏膜组织作为对照组。

1.2 试剂 鼠抗人Oct4单克隆抗体，兔抗人Wnt1单克隆抗体，免疫组化二抗工作液和DAB酶底物显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物制品有限公司。

1.3 方法 采用免疫组化SP二步法进行染色，染色过程严格按试剂盒规定程序进行。切片常规脱蜡至水，经3%过氧化氢37℃5min，于柠檬酸缓冲液加热抗原修复15 min，滴加一抗，37℃60 min，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后滴加二抗，37℃30 min，DAB显色，中性树胶封片。同时用PBS代替一抗作染色的阴性对照，用已知Oct4、染色阳性的胃癌组织片分别做二者的阳性对照。

1.4 结果判定 Oct4主要定位于细胞核，Wnt1主要定位于细胞质，随机选择5个高倍镜视野(200倍)按染色强度及阳性细胞占肿瘤细胞总数的百分比综合判定。染色强度:无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分;阳性细胞数:＜5%0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。染色强度与阳性细胞数得分之积，0分为阴性(-)，1～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(⧺)，≥6 分为强阳性(⧻)〔6〕。

1.5 统计学处理 应用SPSS13.0统计学软件，计数资料组间比较采用χ2检验;Oct4和Wnt1表达的相关性采用Spearman秩相关分析。

2 结果

2.1 Oct4和Wnt1在两组中的表达 Oct4和Wnt1在食管鳞癌组中的表达(63.08%，69.23%)明显高于对照组(25%，37.5%，χ2=10.197，P=0.001;χ2=7.396，P=0.007)。

2.2 Oct4和Wnt1在食管鳞癌中的表达与临床病理特征的关系 食管鳞癌组织中，Oct4和Wnt1蛋白的表达均与组织分化程度有关，低分化组中Oct4和Wnt1的表达率明显高于高中分化组(P＜0.05)，且Wnt1的表达与淋巴结转移有关，无淋巴结转移组的阳性率显著高于淋巴结转移组(P＜0.05)。见表1。

2.3 食管鳞癌中Oct4和Wnt1表达的相关性 Spearman秩相关分析显示:Oct4和Wnt1在食管鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.383，P=0.002)。

表1 食管鳞癌Oct4和Wnt1阳性表达与临床病理特征的关系(n)

3 讨论

食管癌的早期症状不甚明显，多数患者在确诊时已达癌症的中晚期，这是食管癌患者死亡率较高的主要原因。探讨食管癌发生发展的分子机制，对了解肿瘤的生物学行为，寻找新的肿瘤治疗切入点等方面有重要的临床意义。

Oct4是调节胚胎干细胞多聚潜能性的一种重要调节因子，其在参与胚胎干细胞和原始生殖细胞的自我更新，维持细胞全能性等方面具有重要作用。Oct4主要表达于早期生殖细胞，随着生殖细胞的成熟其表达逐渐下调。Nichols等〔7〕将小鼠的oct4基因敲除后，由于胚胎发育早期不能形成多能性的内细胞团最终导致小鼠胚胎死亡。新近研究又发现Oct4在生殖细胞肿瘤如睾丸生殖细胞瘤〔8〕、卵巢无性细胞瘤〔9〕和非生殖细胞肿瘤如神经胶质瘤〔10〕、肝癌〔2〕、胰腺癌〔3〕、乳腺癌〔4〕及肺癌〔5〕等也有表达，但在正常组织中低表达或不表达，说明Oct4与肿瘤的发生有密切关系。

本实验免疫组化结果提示Oct4在细胞核中的表达程度与肿瘤组织的分化程度有着密切关系，这与国外报道结论相符〔11，12〕。

Wnt信号转导途径是调控细胞生长、发育的重要途径，是一条对控制胚胎发育起关键作用、进化上高度保守的信号转导途径〔13〕。近来发现很多肿瘤的发生与Wnt信号异常有关，在食管癌的发生发展中也有Wnt信号通路异常的报道〔14〕。

Oct4和Wnt1在食管鳞癌组织中表达呈正相关，提示Oct4可能与Wnt信号转导通路有某种联系，信号通路的转导可能受到Oct4的调控。有研究发现Wnt通路直接参与小鼠胚胎干细胞的调节，影响胚胎干细胞的自我更新，Wnt通路中相关蛋白的上调可以引起 Oct4表达的增加〔15〕。Davidson等〔16〕研究表明Oct4参与了对Wnt信号通路的调节，也正是Oct4的过表达使得Wnt通路的调节异常导致胚胎干细胞自我更新异常，最终形成肿瘤。因此对Oct4和Wnt1进行深入研究可以为食管癌的生物治疗寻找新的靶点。

1 李小江，贾英杰，张文治，等.肺癌干细胞Wnt信号通路的研究进展〔J〕.中国肺癌杂志，2011;14(8):695-8.

2 Dong Z，Zeng Q，Luo H，et al.Increased expression of OCT4 is associated with low differentiation and tumor recurrence in human hepatocellular carcinoma〔J〕.Pathol Res Pract，2012;208(9):527-33.

3 黄健清.小干扰RNA沉默OCT4，基因表达对胰腺癌细胞株PANC1增殖与凋亡的影响〔J〕.南方医科大学学报，2011;31(5):860-3.

4 Jung JW，Park SB，Lee SJ，et al.Metformin represses self-renewal of the human breast carcinoma stem cells via inhibition of estrogen receptor-mediated OCT4 expression〔J〕.PLoS One，2011;6(11):1-8.

5 Karoubi G，Cortes-Dericks L，Gugger M，et al.Atypical expression and distribution of embryonic stem cell marker，OCT4，in human lung adenocarcinoma〔J〕.J Surg Oncol，2010;102(6):689-98.

6 秦 薇，张晓伟，章 莉，等.Oct4在胃癌组织中的表达及临床意义〔J〕.上海交通大学学报，2009;29(6):733-6.

7 Nichols J，Zevnik B，Anastassiadis K，et al.Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct4〔J〕.Cell，1998;95(3):379-91.

8 Cao D，Li J，Guo CC，et al.SALL4 is a novel diagnostic marker for testicular germ cell tumors〔J〕.Am J Surg Pathol，2009;33(7):1065-77.

9 Trinh DT，Shibata K，Hirosawa T，et al.Diagnostic utility of CD117，CD133，SALL4，OCT4，TCL1 and glypican-3 in malignant germ cell tumors of the ovary〔J〕.J Obstet Gynaecol Res，2012;38(5):841-8.

10 Guo Y，Liu S，Wang P，et al.Expression profile of embryonic stem cellassociated genes Oct4，Sox2 and Nanog in human gliomas〔J〕.Histopathology，2011;59(4):763-75.

11 Wei He，Ke Li，Feng W，et al.Expression of OCT4 in human esophageal squamous cell carcinoma is significantly associated with poorer prognosis〔J〕.World J Gastroenterol，2012;18(7):712-9.

12 Ge N，Lin HX，Xiao XS，et al.Prognostic significance of Oct4 and Sox2 expression in hypopharyngeal squamous cell carcinoma〔J〕.J Transl Med，2010;12(80):90-4.

13 Fu X，Li L，Peng Y.Wnt signalling pathway in the serrated neoplastic pathway of the colorectum:possible roles and epigenetic regulatory mechanisms〔J〕.J Clin Pathol，2012;65(8):675-9.

14 Brown J，Bothma H，Veale R，et al.Genomic imbalances in esophageal carcinoma cell lines involve Wnt pathway genes〔J〕.World J Gastroenterol，2011;17(24):2909-23.

15 Huang C，Qin D.Role of Left in sustaining self-renewal in mouse embryonic stem cells〔J〕.J Genet Genomics，2010;37(7):441-9.

16 Davidson KC，Adams AM，Goodson JM，et al.Wnt/β-catenin signaling promotes differentiation，not self-renewal，of human embryonic stem cells and is repressed by Oct4〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2012;109(12):4485-90.