小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠模型抑瘤及免疫功能的影响

于慧玲 麻春杰 盖 聪 (北京中医药大学，北京 100029)

小柴胡汤由柴胡、黄芩、人参、半夏、甘草、生姜、大枣组成，是中医和解少阳的代表方，主治少阳病证〔1〕。本方配伍严谨，组合巧妙，具有扶正祛邪，和解少阳，疏肝利胆，通达表里阴阳，协调脏腑等多种功用，被古今临床广泛运用〔2〕。近年来，有实验〔3〕表明小柴胡汤在治疗肿瘤方面有一定的优势。本研究采用C6胶质瘤大鼠模型，旨在观察小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠的抑瘤作用及免疫增强作用。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 小柴胡汤组成:柴胡(78.125 g);黄芩3两(46.875 g);人参 3 两(46.875 g);清半夏半升(42 g);炙甘草3 两(46.875 g);生姜3 两(46.875 g);大枣(30 g)。替莫唑胺由江苏天士力帝益药业有限公司提供;ELISA试剂盒:肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-2和IL-6均由南京建成生物有限公司提供。

1.2 实验分组及模型制备〔4〕清洁级Wistar老年雄性大鼠70 只，体重(321.5±3.3)g，18 月龄，10 只作为正常对照组，60只右前肢腋窝皮下接种2×106/20 μl的C6胶质瘤细胞悬液;随机分为肿瘤对照组、阳性药A组(替莫唑胺;50 mg/kg)、阳性药B组(替莫唑胺;25 mg/kg)、小柴胡汤C组(50 g/kg)、小柴胡汤D组(20 g/kg)、小柴胡汤E组(10 g/kg)。

1.3 中药制备 小柴胡汤组成中的7味中药，以8倍量蒸馏水浸泡30 min，加热保持微沸30 min，过滤;残渣加6倍量蒸馏水，微沸30 min，过滤，合并2次滤液，混合后滤液干燥浓缩至100 ml，即小柴胡汤E(10 g/ml);以类似方法浓缩熬制小柴胡汤D(20 g/ml);小柴胡汤C(50 g/ml);4℃冰箱保存备用。

1.4 给药方法及取材 每组均分别灌胃给予生理盐水、阳性药A、阳性药B、小柴胡汤C、小柴胡汤D和小柴胡汤E，连续服药5 d，休息4 d，共给药3次，于最后1次给药后2 d处死动物，眼球取血，分离血清(3 000 r/min，10 min)，标记好后置-20℃保存备用。

1.5 检测指标

1.5.1 体重随时间变化的检测方法从实验开始至实验结束，使用NL-200电子天平每日称量大鼠体重。

1.5.2 肿瘤体积随时间变化的检测方法 从肿瘤肉眼可见至实验结束，使用游标卡尺测量肿瘤的短径(a)和长径(b)，肿瘤体积公式=1/2×ab2(mm3)，记录。

1.5.3 大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6蛋白含量的检测方法采用ELISA试剂盒，严格按照试剂盒方法操作。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行分析，数据以s表示，采用t检验。

2 结果

2.1 各组大鼠体重随时间的变化 肿瘤对照组及小柴胡汤各剂量组大鼠的体重均随时间呈增长趋势(均P＜0.01)，阳性药各剂量组大鼠的体重均随时间呈降低趋势(均 P＜0.01)。见图1。

2.2 各组大鼠肿瘤体积随时间的变化 各实验组大鼠的肿瘤体积均随时间呈增长趋势，但阳性药各剂量组和小柴胡汤各剂量组大鼠的肿瘤体积均明显增长缓慢，有明显的抑瘤作用，与肿瘤对照组比较，各组之间差异均有统计学意义(均P＜0.01)。见图2。

图1 体重随时间的变化趋势

图2 肿瘤体积随时间的变化趋势

2.3 各组大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平 血清学检测结果显示，与肿瘤对照组比较，小柴胡汤各剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-2、IL-6的蛋白水平均明显升高且各剂量组之间差异有统计学意义(均P＜0.01);阳性药各剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平均明显降低且各剂量组之间差异亦有统计学意义(均P＜0.01)。见表1。

表1 小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影响(s，n=10)

表1 小柴胡汤对C6胶质瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影响(s，n=10)

与正常对照组比较:1)P＜0.01;与肿瘤对照组比较:2)P＜0.01;与阳性药A组比较:3)P＜0.01;与小柴胡汤C组比较:4)P＜0.01;与小柴胡汤 D 组比较:5)P＜0.01

组别 TNF-α(pg/ml)IL-2(pg/ml)IL-6(pg/ml)正常对照组 9.76±0.83 3.24±0.22 2.61±0.43肿瘤对照组 5.56±0.241) 1.82±0.171) 1.42±0.311)阳性药 A 组 3.51±0.452) 1.08±0.312) 0.83±0.162)阳性药 B 组 4.17±0.683) 1.33±0.423) 1.01±0.173)小柴胡汤 C 组 9.34±0.792) 2.91±0.562) 2.26±0.612)小柴胡汤 D 组 8.01±0.914) 2.37±0.264) 1.98±0.634)小柴胡汤 E 组 6.98±0.745) 2.01±0.345) 1.77±0.495)

3 讨论

机体的免疫功能状态与肿瘤的发生、发展及预后有密切关系，一旦肿瘤发生，只有不断地调节免疫，充分发挥机体自身抗肿瘤的能力，控制转移和复发，使癌细胞逐渐向正常细胞发生逆转，肿瘤患者才能逐渐走向康复〔5〕。恶性肿瘤患者常有免疫力低下的状况，因此检测机体免疫力是评价肿瘤患者临床用药疗效的重要指标之一〔6〕。研究表明:IL-2对肿瘤细胞无直接的细胞毒性作用，主要通过调节机体的免疫系统发挥抗肿瘤效应，IL-2具有促进 T细胞增殖、增强杀伤 T细胞、自然杀伤(NK)细胞的活性等广泛的免疫调节作用，IL-2水平的高低是机体细胞免疫的重要标志〔7〕。IL-6是由T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞等产生的一种多功能细胞因子，具有广泛的生物学活性，主要包括促进B细胞分化;刺激B细胞分泌免疫球蛋白;刺激未成熟的胸腺细胞分化为成熟的细胞毒性T细胞;扩大NK细胞的杀伤能力;启动抗病毒及抗肿瘤作用等〔8〕。TNF-α是由单核巨噬细胞产生的内源性细胞因子，具有调节免疫应答，增强T细胞、B细胞对抗原和丝裂原刺激的增殖反应等多种生理学作用，与机体的免疫反应也密切相关〔9〕。

小柴胡汤是《伤寒论》的著名代表方，有报道〔10〕称该方具有预防、治疗肿瘤及提高机体免疫力的作用，并且取得了很好的疗效。

综上，小柴胡汤能够抑制肿瘤的生长，升高C6胶质瘤大鼠血清IL-2、IL-6及TNF-α蛋白的水平，其中小柴胡汤中、高剂量组效果更显著;推测小柴胡汤其抑瘤作用可能与促进C6胶质瘤大鼠免疫系统功能有关，具体的机制还有待进一步探讨。

1 李 玲，刘欢庆，王 萍.小柴胡汤防治肿瘤机制研究进展〔J〕.中医药学报，2012;40(3):148-50.

2 林子洪，廖威明，傅 明，等.莪莲小柴胡汤的抗癌作用及其机制研究〔J〕.中国病理生理杂志，2008;24(9):1741-5.

3 茅 敏，付 虹，黄秀深，等.小柴胡汤诱导荷瘤小鼠S180细胞凋亡及对细胞周期的影响〔J〕.现代中西医结合杂志，2005;14(20):2646-8.

4 王晓刚，魏学忠，周定标.Wistar大鼠C6胶质瘤动物模型的肿瘤生长特点〔J〕.军医进修学院学报，2001;22(4)300-2.

5 刘德宜，刘光智，张 超，等.小柴胡汤免疫调节作用的实验研究〔J〕.山东医药，2003;43(22):26-7.

6 黄秀深，张丰华，茅 敏，等.小柴胡汤对S180荷瘤小鼠红细胞免疫功能的实验研究〔J〕.成都中医药大学学报，2003;26(3):9-10.

7 张 磊，彭龙玲，杨 薇，等.小柴胡汤提取物对小鼠的免疫增强作用研究〔J〕.中药药理与临床，2002;18(1):4-5.

8 方乐堃，潘凌霄，黎雅婷，等.复方小柴胡汤对荷EAC鼠IL-2水平和CD+4/CD+8比值的影响〔J〕.中国病理生理杂志，2007;23(9):1720-3.

9 茅 敏，黄秀深，贾 波，等.小柴胡汤诱导单核细胞产生肿瘤坏死因子的实验研究〔J〕.成都中医药大学学报，2003;26(4):35-6.

10 梁靓靓，殷东风.小柴胡汤抗肿瘤作用的实验研究进展〔J〕.甘肃中医学院学报，2008;25(5):51-4.