生脉散传统汤剂及其配方颗粒的特征图谱比较

魏 梅 梁志毅 邓淙友 张德雄

(广东一方制药有限公司，佛山，528244)

生脉散一词最先出自金代医家张元素之《医学启源》，首载其方名，至李东垣在其《内外伤辨惑论》指出:“圣人立法，夏月宜补者，补天真元气……故以人参之甘补气，麦门冬苦寒泻热补水之源，五味子之酸清肃燥金，名曰生脉散。”，完善了该方组成和功效[1－5]。生脉散以水为溶媒，采用汤剂形式应用于临床已有700多年的历史，疗效显著，为“益心复脉”的优秀古方之一，但汤剂煎煮麻烦、保存不便等缺点在很大程度上制约了中医药的应用和推广。中药配方颗粒是对传统汤剂的延伸和发展，坚持了中医传统的整体观念和辨证施治原则。既保持了临床配方中君臣佐使，随证加减的特色，又兼有配方快速、服用方便、直接冲服、免除煎煮、体积小、便于携带运输和储藏，质量可靠、清洁卫生等诸多优点。配方颗粒适合现代人的生活方式，符合社会发展的总体趋势及市场需求。

但各家针对中药配方颗粒单煎与传统合煎的争论尚未休止，但随着时间的推移，两种观点开始也有所共识。首先，合煎并非中药制剂的唯一工艺，几百种中药也不可能只存在唯一的提取方法;其次，合煎过程较为复杂，某种化学成分在其间可能出现或消失，甚至产生新的化学成分。分煎工艺与合煎工艺的合理性显然要结合处方具体分析，针对临床疗效的影响进行优胜劣汰[6]。因此这种成分上的变化是研究配方颗粒和传统合煎剂的前提工作。本实验通过对传统合煎液和我司配方颗粒的比较，期望总结出该方“分煎”与“合煎”的化学成分的变化，为配方颗粒能否替代传统水煎液提供一定的理论依据。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(Alliance 2695四元梯度输液泵及自动进样器，996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站);百万分之一电子天平(型号XP 26、梅特勒－托利多仪器有限公司)、万分之一电子天平(型号BS110S、北京赛多利斯天平有限公司)、千分之一电子天平(型号BS200S－WEI、北京赛多利斯天平有限公司)、超声波清洗机(型号KQ－500DE、昆山市超声仪器有限公司)，五味子醇甲(批号:111857－200507)、五味子酯甲(批号:111529－200503)、五味子甲素(批号:0764－200107)、五味子乙素(批号:765－200104)、人参皂苷Re(批号:110754－200822)对照品，配方颗粒及药材(广东一方制药有限公司)。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

表1 药材与配方颗粒批号

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[7－12]色谱柱:kromasil 100－5C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱。流速:1.0 mL/min，检测波长:203 nm，柱温:30 ℃，进样量:2.0 μL。

表2 流动相及洗脱程序

2.2 对照品溶液的制备 取五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液。

2.3 标准汤剂制备 药材剪碎或用铜盅敲碎，配伍按人参:麦冬:五味子=1∶3∶1.5称取药材，即人参10 g、麦冬30 g、五味子15 g，加10倍水煎煮1.5 h，制得样品标准汤剂(水煎液)，定容至500 mL备用。

2.4 供试品制备 精密量取标准汤剂50 mL，通过D101大孔树脂(大孔树脂15 g，直径1.5 cm)，先用纯化水200 mL洗脱，再用95%乙醇200 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，再用甲醇溶解，定容至5 mL，微孔滤膜过滤，即得。生脉散配方颗粒与单味配方颗粒沸水溶解后，参照标准汤剂供试品制备，即得。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 取同一份生脉散配方颗粒供试品溶液，按“2.1”项下条件连续进样6次，测得其各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明精密度良好。

2.5.2 重复性试验 取同一批配方颗粒，按“2.3;2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件分别进样，测得其各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明重复性良好。

2.5.3 稳定性试验 取同一份供试品溶液，按“2.1”项下条件分别在 0、2、4、6、8、12、24 h 进样测定，其共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3 结果

3.1 共有峰的确定 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》比较配方颗粒的相关参数，通过多批样品的测定，选择稳定性好，吸收强，特征明显的色谱峰为共有峰，共标定9个峰，选其中保留时间约为37 min的2号峰为参照峰S。见图1。从各自的图谱中可以直观地看出，生脉散配方颗粒的图谱共有峰数目没有明显差异，峰面积差异也较小。

图1 生脉散配方颗粒特征图谱

3.2 主要色谱峰的鉴定与归属 分别精密称取人参皂苷Re、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，加甲醇溶解，在上述色谱条件下测定，并与生脉散特征图谱中相应的色谱峰进行比较，发现生脉散汤剂及其配方颗粒图谱中1，2，7，8，9号峰的保留时间与人参皂苷Re，五味子醇甲，五味子酯甲，五味子甲素，五味子乙素吻合。故样品特征图谱中1，2，7，8，9号特征峰分别鉴定为人参皂苷Re、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素。

分别精密称取不同批次的人参、麦冬、五味子配方颗粒，共制成11批生脉散汤剂，按2.1项下的色谱条件进行测定，见图2。以五味子醇甲为内参峰，计算各特征峰的相对保留时间和RSD，得到各共有峰的相对保留时间RSD均小于2.3%，见表2。特征图谱中以2号峰为参照峰，计算各峰的相对峰面积，结果见表3。通过相似度评价软件分析，各批生脉散的相似度均大于0.95，说明该制剂工艺稳定，产品均一性好，见表4[13－14]。

图2 十一批生脉散配方颗粒样品图谱叠加图

表3 各批生脉散共有峰的相对保留时间表

表4 各批生脉散共有峰的相对峰面积

3.3 传统汤剂与配方颗粒成分比较 分别精密称取由同批药材制成的生脉散汤剂、复方合煎颗粒、单方分煎颗粒及我司留样配方颗粒各2批，按2.1项下的色谱条件进行测定，见图3。以五味子醇甲为内参峰，计算各特征峰的相对保留时间和RSD，得到各共有峰的相对保留时间RSD均小于2.5%，见表5，通过相似度评价软件分析，各批生脉散的相似度均大于0.95，说明传统汤剂、复方颗粒及配方颗粒的质量相似，见表6。

表5 各批生脉散的相似度分析表

图3 生脉散传统汤剂、复方颗粒及配方颗粒图谱

表6 生脉散传统汤剂、分煎、合煎及颗粒剂的相对保留时间RSD

4 讨论

由于分析对象是复方汤剂，化学成分众多，各成分间极性差异很大，采用等度洗脱难以达到有效分离，所以采用梯度洗脱。经过多次摸索，以乙腈－水体系进行洗脱在90 min内可使全部色谱峰流出，且分离较好。

采用二极管阵列检测器进行全波长扫描，比较不同波长条件下生脉散配方颗粒剂和标准汤剂的指纹图谱，结果在203 nm波长下图谱峰形较好。

表7 生脉散传统汤剂、分煎、合煎及颗粒剂的相似度

中药配方颗粒是近10多年来对传统中药汤剂应用形式的突破。它是以传统中药饮片为原料，采用传统汤剂的提取溶媒(水)，经现代技术提取、真空低温浓缩、瞬间干燥、干法制粒等多道工序精制而成的产品[15]。在中医药理论的指导下，其性味、归经、功效与原汤剂保持基本一致。实验中传统汤剂及配方颗粒比较所用药材均为同一批次药材，以排除由于药材不均一而引起色谱图的差异。

根据我司生产的11批生脉散配方颗粒的HPLC指纹图谱比较结果，发现各批样品的相似度较高，均大于0.9，且具有相同组分说明我公司生产的配方颗粒质量稳定，可较好的保证产品的均一性。以生脉散配方颗粒汤剂为基准，与传统汤剂、分煎、合煎汤剂的比较，可知配方颗粒制剂与传统汤剂、分煎、合煎制剂中大部分成分的含量没有明显的变化，其共有峰基本一致，具有较高的相似性，表明配方颗粒剂从化学成分角度来说代替标准汤剂是可行的。本实验对分析中药方剂的应用具有积极意义，但想要确定生脉散配方颗粒是否能完全替代传统汤剂，还需结合药理药效和临床效果来判断。

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