ELISA法检测中期因子在卵巢上皮性肿瘤中的表达及与其临床病理特征的关系

陈彦婷等

[摘要] 目的 探讨中期因子（midkine，MK）在卵巢上皮肿瘤中的表达及与其临床病理特征的关系。方法 采用双抗体夹心法（ELISA）检测50例上皮性卵巢癌、50例良性上皮性卵巢肿瘤及40例正常女性血清MK浓度。 结果 卵巢癌组血清MK含量明显高于卵巢良性肿瘤组与正常对照组的血清MK含量（P<0.05），而卵巢良性肿瘤组与正常对照组的血清MK含量接近，差异无统计学意义（P>0.05）；随着临床分期的提高，血清MK值逐渐增高；MK表达与肿瘤病理类型无相关性（P>0.05）；随着病理分级的提高，血清MK值逐渐增高。 结论 卵巢癌患者血清MK含量明显高于卵巢良性肿瘤和正常人群，并与TNM分期和病理分级成正相关，MK可作为1种有价值的肿瘤标志物。

[关键词] 中期因子；卵巢上皮性肿瘤；ELISA法

[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）01（a）-0015-03

The Expression of Midkine in Epithelial Ovarian Tumor Detected by ELISA and Its Relationship with Clinicopathological Characteristics

CHEN Yanting XU Qing* CHEN Yan YE Ninghe LUO Xiaojie CHEN Xi LIU Qingqing

Nanjing Maternity and Child Health Care Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing， 210004， Jiangsu Province， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of midkine （MK） in epithelial ovarian tumor and its relationship with clinicopathological characteristics. Methods The double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to measure MK levels in 50 patients with epithelial ovarian carcinoma， 50 cases of epithelial ovarian carcinoid and 40 normal women. Results The serum MK concentrations in ovarian carcinoma group were significantly higher than those of ovarian carcinoid group and those of normal control group （P<0.05）， while serum MK concentrations of the ovarian carcinoid group were close to those of normal control group with no significant difference （P>0.05）. The serum MK levels increased gradually with the clinical staging while there was no correlation between the MK expression and the tumor pathological types （P>0.05）； The serum MK levels increased gradually with the increasing of pathological staging. Conclusion The serum MK contents in ovarian carcinoma patients were higher than those of ovarian carcinoid and normal ones， and which were positively correlated with TNM staging and pathological grading. The MK could be used as a valuable tumor marker.

[Key words] Midkine； Epithelial ovarian tumor； ELISA

中期因子（Midkine，MK）是一种肝素结合性生长因子，由于其在小鼠妊娠中期广泛表达，出生后只在肾脏中有表达，因此被命名为中期因子。目前发现，MK还可能参与肿瘤的生长和血管生成的调节[1]，在多种肿瘤组织中出现高表达，在恶性肿瘤的发生发展中起重要作用。我们采用ELISA法检测50例上皮性卵巢癌，50例良性上皮性卵巢肿瘤及40正常女性血清MK浓度。该院2007年6月—2011年6月期间探讨中期因子（midkine，MK）在卵巢上皮肿瘤中的表达及与其临床病理特征的关系现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取该院妇科手术治疗并经病理检查确诊的上皮性卵巢癌患者血清50例，年龄（45.67±8.90）岁。采用国际妇、产科联合会（FIGO）2000年制定的标准进行肿瘤分期：I期10例、Ⅱ期12例、Ⅲ期20例、Ⅳ期8例，所有病人无其他器官肿瘤病史，术前3个月内均未应用任何激素治疗，未行化疗或放疗。以上病例采血时均非月经期，并已排除血小板异常、血栓性疾病、其他内分泌疾病及其他器官肿瘤病史。根据WHO分类标准进行组织学分型，其中浆液性囊腺癌36例、粘液性囊腺癌14例，分化程度中高分化29例、中分化10例，低分化11例。良性上皮性卵巢肿瘤患者血清50例，年龄（43.10±5.23）岁。其中浆液性囊腺瘤34例、粘液性囊腺瘤16例。对照组40例，均为健康体检者，年龄（44.46±5.91）岁。所有对象均了解并同意进行这项研究。

1.2 标本采集及测定

所有研究对象均空腹12 h后于晨间采静脉血5 mL，迅速分离血清并置于80℃冰箱中冻存。双抗体夹心法（ELISA）检测血清中MK水平。操作步骤严格按试剂盒（R&D;）说明书进行。

1.3 统计方法

应用SPSS16.0软件进行分析，数据以均数±标准差（x±s）表示。计量资料比较采用t检验。

2 结果

2.1 正常人、卵巢良性疾病及卵巢癌患者血清MK值

卵巢癌患者血清MK含量平均为（140.82±21.81）pg/mL；卵巢良性肿瘤组MK含量平均为（48.02±8.82）pg/mL；正常对照组血清MK含量平均为（44.59±12.03）pg/mL；卵巢癌组血清MK含量明显高于卵巢良性肿瘤组与正常对照组的血清MK含量，差异有统计学意义（P<0.05），而卵巢良性肿瘤组与正常对照组的血清MK含量接近，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 正常人、卵巢良性疾病及卵巢癌患者血清MK水平（x±s）

注：*P>0.05，**P<0.05与正常对照组比较；△P<0.05与卵巢良性肿瘤组比较。

2.2 卵巢癌患者血清MK含量与临床分期的关系

卵巢癌患者血清MK含量I期为（60.32±4.67）pg/mL，Ⅱ期为（97.50±8.98）pg/mL，Ⅲ期为（138.22±10.82）pg/mL，Ⅳ期血清MK含量平均为（150±16.49）pg/mL，随着临床分期的提高，血清MK值逐渐增高。

2.3 卵巢癌患者血清MK含量与病理组织分型的关系

浆液性卵巢癌患者血清MK含量为（130.23±10.49）pg/mL，粘液性卵巢癌患者血清MK含量为（135.23±12.92）pg/mL，两组间差异无统计学意义（P>0.05）。

2.4 卵巢癌患者血清MK含量与病理分级的关系

卵巢癌患者血清MK含量高分化为（88.19±8.57）pg/mL，中分化为（100.30±11.78）pg/mL，低分化为（141.72±13.90）pg/mL，随着病理分级的提高，血清MK值逐渐增高。同时，随着患者FIGO分期的加重，患者的血清MK水平也在不断的升高；浆液性患者的血清MK含量和粘液性患者的血清MK含量之间的差异不显著，无统计学意义（P>0.05）。详见表2。

表2 血清MK值与卵巢癌临床病理特征的关系（x±s）

3 讨论

卵巢癌是目前女性生殖系统三大恶性肿瘤之一[2]，且患者有年轻化趋势。卵巢癌中上皮性癌是最常见的类型，占卵巢原发性恶性肿瘤的85%～90%[3]，由于其发病隐匿，易于腹腔内播散转移，多数患者有明显症状时通常已是疾病晚期，丧失了许多治疗机会，给个人及家庭带来巨大痛苦。而早期治疗和晚期治疗的生存率有显著的区别[4]。目前较为常用的卵巢癌标志物为糖类抗原CA125，但是由于其特异性差，令其在临床运用中受到了不少限制，寻找更多的敏感和特异的卵巢标志物成为妇科学界研究的热点。

中期因子胚胎期在组织中广泛分布，出生后其表达降低，仅限于某些特定的部位如肾脏和小肠上皮。然而.在肿瘤发生过程中，MK的表达增强。MK能促进细胞存活和细胞迁移并与肿瘤的侵袭、炎性疾病的发生及受损细胞的保护和修复密切相关。MK也被期待成为一种阻止细胞凋亡的治疗手段。与此同时，MK已成为恶性肿瘤和炎性疾病治疗中颇具前景的分子靶点并已成为一种新的肿瘤标记物[5]。MK作为一种分泌型蛋白，当MK在肿瘤组织中高表达，血清MK的水平亦升高。近期研究表明，血清MK的水平在多种肿瘤患者中升高，并与肿癌的侵袭性相关，包括食道癌[6]、结直肠癌[7]和肝癌[8]等。但很少有文献报道卵巢癌患者血清MK的水平。

目前，随着时代的进步和医学的发展，尤其是现代医疗检查设备的优化、创新和应用，MK家族血清检测已经在不断的发展过程中逐渐成为研究的热点和难点，酶联免疫吸附试验表明，某些恶性肿瘤患者血清中MK水平已经远远超过了临界值。该文采用ELISA法研究了卵巢癌血清MK水平，发现卵巢癌患者血清MK含量明显高于卵巢良性肿瘤和正常人群，并与TNM分期和病理分级成正相关，与其他肿瘤的结论一致[7]，有助于卵巢癌的早期发现。随着病程的进展，血清MK浓度亦升高，并可能促进肿瘤的侵袭性，其机制可能是肿瘤组织中的MK蛋白分泌MK进人细胞间液再人血，血清MK再通过肿瘤细胞膜的MK受体及相应的信号转导方式反作用于肿瘤细胞，这种可能机制还需要相关的研究证实。国外学者研究食道癌病人血清MK值变化，发现术后4周血清MK值明显下降，在他们观察的39例复发病人中，有16例在术后6个月血清MK值升高，而此时临床尚未发现有复发[9]。因此，MK可能作为术后疗效判断及随访的指标。为今后的进一步研究提供了理论基础。

[参考文献]

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[8] Hung Y J Z H， Lin T I， Cheng C T， et al. Serum midkine as a prognostic biomarker for patients with hepatocellular carcinoma[J].Am J Clin Pathol，2011，136：594-603.

[9] Shimada H， Y. Nabeya， M. Tagawa， S. Okazumi， H. Matsubara， K. Kadomatsu， T. Muramatsu， S. Ikematsu， S. Sakuma， and T. Ochiai. Preoperative serum midkine concentration is a prognostic marker for esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer Sci，2012，94： 628-632.

（收稿日期：2013-11-11）