肺热普清散质量标准研究＊

尼玛潘多 ，何珊珊 ，张 韵 ，万 军 ，谭 睿

(1．西藏自治区食品药品检验所，西藏 拉萨 850000;2．西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031)

肺热普清散(藏药名洛才更赛)为藏药复方制剂，由红花、丁香、木香、安息香等14味藏药组方，具有清肺泄热、消炎的作用，用于小儿肺炎、流行性感冒、风热、疠热。本试验中采用薄层色谱(TLC)法对方中主要药味的定性鉴别进行了研究，建立了简便、易行、重复性好的鉴别方法，并采用高效液相色谱(HPLC)法考察了其药效指标成分羟基红花黄色素A的测定条件，旨在为肺热普清散质量标准研究提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－10A型高效液相色谱仪，包括2个LC－10A泵、DGμ－12A在线脱气机、SPD－10A检测器、SIL－10A自动进样器、CTO－10A柱温箱;CLASS－VP5．03色谱工作站。色谱柱为Kromasil 5u C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)。甲醇(色谱纯，批号为20110402，成都市科龙化工试剂厂);水为超纯水(自制)，其他试剂为分析纯。羟基红花黄色素A标准品(批号为111637－200502)，红花对照药材(批号为120907－200609)，降香对照药材(批号为120952－201007)，去氢木香内酯(批号为 111525－200505)、木香烃内酯对照品(批号为111524－200503)，均由中国药品生物制品检定所提供。肺热普清散(迪庆藏医院，批号为20120919;神猴药业有限公司，批号为20120608，20120609，20120610;青海藏医院，批号为20110908)。硅胶G、硅胶GF254和硅胶H(薄层层析硅胶，青岛海洋化工有限公司)。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱鉴别

红花[1－4]:取5批样品粉末各10 g，分别加80%丙酮50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25 mL，弃去乙酸乙酯液，水溶液加正丁醇振摇提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺红花的阴性样品约10 g、红花对照药材1 g，同法制成缺红花的阴性对照品溶液和红花对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB)]试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7∶2∶3∶0．4)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱相应位置上无此斑点(见图1A)。

降香[5]:取5批样品粉末各5 g，加75%乙醇25 mL，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取缺降香的阴性样品约5 g、降香对照药材1 g，同法制成缺降香的阴性对照品溶液和降香对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录VI B)]试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液与无水乙醇(1∶9)的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。除20120919批样品外，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱相应位置上无此斑点(见图1B)。由迪庆藏医院提供的批号为20120919的样品，未呈现与对照药材一致的特征斑点，建议该医院对降香药材进行严格的检查，确保药材合格。

图1 红花及降香薄层色谱鉴别图

木香[6－8]:取5批样品粉末各5 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取缺木香的阴性样品约5 g，同法制成缺木香的阴性对照品溶液。另取去氢木香内酯对照品、木香烃内酯对照品，分别加甲醇分别制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录 VI B)]试验，吸取上述溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－甲酸乙酯－甲酸(32∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(见图 2)。

图2 木香薄层色谱鉴别图

2．2 HPLC法色谱条件考察

检测波长:取羟基红花黄色素A对照品溶液和供试品溶液进样分析，结果见图3。由紫外光谱图可见，羟基红花黄色素A的最大吸收波长为403 nm，故选取403 nm作为检测波长。

图3 紫外光谱图

柱温:分别考察了柱温为25，30，35，40℃时的色谱行为，结果见表1。不同柱温条件下的色谱峰峰形均对称，分离度均较好，理论板数均较高，故柱温对色谱峰影响不大。

表1 柱温考察结果

流动相:根据查阅的文献[9－11]，分别考察了甲醇 － 乙腈 －0．7% 磷酸(26 ∶2 ∶72)、甲醇 －0．5% 磷酸(26 ∶74)和甲醇 －0．1%磷酸(30∶70)。通过比较各流动相组成条件下羟基红花黄色素A的对称因子及理论板数优选流动相，结果见表2。可见甲醇－0．1%磷酸(30∶70)作为流动相时分离度较好、峰形较好，故选择其流动相。

表2 流动相考察结果

色谱条件确定:综合上述考察结果，样品中羟基红花黄色素A的色谱分析条件为，色谱柱为Kromasil5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流动相为甲醇 －0．1%磷酸(30 ∶70)，检测波长 403 nm，柱温 30 ℃，流速 1．0 mL/min。

3 讨论

肺热普清散原质量标准中无定性鉴别项。本试验对方中红花、降香、木香进行了定性鉴别，结果显示，所建立的方法、定性鉴别指标专属性强、重复性和稳定性好，可作为肺热普清散定性鉴别的依据，也可作为其质量标准提高的一部分，具有实际应用意义。

选用两根不同厂家的色谱柱，即Kromasil 5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)和 Gemini 5u C18柱(250 mm ×4．6mm，5μm)，按拟订的色谱条件分别对羟基红花黄色素A对照品溶液和供试品溶液进行分析，结果都能得到良好的分离。因此，本试验得出的HPLC色谱条件可作为研究肺热普清散定量标准的依据，为进一步的定量方法研究、使其标准全面提高打下了基础。

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