HPLC法测定复方杜仲流浸膏中松脂醇二葡萄糖苷的含量

★ 万丽玲 李晶

(江西省中医药研究院 江西南昌330077)

复方杜仲流浸膏为中药成方制剂复方杜仲片的主要组成，由杜仲(炒)、益母草、夏枯草、黄芩经水煎煮提取而得。方中君药杜仲，有补肝肾、强筋骨、降血压功效;臣药黄芩，有清热燥湿、泻火解毒、降血压等作用。有文献［1，2］以黄芩苷为研究对象，对其进行了含量测定方法研究，但未见对杜仲进行质量控制的研究报道。由于杜仲所含的松脂醇二葡萄糖苷为其降血压主要有效成分，因此本文参照中国药典2010年版杜仲药材标准，采用HPLC对复方杜仲流浸膏中松脂醇二葡萄糖苷进行含量测定研究，并进行了方法学考察。

1 仪器与药品

HP-1100高效液相色谱仪(美国，包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站);SimplicityTM个人型超纯水系统(Millipore公司)，CQ-250超声波清洗仪(上海船舶电子设备研究所)，松脂醇二葡萄糖苷对照品(含量测定用，批号:111537-200501，中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯)，水(纯化水)，其它试剂均为分析纯。复方杜仲流浸膏(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择 色谱柱:Dikma Diamonsil C18(2)(4.6mm ×250mm，5μm)，流动相:乙腈 -水(15∶85)，流速:1.0mL/min，检测波长 227nm，柱温:30℃。在此条件下对照品、供试品在约10min相同时间有一色谱峰，且阴性无干扰，见图1、图2、图3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照色谱图

2.2 线性关系的考察 精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含松脂醇二葡萄糖苷0.3996mg的对照品溶液。取此对照品溶液适量，加甲醇分别稀释每1mL含松脂醇二葡萄糖苷7.992μg、15.984μg、19.98μg、39.96μg、99.9μg、158.4μg、199.8μg 的对照品溶液，分别吸取 10μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，将样品浓度与峰面积进行回归，得松脂醇二葡萄糖苷回归方程为:Y=28533.42X+44.05，r=0.9999(n=7)，在7.992～199.8μg·mL-1范围内松脂醇二葡萄糖苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验 取本品，研细，称取约1.0g，精密称定，置50mL具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇25mL，称定重量，超声(功率250w，频率33kHz)处理30min，放冷，再次称定重量，加50%甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。精密吸取10μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测定供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷峰面积值，计算供试品峰面积值的相对标准差为1.73%。

2.4 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件，分别在0h、1h、2h、4h、8h、12h 进行测定，测得供试品中松脂醇二葡萄糖苷峰面积的RSD为2.07%。表明本品中对松脂醇二葡萄糖苷采用的提取方法稳定可行。

2.5 重复性试验 取同一批号样品共6份，照精密度试验中供试品溶液制备方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算含量，RSD为1.52%。

2.6 加样回收率试验 取本品适量，研细，取约0.5g，共6份，精密称定，置具塞三角瓶中，各精密加入松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液(0.01584mg/mL)10mL和50%甲醇溶液15mL，余照含量测定项下实验，吸取10μL注入液相色谱仪中进行含量测定，计算回收率，结果见表1。经计算，平均回收率为99.38%，RSD为1.35%。

表1 松脂醇二葡萄糖苷回收率测定结果

2.7 样品测定 取本品，按供试品溶液的制备方法制备供试液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。测定6批样品中松脂醇二葡萄糖苷含量，结果为每克流浸膏含松脂醇二葡萄糖苷为 0.3126mg、0.3151mg、0.3226mg、0.3087mg、0.3151mg、0.3219mg。

3 讨论

3.1 杜仲药材中主要化学成分有木脂素类、环烯醚萜类、有机酸、黄酮、多糖及杜仲胶等有机化合物，美国威斯康星大学等研究发现，杜仲降低血压的有效成分是松脂醇二葡萄糖苷［3］。由于松脂醇二葡萄糖苷为水溶性的苷类成分，因此，选用松脂醇二葡萄糖苷作为浸膏质量评价研究对象。

3.2 本次实验中除了对色谱条件中流动相进行考察外，还分别对提取溶剂(甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇)、提取方法(超声和回流)、提取时间(20min、30min、45min、60min)和溶剂用量(15mL、25mL、50mL)等条件进行考察，结果表明，松脂醇二葡萄糖苷以25mL50%甲醇超声提取30min效果最好。

［1］梁建宁，李波.复方杜仲片质量标准研究［J］.中南药学，2004，2(4):224-226.

［2］何勇，黄晓玲，李桂珍，等.复方杜仲片中黄芩苷的含量测定［J］.中成药，2006，28(6):924-925.

［3］管淑玉，苏薇薇.杜仲化学成分与药理研究进展［J］.中药材，2003，26(2):124.