强力宁片质量标准研究

李俊芳，庞永清，郑艳春，张东阁

(1.颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中药新辅料工程技术研究中心，河北 承德 067000； 3.湖南华纳大药厂有限公司，湖南 长沙 410006)

强力宁片质量标准研究

李俊芳1，2*，庞永清3，郑艳春1，2，张东阁1，2

(1.颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中药新辅料工程技术研究中心，河北 承德 067000； 3.湖南华纳大药厂有限公司，湖南 长沙 410006)

目的建立强力宁片的质量控制标准。方法对强力宁片中的刺五加、枸杞子进行薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法对异嗪皮啶进行含量测定。结果薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；异嗪皮啶进样量在0.042 88～0.257 28 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9，n=6)；平均加样回收率为97.77%，RSD=1.98%。结论建立的TLC和HPLC专属性强、准确度高、重复性好，可用于强力宁片的质量控制。

强力宁片；薄层色谱鉴别；高效液相色谱法；质量标准

强力宁片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第十册，由刺五加和枸杞子两味中药组成，具有强身益智、健脑补骨的功效。临床上用于治疗体乏无力，失眠健忘，精神倦怠，过度疲劳，腰膝酸软，脾肾阳虚，食欲不振等症[1]。强力宁片原质量标准项下没有鉴别项和含量测定项，为更好地控制产品质量，本实验采用薄层色谱鉴别法对处方中刺五加和枸杞子进行鉴别，采用高效液相色谱法对片剂中异嗪皮啶进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪(岛津LC-10AT泵，SPD-M10A紫外检测器，CLASS-LC5.03色谱工作站)；AL104型电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；HH-S型水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)；SK3200H超声清洗器(上海科导仪器有限公司)。

1.2 试药

异嗪皮啶对照品(批号：0837-200203)、刺五加对照药材(批号：120991-200405)、枸杞子对照药材(批号：121072-200404)，均购自中国食品药品检定研究院。强力宁片(颈复康药业集团有限公司，批号：110311，110312，110313)；薄层色谱硅胶预制板(10 cm×10 cm，山东省烟台市化学工业研究所)；乙腈、甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 刺五加[2]取本品5片，除去糖衣，研细，加甲醇25 mL，超声处理(功率250 W，频率30 kHz)20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。照处方配比，除去刺五加，按强力宁片工艺制备刺五加阴性样品。取刺五加阴性样品，照供试品溶液制备方法同法制成阴性样品溶液。另取刺五加对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。再取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-浓氨试液(10∶8∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品色谱则无此斑点。见图1。

1～3.样品 4.刺五加对照药材 5.异嗪皮啶对照品 6.刺五加的阴性样品 图1 强力宁片中刺五加TLC图

2.1.2 枸杞子[2]取本品5片，除去糖衣，研细，加水35 mL，加热煮沸15 min，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15 mL振摇提取，提取液浓缩至干，加甲醇1 mL，作为供试品溶液。照处方配比，除去枸杞子，按强力宁片工艺制备枸杞子阴性样品。取枸杞子阴性样品，照供试品溶液制备方法同法制成阴性样品溶液。另取枸杞子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-浓氨试液(10∶8∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品色谱则无此斑点。见图2。

1～3.样品 4.枸杞子对照药材 5.缺枸杞子的阴性样品 图2 强力宁片中枸杞子TLC图

2.2 含量测定[3-8]

2.2.1 对照品溶液的制备 取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含异嗪皮啶5 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去糖衣，精密称定，研成细粉，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入0.25 moL·L-1硫酸溶液25 mL超声处理45 min，转移至分液漏斗中，再用5 mL 水多次洗涤容器，倒入分液漏斗中，用三氯甲烷提取4次(25，25，15，15 mL)，合并三氯甲烷液，65 ℃以下水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性供试品溶液的制备 照处方配比，除去刺五加，按强力宁片工艺制备缺刺五加的阴性样品，再按2.2.2供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件与系统适用性 Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)为流动相，流速1.0 mL·min-1，检测波长：344 nm。见图3。

1.异嗪皮啶 A.异嗪皮啶对照品 B.强力宁片 C.缺刺五加的阴性对照品 图3 强力宁片及其对照品HPLC图

2.2.5 线性关系考察 精密称取异嗪皮啶对照品0.026 8 g，置500 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取对照品贮备液2，4，6，8，10，12 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取20 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以异嗪皮啶进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=2 769 493.7X-846.7(r=0.999 9)，表明异嗪皮啶0.042 88～0.257 28 μg与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取同一异嗪皮啶对照品溶液，精密吸取20 μL，连续进样6次，测定异嗪皮啶峰面积的RSD=0.63%，表面仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号：110101)，分别在0，1，2，4，6，8，12，24 h精密吸取20 μL进样测定，结果峰面积的RSD=0.85%，表明制备的供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批号强力宁片样品(批号：110101)6份，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果异嗪皮啶含量的平均值为46.82 μg·g-1，RSD=1.52%，表明试验方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 取强力宁片样品(批号：110101)粉末6份，每份约0.25 g，精密称定，分别精密加入0.011 8 mg·mL-1的异嗪皮啶对照品溶液1 mL，照2.2.2项下方法制备供试品溶液，进样20 μL，测定，计算回收率，结果见表1。

表1 强力宁片中异嗪皮啶加样回收率试验(n=6)

注：异嗪皮啶对照品加入量均为11.80 μg

2.2.10 样品含量测定 取110311，110312，110313 3批样品，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，依法进样测定，结果3批样品中异嗪皮啶的质量分数分别为19.36，20.52，22.44 μg·g-1，平均质量分数为20.77 μg·g-1。

3 讨论

本实验选用乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)、甲醇-水-甲酸(30∶70∶0.5)、乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)等不同的流动相进行试验，经比较以乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)为流动相得到的色谱图效果最佳。通过紫外扫描，异嗪皮啶在344 nm处有最大吸收，故选择344 nm为检测波长。

异嗪皮啶即7-羟基-6，8-二甲氧基香豆素，其本身具有一定的升华性。因此，本实验在对样品处理过程中，温度尽可能低，将误差减少至最小。

笔者在做薄层层析实验时，曾以三氯甲烷-甲醇(19∶1)、三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-浓氨试液(10∶8∶3∶0.2)作为鉴别刺五加的展开剂；以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3∶2∶1)、三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-浓氨试液(10∶8∶3∶0.2)作为鉴别枸杞子[9]的展开剂；结果以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-浓氨试液(10∶8∶3∶0.2)为展开剂鉴别这两种中药最为理想。

实验研究建立的TLC和HPLC专属性强、准确度高、重复性好，可用于强力宁片的质量控制。

[1] 卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第十册.1995：188.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：192-193.

[3] 江敏，张强.HPLC法测定刺五加胶囊中异嗪皮啶的含量[J].黑龙江医药，2005，18(2)：9.

[4] 郭美华，史文秀，王金华，等.高效液相色谱法测定安神益心液中异嗪皮啶的含量[J].中国医院药学杂志，2011，31(2)：171.

[5] 曾建伟，林培玲，谢勇，等.HPLC法同时测定草珊瑚中富马酸、异嗪皮啶和迷迭香酸的含量[J].药物分析杂志，2011，31(7)：1417.

[6] 林小燕.反相HPLC法测复方片仔癀含片中肿节风的异嗪皮啶含量[J].中国实验方剂学杂志，2002，8(3)：7.

[7] 王宪明，周珏，曲凡.反相高效液相色谱法测定刺五加药材中异嗪皮啶含量[J].成都中医药大学学报，2007，30(3)：59.

[8] 郑伟然.HPLC法测定中药材刺五加中异嗪皮啶的含量[J].现代中药研究与实践，2003，17(1)：29.

[9] 孟楣，高家荣，魏良兵.薄层色谱法鉴别枸杞子的实验研究[J].中国药事，2007，21(11)：912.

QualityStandardofQiangLiningTablets

LIJunfang1，2，PANGYongqing3，ZHENGYanchun1，2，ZHANGDongge1，2

(1.JingfukangPharmaceuticalGroupCo.，Ltd.，Chengde067000，China； 2.NewExcipientsofTraditionalChineseMedicineEngineeringResearchCenterofHebeiProvince，Chengde067000，China； 3.HunanWarnerLargePharmaceuticalCompanies，Changsha410006，China)

Objective：To established the method for quality control of Qiang Lining tablets.MethodsAcanthopanacis Senticosi Radix et Rhizoma seu Caulis and Lycii Fructus in Qiang Lining tablets were identified by TLC.The content of isofraxidin in Qiang Lining tablets was determined by HPLC.ResultsThe spots on the TLC plate were clear and the negative control sample didn’t disturb.A good linearity was obtained for isofraxidin in the range of 0.042 88～0.257 28 μg(r=0.999 9，n=6)；the average recovery was 97.77%，RSD 1.98%.ConclusionThe method are specific，accurate and reproducible，and can be used for quality control of the Qiang Lining tablets.

Qiang Lining Tablets；TLC；HPLC；Quality standard

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李俊芳，工程师，研究方向：中药新药制剂及质量，Tel：(0314)2292392，E-mail：ljf19791221@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.013

2013-12-30)