羟苯磺酸钙胶囊的溶出度研究

李卿

（广西壮族自治区妇幼保健院药剂科，广西 南宁 530003 E-mail：83606449＠qq.com）

羟苯磺酸钙（Calcium dobesilate）是一种微血管循环改善剂，临床常用于糖尿病性视网膜病变、静脉曲张综合征等由微血管循环障碍引起的多种疾病的预防和治疗[1-3]。目前，进口和国内生产的羟苯磺酸钙主要为胶囊剂，羟苯磺酸钙胶囊（Calcium Dobesilate Capsules）是由奥地利依比威药品有限公司进口国内的眼科用药，商品名为DOXIUM○R，为《中国药典》2010版二部[4]收载品种。该药溶出度研究主要参考国家标准 WS1- （X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl为介质进行的试验。目前仿制药溶出度研究已成为国家新药审评中心关注内容，现今仿制药审评中心已全面引入体外溶出曲线评价模式。本文通过在0.1mol／L HCl溶液、pH＝4.5醋酸盐缓冲液、pH＝6.8磷酸盐缓冲液及水4种介质[5]中羟苯磺酸钙胶囊自制制剂与对照制剂的溶出行为对比研究，为羟苯磺酸钙胶囊仿制药的研究及申报提供资料。

1 仪器与试药

ZRS-8G溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；UV2450型紫外-可见光分光光度计（日本岛津）；AB-135-S电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；PHS-25型pH计（上海精密科学仪器有限公司）；0.45μm有机滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；0.45μm水相滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；羟苯磺酸钙对照品（批号：100573-200401，由中国药品生物制品检定所提供）；羟苯磺酸钙胶囊对照制剂（批号：18801802，奥地利依比威药品有限公司）；羟苯磺酸钙胶囊自制制剂1（批号：1011199）、羟苯磺酸钙胶囊自制制剂2（批号：1009145）及空辅由国内某制药公司提供；醋酸铵、磷酸二氢钠、氢氧化钠、醋酸、盐酸均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司；实验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶出介质的配制 ①水：直接取纯化水。②0.1mol／L HCl：按《中国药典》2010年版二部[4]方法配制，取浓盐酸9ml，加水稀释至1000ml，摇匀，即得0.1mol／L HCl溶液。③pH＝4.5醋酸盐：按《中国药典》2010年版二部[4]方法配制，取醋酸铵7.7g加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml，加水稀释至100 ml，摇匀，即得pH＝4.5醋酸盐缓冲液。④pH＝6.8磷酸盐：按《中国药典》2010年版二部[4]方法配制，取0.2mol／L磷酸二氢钠溶液250ml，加0.2mol／L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得pH＝6.8磷酸盐缓冲液。

2.2 测定方法 取羟苯磺酸钙制剂，照溶出度测定法[6]操作。分别取“2.1”项下的溶出介质各900ml，采用《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法，调定转速为50r／min，取羟苯磺酸钙胶囊自制制剂6粒，依法操作，不同时间点分别取溶液适量，并同时补充相同温度，相同体积的溶出介质，滤过，滤液用相应溶出介质稀释成每1ml中约含25μg的溶液，另取羟苯磺酸钙对照品适量，加相应介质溶解并稀释成每1ml中约含25μg的溶液，取上述两种溶液按照分光光度法（《中国药典》2010年版二部附录ⅣA），在301nm的波长处分别测定吸光度，按二者吸光度的比值计算累计溶出量。另取羟苯磺酸钙胶囊对照制剂，平行操作，测定其在不同溶出介质中各对应时间点的累计溶出量。

2.3 标准曲线的绘制 取干燥至恒重的羟苯磺酸钙对照品10 mg，精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol／L盐酸溶液溶解并稀释到刻度，摇匀，配制成100μg／ml的溶液，分别吸取1 ml、2ml、2.5ml、3ml、4ml至10ml，配成浓度分别为10μg／ml、20μg／ml、25μg／ml、30μg／ml、40μg／ml的溶液，测定其在301nm处的吸光度值，以样品的浓度（C，mg／ml）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，作二次回归得到回归方程及相关系数，回归方程为A＝0.0159 C＋0.03，r＝0.9999，表明线性关系良好，线性范围10.00～40.00mg／ml。

2.4 专属性试验 取羟苯磺酸钙胶囊自制制剂适量，精密称定，加0.1mol／L HCl溶液溶解并稀释成每1ml中约含25μg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取空辅适量，按供试品溶液配制方法配制。精密量取空辅溶液、供试品溶液及“2.2”项下对照品溶液进行波长扫描，结果空辅溶液在301nm处无吸收干扰，表明空辅不干扰本品溶出度的测定。

2.5 重复性试验 取羟苯磺酸钙胶囊自制制剂6粒，照溶出度测定法（《中国药典》2010年版二部附录XC第二法），以0.1 mol／L HCl溶液900ml为溶出介质，转速为50r／min，依法操作，于60min时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用0.1mol／L盐酸溶液稀释成每1ml中约含25μg的样品溶液。分别将6份样品在301nm测定其吸光度值，计算6个样品的相对标准偏差。羟苯磺酸钙胶囊自制制剂6份样品测定结果相对标准偏差为1.63%，不大于2%，表明本方法重复性良好。

2.6 溶液稳定性试验 取重复性试验项下6号样品液，于室温下放置0、2、4、6、8、12h用紫外-可见分光光度法测定其在301nm处的吸光度值，计算羟苯磺酸钙的A的相对标准偏差。室温放置12h，主成分含量的相对标准偏差为0.56%，不大于2%，可认为室温放置12h内样品溶液稳定。

2.7 回收率试验 回收率采用空白回收法，精密称定9份空白辅料和羟苯磺酸钙标示量的80%、100%、120%装入胶囊中，按照羟苯磺酸钙胶囊的溶出方法，分别将胶囊投入溶出杯中，待结束时取出样品溶液进行测定，计算平均回收率及RSD值，结果见表1。在高、中、低三个不同浓度下，本品羟苯磺酸钙的回收率均在98%～102%之间，且各次测得结果间相对标准偏差均小于2%，表明本方法回收率良好。

表1 回收率试验测定结果 （n＝9）

2.8 溶出度及溶出曲线测定结果 分别在4种介质中，按“2.1”项下方法测定，得羟苯磺酸钙胶囊自制制剂与对照制剂在4种介质中累积溶出度曲线（见图1）。

图1 自制羟苯磺酸钙胶囊和参比制剂在4种介质中的溶出曲线

采用美国FDA推荐使用的相似因子法[7]，计算公式如下：

其中，Ti和Ri分别为各取样时间点自制制剂和参比制剂的平均溶出率，n为取样时间点的个数。如果50≤f2≤100，则表示两药的溶出曲线差异无统计学意义，如果f2＜50，则认为差异有统计学意义。以相似因子法来判断自制制剂与参比制剂是否相似，结果见表2。

表2 以对照制剂为对照的自制制剂的相似因子

由表2可以看出，自制羟苯磺酸钙胶囊在4种介质中f2值＞50，与对照制剂的溶出曲线差异无统计学意义。但由于处方因素，制备工艺的不同，除了在0.1mol／L HCl介质中，自制羟苯磺酸钙胶囊在其他3种介质中累积百分溶出率均优于对照制剂。

3 讨论

3.1 溶出介质的选择 通过饱和溶解度实验结果证明羟苯磺酸钙在0.1mol／L HCl、pH 4.5、pH 6.8、水中易溶。参照日本药典第15版附录“溶出度试验法”，选择0.1mol／L HCl溶液、pH＝4.5、pH＝6.8缓冲液及水4种介质，模拟不同体质的胃液生理环境，扩大药物的适用人群。考虑试验时间较长，本研究参考国家标准 WS1-（X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl为主要介质及溶剂进行的各项试验。

3.2 溶出方法确定 目前羟苯磺酸钙溶出度研究主要参考国家标准 WS1- （X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl为溶出介质，转速为50r／min，溶出20min，依法测定，溶出量应为标示量的80%。笔者通过对照制剂进行方法验证，结果发现溶出量并非如上标准所述20min＞80%，因此对羟苯磺酸钙胶囊的溶出方法进行建立及优化，通过多次测定对照制剂的溶出曲线结果及溶出现象分析，最终确定本品在不同介质中的溶出测定方法。本文对不同介质中羟苯磺酸钙胶囊自制制剂与对照制剂的溶出行为进行对比研究，为羟苯磺酸钙胶囊的溶出度试验质量标准的建立提供了依据。

3.3 滤膜吸附试验 本实验采用0.45μm滤膜滤过样品，考虑到样品过滤时有损失，故进行滤膜吸附试验。按溶出度方法取出溶出液7份，将其中1份溶液在3000r／min离心机中离心10min，作为离心供试品溶液，将其中3份样品过有机膜（0.45μm），剩余3份样品过水膜（0.45μm），过滤体积分别为3ml、5ml、8ml。取续滤液稀释后，即得滤过样品溶液。水膜、有机膜（0.45mm）滤过5ml供试品溶液与离心供试品溶液测得吸光度比值在0.98～1.02之间，可认为吸附饱和，样品不存在滤膜吸附现象。因此，实验中是将取出的溶出液，过滤，弃去5ml初滤液，再取续滤液进行测定，滤膜吸附对本品溶出度检测无影响。

[1]孙素馨，王宏，孙晓芹.羟苯磺酸钙的药理作用及临床应用[J].中国医药药学杂志，2003，23（2）：100-101.

[2]栾军.多贝斯[J].中国新药杂志，2001，10（9）：711.

[3]张林，张德秀.羟苯磺酸钙胶囊（多贝斯）治疗糖尿病视网膜病变的临床观察[J].中国药房，2003，14（11）：680-681.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版：二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：891.

[5]张启明，谢沐风，宁保明.采用多条溶出曲线评价口服固体制剂的内在质量[J].中国医药工业杂志，2009，40（12）：946-955.

[6]刘辉，石惠婵，李强.预胶化淀粉对羟苯磺酸钙胶囊溶出度的影响[J].中国药房，2008，19（1）：39-41.

[7]马红玲，林聪，孔丽，等.瑞格列奈片的溶出度研究[J].中南药学，2012，10（11）：822-825.