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GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量

2014-10-21曾译文

科学与技术 2014年11期

曾译文

摘要:目的 建立用GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量。方法 OV-1弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)为固定相,FID检测器,进样口温度230℃, 检测器温度250℃, 采用程序升温,柱温100℃, 保持1min,然后以15℃/min的速率升至220℃保持8min; 载气为氮气,以正十八烷为内标,按内标法计算丁香酚含量。结果 丁香酚进样量在0.5~4.5 mg /ml 范围内其峰面积与进样量呈良好线性关系。y=0.1311x-0.054,(r=0.9994);加样回收率为100.96%,RSD为0.74%(n=9)。结论 该方法灵敏、简便,结果准确可靠,可作为控制丁香罗勒油质量的方法。

关键词:GC法;丁香罗勒油;丁香酚

丁香罗勒油为唇形科植物丁香罗勒Ocimum gratissimum L. 的全草经水蒸气蒸馏提取的挥发油[1]。

参照《中国药典》2010年版一部丁香罗勒油标准,考虑到生产和检验实际,我们在方法中使用了毛细管柱,测定法为内标法。丁香罗勒油中成分复杂,成分有三十多种以上[2],使用了毛细管柱相对填充柱更能有效分离丁香酚,更具专属性,有效缩短了检验时间。

经实验证明该毛细管柱内标法的峰分离度、理论塔板数都符合《中国药典》2010年版要求,且优于(药典)填充柱法,本毛细管柱内标法的准确度、重复性、精密度、线性均符合要求;两方法相比:采用毛细管柱方法提高了准确度和工作效率,分析时间短、专属性强、色谱峰形良好。

1 仪器与材料

Agilent GC1790F 气相色谱仪,氢离子火焰检测器(FID);sartorius BP211D电子天平,丁香酚对照品批号:110725-200610,购于中国药品生物制品检定所;正己烷为分析纯(广州市化学试剂厂),正十八烷内标物[东京化成工业株式会社(TCI)],丁香罗勒油(佛山市南海中南药化厂提供,批号:060701、060702、060703)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

气相色谱条件:30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛细管柱;程序升温:起始温度100℃,保持1min,15℃/min升温至220℃,保持8min,FID检测器温度250℃,进样器温度230℃。理论板数按丁香酚峰计算应不低于30000(见图1)。

图1 丁香罗勒油空白溶剂、系统适用性、对照品GC图谱、供试品GC图谱

A.空白溶剂色谱图; B.系统适用性色谱图;

C.丁香酚对照品和内标正十八烷色谱图; D.丁香罗勒油供试品色谱图

2.2 内标液的制备

取正十八烷适量,精密称定,加正己烷溶解并稀释成每1ml含25mg的溶液,作为内标溶液。

2.3 对照品溶液的制备

取丁香酚对照品约50mg,精密称定,置10ml量瓶中,精密加入内标溶液2ml,用正己烷稀释至刻度,摇匀,取1μl注入气相色谱仪。

2.4 供试品溶液的制备

取供试品约60mg,精密称定,置10ml量瓶中,精密加入内标溶液2ml,用正己烷溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。取1μl注入气相色谱仪,测定,即得。

2.5 线性关系考察

分别取丁香酚5.00mg、15.00mg、25.0mg、35.0mg、45.0mg于10ml量瓶,并按本标准加入2ml内标液,用正己烷定容至10ml作供试品,取1μl注入气相色谱仪,计算丁香酚与正十八烷峰面积比值。以丁香酚浓度(C)为横坐标,丁香酚与正十八烷峰面积比值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,进行线性回归,结果得回歸方程:y=0.1311x-0.054(r=0.9994)。结果表明,丁香酚进样量在0.5~4.5 mg /ml范围内线性关系良好。

2.6 重复性试验

取同批样品6份(批号060701),按供试品溶液制备方法处理,在上述色谱条件下测定含量,测得丁香酚的平均值为86.73%,RSD=0.14%,结果表明本方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取批号060701丁香罗勒油供试品溶液在0、2、4、6、8、10小时进样,测得丁香酚与正十八烷峰面积比值,RSD为0.89%(n=6),结果表明样品溶液在10小时内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取批号060701丁香罗勒油(本品已知丁香酚含量:86.7%)分别30.0mg于9只10ml容量瓶中,分别加入19.0mg、19.0mg、19.0mg、24.0mg、24.0mg、24.0mg、29.0mg、29.0mg、29.0mg丁香酚对照品,分别加入2ml内标溶液,按上述色谱条件测定,结果见表1。平均加样回收率为100.96%,RSD为0.74%。

表1 回收率实验测定结果(n=9)

取本品量mg 本品含丁香酚mg 加入丁香酚mg 实际测得总量mg 回收率% 平均回收率% RSD

%

1 29.78 25.82 18.87 44.68 99.95 100.96 0.74

2 29.67 25.72 19.15 44.94 100.37

3 29.89 25.91 19.06 45.14 100.89

4 30.43 26.38 24.43 50.81 100.00

5 30.68 26.60 24.30 51.24 101.40

6 30.78 26.69 24.28 51.36 101.61

7 29.62 25.68 28.99 54.91 100.83

8 29.58 25.65 29.38 55.60 101.94

9 29.70 25.75 29.03 55.26 101.65

2.9 样品测定

分别取3个批号的丁香罗勒油适量,精密称定制备供试品溶液,依法测定丁香酚含量,结果见表2。

表2 丁香油中丁香酚的含量

批号 含量(%)

060701 88.0

060702 86.8

060703 86.2

3 讨论

3.1 分析方法的选择

经查阅文献,目前测定丁香罗勒油中丁香酚含量的方法主要以气相色谱法为主,气相色谱法又可分内标法和外標法,固定相有采用PEG-20M [3] [4]、SE-30[1] [5]、FFAP[6]三种毛细管色谱柱,《中国药典》2010年版丁香罗勒油方法为气相色谱填充柱[1] [3] [4]法进行分析。本实验结合参考文献及实际操作,选择毛细管色谱柱的内标法测定丁香罗勒油中丁香酚含量,并进行研究和考察。结果表明:选择固定液为OV-1的毛细管柱色谱条件下,分析时间短,分离度好,专属性强、色谱峰形良好。

3.2 内标物的选择

选择内标物的原则优先选择与被测成份的极性和沸点接近的物质,从而使内标峰的保留时间与被测成份的保留时间相近的,但在实际检测中发现,与被测成份的保留时间相近的位置已有很多成份,内标物不好选择,据文献资料报道,丁香罗勒油中含水杨酸甲酯[2],但《中国药典》2010年版中气相色谱法中却用水杨酸甲酯作为内标物,因此可能会影响含量测定的准确性,本方法将水杨酸甲酯改为正十八烷作为内标物。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M],一部.北京.中国医药科技出版社,2010:365.

[2] 李玲玲, 赖东美, 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱与气质连用分析[J].福建分析测试研究报告,2000,9(2):1222-1227.

[3] 王海英.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 哈尔滨医药.2009,29(4):20-21.

[4] 李玲玲, 赖东美, 叶飞云.丁香罗勒油的气相色谱分析[J].中国中药杂志,2000,25(4):229-230.

[5] 张春成,高海,沈小红,等.丁香罗勒油中丁香酚的GC法测定[J].西北药学杂志.1994,14(2):56-57.

[6] 谢敏,吴春敏,卓丹.气相色谱法测定丁香油中丁香酚含量[J]. 海峡药学.2003,15(5):34-36.