苹果及土壤中二氰蒽醌残留量的高效液相色谱分析

王晓菁 吴燕 牛艳 赵子丹

摘要 [目的]建立苹果及土壤中二氰蒽醌残留量的高效液相色谱分析方法。[方法]苹果、土壤样品在酸性条件下用乙腈提取，經C18净化后，以水-乙腈为流动相（3∶7，V/V），在检测波长254 nm 条件下采用HPLCUV测定了其中二氰蒽醌残留量。[结果]方法的检出限为9.5 μg/kg，平均添加回收率为82.8%～92.4%，相对标准偏差为0.8%～7.2%。[结论]方法快速、准确度高，适用于苹果及土壤中二氰蒽醌残留量的测定。

关键词 高效液相色谱； 二氰蒽醌； 苹果； 土壤； 残留

中图分类号 S482.2 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2014）31-10936-02

Deter mination of Dithianon Residue in Apple and Soil by HPLC

WANG Xiaojing，WU Yan*，NIU Yan et al （Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Yinchuan，Ningxia 750002）

Abstract [Objective] To establish HPLC method for deter mining dithianon residue in apple and soil.[Method] Soil and apple samples were extracted with acetonitrile，after purification by C18，with wateracetonitrile as mobile phase（3∶7，V/V），under the detection wavelength of 254 nm，dithianon residue was deter mined by HPLC.[Result] The method detectable limit is 9.5 μg/kg，the average recovery rate is 82.8%-92.4%，the relative standard deviation is 0.8%-7.2%.[Conclusion] The method is fast，simple and sensitive with good accuracy.

Key words HPLC； Dithianon； Apple； Soil； Residue

二氰蒽醌（Dithianon）是一种保护性杀菌剂，主要通过干扰细胞呼吸而抑制各种真菌酶，最后导致病害的死亡，同时具有保护活性和治疗活性。它可防治苹果、梨黑星病，苹果轮纹病，柑橘疮痂病、锈病，草莓叶斑病，攫桃锈病、炭疽病等^[1-3]。随着二氰蒽醌的广泛使用，其在农作物、环境中的残留及对人类健康和环境的危害也越来越引起关注，为了全面评价二氰蒽醌的环境效应，指导其科学使用，建立二氰蒽醌的残留分析方法显得十分重要。目前，关于二氰蒽醌残留的分析方法有QuEchERS前处理、高效液相色谱测定水果中残留量^[4-7]。笔者建立了在酸性条件下以乙腈为提取溶剂，经C18净化，采用HPLCUV测定苹果和土壤中二氰蒽醌残留的分析方法，旨在为二氰蒽醌的残留测定及安全使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂。乙腈（色谱纯）、硫酸（96%，优级纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸镁（分析纯）、去离子水、C18（DIKMA公司）和二氰蒽醌原药（纯度为96%，山东青岛海利尔药品有限公司提供）。

1.1.2 仪器。

匀浆机（T18basic 型，德国IKA 公司）、旋转蒸发器（R215 型，瑞士步琪公司）、离心机（TD40L，上海安亭科学仪器厂）、电子天平（精度0.01 g， PL202L型，瑞士梅特勒-托利多仪器公司）和高效液相色谱仪（UV检测器，20A型，日本岛津公司）。

1.2 样品分析 从试验小区取回土壤样品除去杂草、碎石，过筛。苹果打成浆状，备用。

1.2.1 苹果样品分析。称取苹果样品10.0 g于50 ml离心管中，加入1.0 mol/L硫酸2 ml摇匀10 min后，再加入20 ml乙腈，高速匀浆2 min，加入3.0 g氯化钠，盖上盖子，振摇约1 min，于4 000 r/min下离心5 min。取上清液2 ml于盛150 mg无水硫酸镁及150 mg C18的15 ml离心管中，涡旋1 min，上清液过0.22 μm滤膜，待测。

1.2.2 土壤样品分析。称取土壤样品10.0 g于50 ml离心管中，加入1.0 mol/L硫酸5 ml放置10 min，再加入20 ml乙腈，振荡30 min，加入3.0 g氯化钠，盖上盖子，振摇约1 min，于4 000 r/min离心5 min，上清液过0.22 μm滤膜，待测。

1.3 液相色谱条件 采用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；检测波长：254 nm；流动相：水-乙腈（3∶7，V/V），等度洗脱；流速：1.0 ml/ min；进样量：5 μl。

2 结果与分析

2.1 标准工作曲线

称取二氰蒽醌原药0.010 4 g，用乙腈定容至10 ml，得浓度为1 000.00 mg/L的标准溶液。将上述标准溶液用乙腈稀释成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L系列标准工作液，在“1.3”色谱条件下，对标准工作液和样品等体积进样进行测定。以二氰蒽醌标准溶液浓度与相对应的峰面积做线性分析（图1），得回归曲线y=16 662x-247.37，相关系数（r）为0.999 9（n=6），表明在该浓度范围内呈良好的线性关系。二氰蒽醌标准系列图谱见图2。

2.2 回收率和精密度

分别在空白苹果和土壤样品中添加0.05、0.20、1.00 mg/kg 3个水平质量浓度的二氰蒽醌标准溶液，每个添加水平重复5次，在“1.3”色谱条件下测定回收率，同时测定苹果和土壤空白样品。由表1可知，苹果中二氰蒽醌回收率为82.8%～87.2%，

变异系数为1.3%～2.3%；土壤中回收率为88.7%～92.4%，变异系数为0.8%～7.2%，回收率、精密度均符合检测要求。以添加1.00 mg/kg二氰蒽醌为例，苹果和土壤图谱见图3～6。

3 结论

试验建立了在酸性条件下用乙腈提取、C18净化的前处理方法和高效液相色谱—紫外检测器测定苹果和土壤中二氰蒽醌残留量的检测方法，并对方法的回收率、精密度进行分析研究。该方法能有效去除干扰，具有较好的精密度和准确度，符合农残分析的要求^[8-9]。

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