心脑宁片对心肌缺血大鼠血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛及超氧化物歧化酶水平的影响※

吕宏迪 郝少君 王希东 苏 峰 李文俊 张正臣

(中国人民解放军第三七一医院心血管病科，河南 新乡 453000)

1 中国人民解放军第三七一医院药械科，河南 新乡 453000

1 中国人民解放军第三七一医院医务处，河南 新乡 453000

心脑宁片是由人参、当归、川芎、黄芪等组成的中药片剂，具有活血化瘀、益气安神之功效，用于脑血栓形成、冠心病治疗，亦可用于记忆力减退、衰老等治疗。为进一步探讨心脑宁片的药理作用，我们进行了心脑宁片对心肌缺血大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响的实验研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 Wistar雄性大鼠70只，清洁级，体质量240～280 g，由河北省实验动物中心提供，动物合格证号:DK0505-0027。饲养环境为清洁级，温度18～25℃，湿度45%～60%。

1.1.2 实验药物 心脑宁片(药物组成:人参、当归、川芎、黄芪，由中国人民解放军第三七一医院研制开发);脑心通胶囊(陕西步长制药有限公司，国药准字Z20025001);硝苯地平片(常州四药制药有限公司，国药准字Z20025001);垂体后叶素注射液(上海第一生化药业有限公司，国药准字H31022754);羧甲基纤维素钠(CMC)(天津市福晨化学试剂厂);CK试剂盒、LDH试剂盒、MDA试剂盒及SOD试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供;水合氯醛(青岛宇龙海藻药业有限公司，国药准字H37022673)。

1.1.3 实验仪器 JM 1000电子秤(余姚市纪铭称重校验设备有限公司，型号JM-B10002);C型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂，型号TDL-40B);奥豪斯电子分析天平(河南中良科学仪器有限公司，型号JA1103N);UV-2000紫外可见分光光度计(上海精密仪器仪表有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 动物选择及分组 将心电图采集与分析系统SP2006筛选出心电图正常的Wistar雄性大鼠70只，随机分为7组，即空白对照组、模型组、硝苯地平片组、脑心通胶囊组及心脑宁片大、中、小剂量组，每组各10只。

1.2.2 给药方法 心脑宁片大、中、小剂量组大鼠分别灌服大、中、小剂量的心脑宁片混悬液 (1.5、0.75、0.375 g/kg，用 0.5%CMC 配成 75、37.5、18.8 mg/mL 的混悬液，2 mL/100 g);硝苯地平片组大鼠灌服硝苯地平片混悬液(30 mg/kg，用 0.5%CMC 配成1.5 mg/mL 的混悬液，2 mL/100 g);脑心通胶囊组大鼠灌服脑心通胶囊混悬液(0.8 g/kg，用 0.5%CMC 配成 40 mg/mL的混悬液，2 mL/100 g);空白对照组大鼠灌服等容积的0.5%CMC。每日给药1次，连续给药7 d。

1.2.3 模型制备 于最后1次给药后1 h，每组大鼠用水合氯醛麻醉，自左侧第3～4肋间开胸，用开胸器固定，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房找出冠状动脉左前降支(LAD)，在距起点2～3 mm处穿一“0”号线结扎，看到心脏颜色变为灰白色视为结扎成功，造成心肌缺血。空白对照组不结扎。完成上述步骤后，将心脏送回胸腔，挤出胸腔内血液和气体，立即缝合胸壁，整个手术在1 min内完成。

1.3 观察指标及方法 缺血2 h后，进行腹主动脉取血，3 000 r/min离心10 min，取血清，备用。

1.3.1 CK测定 按说明书操作，计算公式:血清中CK活力(U/mL)=(测定管OD值-测定空白管OD值)/(标准管OD值-标准空白管OD值)×标准品活力(4×35 U/mL)

1.3.2 LDH测定 按说明书操作，计算公式:血清中LDH活力(U/L)=(测定管OD值-测定空白管OD值)/(标准管 OD值 -标准空白管 OD值)×标准管浓度(2 μmol/mL)×1 000 mL×测试前样品稀释倍数。

1.3.3 MDA测定 按说明书操作，计算公式:血清(浆)中MDA含量(nmol/mL)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10 nmol/mL)×样本测试前稀释倍数

1.3.4 SOD测定 按说明书操作。

1.4 统计学方法 应用SPSS 11.0统计软件包进行统计学分析，计量资料用均数±标准差(±s)表示，采用t检验。

2 结果

2.1 各组大鼠血清CK、LDH比较 见表1。

表1 各组大鼠血清CK、LDH比较 ±s

表1 各组大鼠血清CK、LDH比较 ±s

与空白对照组比较，*P＜0.05;与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组 别 n 剂量(g/kg) CK(U/mL) LDH(U/L)10 0.375 0.809 ±0.186 9 003 ±1 074 10 - 0.392 ±0.059 6 321 ±508模型组 10 - 0.900±0.295* 9 384 ±1 189*硝苯地平片组 10 0.03 0.420±0.150△△ 6 624±304△△脑心通胶囊组 10 0.8 0.471±0.096△△ 6 881±539△△心脑宁片大剂量组 10 1.5 0.451±0.101△△ 6 979±505△△心脑宁片中剂量组 10 0.75 0.512±0.131△△ 7 862±1 232△心脑宁片小剂量组空白对照组

由表1可见，模型组大鼠血清CK、LDH均较空白对照组升高(P＜0.05)，说明造模成功。硝苯地平片组、脑心通胶囊组、心脑宁片大剂量组及心脑宁片中剂量组大鼠血清 CK、LDH 均较模型组降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，硝苯地平片组、脑心通胶囊组、心脑宁片大剂量组及心脑宁片中剂量组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 各组大鼠MDA、SOD比较 见表2。

表2 各组大鼠MDA、SOD比较 ±s

表2 各组大鼠MDA、SOD比较 ±s

与空白对照组比较，*P＜0.05;与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01;与心脑宁片大剂量组比较，#P ＜0.05

组 别 n 剂量(g/kg)MDA(nmol/mL) SOD(U/mL)空白对照组10 - 7.098 ±1.892 183.8 ±5.9模型组 10 - 11.658 ±1.459* 155.8 ±7.1*硝苯地平片组 10 0.03 8.829 ±2.011△△# 171.3 ±9.0△△#脑心通胶囊组 10 0.8 8.220 ±2.762△△# 168.1 ±8.5△△#心脑宁片大剂量组 10 1.5 8.122 ±1.801△△ 180.2 ±8.8△△心脑宁片中剂量组 10 0.75 8.829 ±0.948△△# 178.8 ±9.8△△#心脑宁片小剂量组 10 0.375 9.908 ±0.879△△# 172.4 ±13.2△#

由表2可见，模型组大鼠MDA较空白对照组升高(P ＜0.05)，SOD 较空白对照组降低(P ＜0.05)，说明造模成功。硝苯地平片组、脑心通胶囊组、心脑宁片组大鼠MDA均较模型组降低(P＜0.05)，SOD均较模型组升高(P＜0.05)。心脑宁片大剂量组降低MDA、升高SOD作用更明显(P ＜0.05)。

3 讨论

心脑宁片是根据中医理论和现代药理研究成果拟定的院内协定处方。方中以人参为君药，调中，止消渴，通血脉，破坚疾，令人不忘，以其主补五脏，安精神，定魂魄;当归为臣药，活血养血;川芎为佐药，其性善降结气，以走肝经，气中之血药，通行十二经，具有理气活血化瘀的作用;黄芪为使药，补中益气。四药合用，活血化瘀益气，达到扶正祛邪之目的。本制剂还具有扩张冠状动脉、改善心肌供血和心肌代谢及缩小梗死面积的作用，而且还具有增强心肌收缩力和改善微循环、产生抗血栓和溶血栓作用。

CK通常存在于动物的心脏、肌肉及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、三磷酸腺苷(ATP)再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。心肌梗死发生时，CK水平迅速提高。LDH能催化丙酮酸与乳酸之间的氧化还原反应，属于氢转移酶，LDH活性增强，有助于清除氧自由基，减少心肌组织的缺血缺氧损伤，用药组LDH活性增强，说明抗心肌缺血功能增强。MDA是膜脂过氧化的终产物之一，其含量高低可以作为考察细胞受到胁迫严重程度的指标之一，它的主要伤害是导致膜脂过氧化，损伤生物膜结构，主要是细胞质膜，使得细胞膜结构和功能上受到损伤，改变膜的通透性，从而影响一系列生理生化反应的正常进行，还会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。测定CK、LDH、MDA、SOD可反映心肌缺血后机体清除自由基的能力和能量代谢情况。本实验研究结果提示，心脑宁片有显著改善心肌缺血的作用，为临床应用提供了依据。

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