活血调经丸质量标准研究

郭强

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

中药工业

活血调经丸质量标准研究

郭强*

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

目的：建立活血调经丸质量标准。方法：采用薄层色谱方法进行定性鉴别，运用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量。结果：确立了制剂中延胡索的鉴别方法。通过方法学系统考察，建立了丹皮酚的含量测定方法，丹皮酚的线性范围为0.112～0.896 μg，回归方程Y=32 154X-15 567(r=0.999 8)，平均加样回收率为100.35%，RSD=1.42%(n=6)。结论：建立的鉴别和含量测定方法简便、准确、重复性好，适用于该制剂的质量控制。

活血调经丸；延胡索；丹皮酚；高效液相色谱

活血调经丸收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第二册，由延胡索、黄芩、牡丹皮、熟地黄、陈皮、川芎等19味中药组成，具有活血理气、行瘀调经之功效。用于血瘀气滞、月经不调等症[1]。原质量标准只有显微鉴别项，无含量测定项，尚不能充分反映产品的内在质量。延胡索是活血调经丸的主要药味，具有活血，行气，止痛的功能[2]，延胡索乙素是延胡索的主要药理活性成分，因此选定将延胡索对照药材和延胡索乙素作为本品鉴别的指标。牡丹皮是活血调经丸的主要药味，具有清热凉血，活血化瘀的功能[2]，现代药理研究证明，牡丹皮还具有抗过敏、抗炎、抗肿瘤、镇痛、镇静、降压、催眠、免疫调节以及抗内毒素和解热等作用[3-8]，丹皮酚是牡丹皮的主要药理活性成分，药理实验表明丹皮酚具有明显的抗炎作用[9]，《中国药典》也是将丹皮酚作为牡丹皮含量测定的指标，因此选定牡丹皮的丹皮酚作为含量测定的检测指标。笔者通过实验研究建立了延胡索薄层色谱鉴别及丹皮酚的含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters2695高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、Waters2487紫外检测器)；安捷伦1100高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、VWD紫外检测器)；KQ-300型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1.2 试药

活血调经丸(河南禹州市药王制药有限公司，每袋装9 g，批号：071012，071013，071014，071015，071016，071101，071102，071103，071104，071105)；延胡索乙素(中国食品药品检定研究院，批号：110726-200610)；延胡索对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120928-200604)；丹皮酚(中国食品药品检定研究院，批号：110708-200505，供含量测定用)；甲醇(德国Merck公司)为色谱醇，水为超纯水，其余溶剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 延胡索的薄层色谱鉴别[2]

取本品9 g，研细，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含延胡索的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3 min后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。对照品Rf值为0.5，见图1。

1.缺延胡索阴性对照品 2.延胡索乙素对照品 3.延胡索对照药材 4～6.供试品图1 活血调经丸中延胡索及对照品TLC图

2.2 丹皮酚的含量测定[2]

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1.0 g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率300 W、频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按处方取不含牡丹皮的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照制剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件 用十八烷基硅烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(50∶50)为流动相，检测波长为274 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，进样量10 μL，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5 000。

2.2.5 阴性干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪。结果表明，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照色谱中在与对照品色谱相应位置上则未出现明显色谱峰，表明在该HPLC测定条件下，丹皮酚的测定无明显干扰，见图2。

A.丹皮酚对照品 B.供试品 C.缺牡丹皮的阴性对照品 1.丹皮酚图2 活血调经丸及对照品HPLC图

2.2.6 线性关系考察 精密取丹皮酚对照品，分别制成质量浓度为11.2，22.4，44.8，67.2，89.6 μg·mL-1的样品，进样量10 μL，测定峰面积，将样品质量浓度与峰面积进行线性回归处理，得线性方程为Y=32 154X-15 567，r=0.999 8，表明丹皮酚在0.112～0.896 μg呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积积分值，结果RSD=1.64%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取本品供试品溶液(071012)10 μL，分别在0，1，3，6，9，12，24 h注入液相色谱仪中，测定丹皮酚峰面积，结果RSD=0.7%，表明本品在24 h内稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批号样品(071012)6份，按供试品溶液制备方法制备6份供试液，分别测定丹皮酚含量，结果平均质量分数为0.77 mg·g-1，RSD=0.8%，表明样品的重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 取本品已知含量的样品(071012)6份，每份约0.5 g，精密加入丹皮酚对照品溶液(质量浓度：7.23 μg·mL-1，配制方法：精密量取丹皮酚对照品9.04 mg，加入甲醇溶解并定容至50 mL，精密量取20 mL置500 mL量瓶中并定容至刻度，即得)50 mL，按上述含量测定方法进行测定，结果见表1。

表1 活血调经丸中丹皮酚回收率测定

注：丹皮酚对照品加入量均为361.264 μg

2.2.11 样品测定 取10批样品，按2.2.1供试品溶液制备方法制成供试品溶液，注入液相色谱仪，按2.2.4的色谱条件进样并按外标一点法测定丹皮酚质量分数，10批样品测定结果见表2。

根据表2结果，10批样品中丹皮酚质量分数测定结果的平均值为0.78 mg·g-1，按结果平均值的80%作为含量测定的指标，暂定本品含牡丹皮以丹皮酚(C9H10O3)计，每1 g不得少于0.62 mg。

表2 活血调经丸中丹皮酚的测定

3 讨论

3.1 薄层鉴别方法选定过程

薄层色谱研究中，最初选定对当归、川芎、赤芍进行鉴别研究，结果供试品在与当归、川芎、赤芍对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点，但是阴性对照样品色谱在相应位置处有干扰。对黄芩也同时进行了薄层色谱研究，选择用甲醇或丙酮直接提取点样展开后，发现斑点背景干扰大，黄芩主斑点被背景覆盖，且阴性也有干扰，故没有增加黄芩的鉴别项。

3.2 含量测定方法的选择

参照相关文献，丹皮酚含量测定的方法主要有高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)[10-11]、气相色谱法[12]、毛细管电泳法[13]、红外光谱[14]和超微电极快速扫描法[15]等，由于HPLC-UV具有仪器设备廉价易得、操作简单及应用广泛等特点，因此实验使用HPLC-UV作为丹皮酚含量测定的方法，方法简便准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。

3.3 含量测定提取方法选择

含量测定中，对供试液提取选用了甲醇、70%甲醇、乙醇、95%乙醇4种溶剂，结果在超声时间相同的情况下，用甲醇提取所得结果最高，参照《中国药典》2010年版一部牡丹皮含量测定项下方法[2]，选用甲醇作为提取溶剂。提取方法比较了超声提取和回流提取，结果接近，因超声相对简单易操作，且节省能源，故选用超声提取。加入甲醇量比较了25，50，100 mL，超声处理时间比较了15，30，45 min，结果加入甲醇50 mL、超声处理30 min所得含量最高，故选用加入甲醇50 mL，超声处理30 min作为本品的提取方法。

[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第二册.1990：184.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：130-131，160-161.

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StudiesonQualityStandardofHuoxueTiaojingPills

Guo Qiang

(HenanInstituteforFoodandDrugControl，Zhengzhou450003，China)

Objective：To establish the quality standard of Huoxue Tiaojing Pills.Methods：The thin layer chromatography (TLC) was adopted for qualitative identification，paeonol was detected by HPLC.Results：The identifying method ofCorydalisyanhusuowas established.The determination method for the content of paeonol was established.The calibration curve of paeonol was liner in the range of 0.112-0.896 μg.The regression equation wasY=32154X-15567(r=0.999 8).The average recovery was 100.35% and RSD was 1.42%(n=6).Conclusion：The method is simple，accurate and reproducible.It can be used for the quality control of Huoxue Tiaojing Pills.

Huoxue Tiaojing Pills；Corydalisyanhusuo；Paeonol；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.08.011

2014-01-08)

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郭强，主管药师，研究方向：药品检验及药品质量标准；E-mail：35451981@qq.com