p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应中的作用研究

郭海峰，李华洋，李铁炅

（牡丹江红旗医院 内一科，黑龙江 牡丹江 157011）

p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应中的作用研究

郭海峰，李华洋，李铁炅

（牡丹江红旗医院 内一科，黑龙江 牡丹江 157011）

目的研究重症胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表达量，探讨p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应的作用。方法选取2012年1月～2013年12月牡丹江红旗医院收治的48例重症胰腺炎患者作为实验组，同期在本院进行体检的48例健康人为对照组。采用荧光实时定量PCR检测2组受试者p38 MAPK的mRNA表达；Western Blot检测p38 MAPK蛋白及P-p38 MAPK蛋白的表达。结果RT-PCR结果显示实验组重症胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表达量明显高于对照组48例健康体检者的p38 MAPK基因表达量，差异有统计学意义（P＜0.05）；Western结果表明实验组重症胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表达量均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论重症胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白表达量均明显升高，表明p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应可能扮演重要角色。

p38丝裂原活化蛋白激酶；重症胰腺炎；炎症反应

1.2 实验材料 肝素钠购自成都市海通药业有限公司；胎牛血清购自上海伟进生物科技有限公司；Trizol试剂购自杭州新景生物试剂开发有限公司；p38 MAPK多克隆抗体和兔抗人P-p38 MAPK多克隆抗体均购自上海荣圣生物科技有限公司。主要仪器为Mx3005P荧光实时定量PCR仪（卡尤迪生物科技有限公司）。

1.3 实验方法 实验组和对照组受试者均在空腹状态下采集静脉血5mL，肝素抗凝，并在采集的静脉血液中加入含胎牛血清的 PBS溶液，2000 r／min离心 20 min后取核细胞层得PBMC。采用Trizol试剂提取分离得到的PBMC中的总mRNA，利用荧光实时定量PCR逆转录合成cDNA，通过计算增殖的cDNA含量测定p38 MAPK mRNA表达的量。

采用蛋白质印迹（Western Blot）检测p38 MAPK蛋白表达的量及P-p38 MAPK蛋白表达的量。用细胞裂解液将分离得到的PBMC充分裂解，将裂解产物在12000 r／min离心，收集上清液，应用BCA法测定蛋白总量。取适量蛋白样品，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白表达，利用灰度比值进行计算。

1.4 统计学方法 计数资料的检验采用率表示，行χ2检验，正态计量资料的检验采用“x±s”表示，行 t检验，以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组受试者p38 MAPK基因表达对比 2组受试者p38 MAPK基因的表达结果见图1。实验组重症胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表达量明显高于对照组，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

图1 荧光实时定量PCR检测2组p38 MAPK基因的表达Fig.1 The determination of p38 MAPK gene by RT-PCR

2.2 2组受试者p38 MAPK蛋白表达对比 2组受试者p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表达结果见图2。实验组重症胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白的表达量均明显高于对照组，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05）

图2 Western Blot检测2组p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表达的量Fig.2 The determination of p38 MAPK and P-p38 MAPK by Western Blot

3 讨论

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路能够传递细胞内外的信号，该信号通路广泛存在于真核细胞。研究表明MAPK能够参与细胞增殖、分化及炎症反应的信号转导及调控，在重症胰腺炎炎症反应起着重要的作用［10-11］。p38 MAPK是细胞内信号转导的重要枢纽，参与各种生理机能的调控，有研究表明p38 MAPK能够调节炎症因子的转导及调控；在重症胰腺炎炎症反应起到重要作用［12］。本研究通过比较重症胰腺炎患者和健康体检者p38MAPK基因和蛋白表达的量，研究p38MAPK在重症胰腺炎炎症反应的作用。

本研究结果表明2组受试者性别、年龄等一般资料差异无统计学意义。实验组48例重症胰腺炎患者p38 MAPK基因的表达量平均为0.42±0.10，明显高于对照组的0.31±0.06，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05），这与文献报道的重症胰腺炎患者的p38 MAPK基因表达升高结果相符［13］；实验组48例重症胰腺炎患者p38 MAPK蛋白的表达量平均为0.59±0.15，明显高于对照组的0.44±0.11，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；实验组48例重症胰腺炎患者P-p38 MAPK蛋白的表达量平均为0.48±0.12，明显高于对照组的0.11±0.03，2组比较差异有统计学意义（P＜0.05），这与文献报道重症胰腺炎大鼠模型p38 MAPK蛋白及磷酸化P-p38 MAPK蛋白表达量升高等结果相符［14-15］。以上结果表明，p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应中起到重要作用。重症胰腺炎患者的p38 MAPK基因表达量、p38 MAPK蛋白表达量以及磷酸化P-p38 MAPK蛋白的表达量较健康人明显升高，因此抑制p38 MAPK的活性，至少能够在一定程度上抑制不断放大的胰腺炎炎症反应，减少促炎因子的释放，是早期发现和控制胰腺炎的重要途径。

综上所述，重症胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表达量均明显升高，表明p38 MAPK在重症胰腺炎炎症反应可能起重要作用。

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（编校：吴茜）

Effects of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis

GUO Hai-feng，LIHua-yang，LITie-ling
（First Department of Medical，Mudanjiang Red Flag Hospital，Mudanjiang 157011，China）

ObjectiveTo investigate the expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein，and explore the effect of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis.Methods48 cases with severe acute pancreatitis were chosen as research group，and another 48 healthy cases as control group.The expression of p38 MAPK gene were investigated by RT-PCR，and the expression of p38 MAPK and P-p38 MAPK protein were investigated by western blot.ResultsThe expression of p38 MAPKmRNA，p38 MAPK protein and P-p38 MAPK protein in research group were higher than that in control group，the differenceswere all statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein were significantly increased in patients with severe acute pancreatitis，which showed that p38 MAPK played an important role in inflammation reaction.

p38 MAPK；severe acute pancreatitis；inflammation reaction

R446.1

A

1005－1678（2014）03－0019－03

临床重症胰腺炎具有发病迅速，病情急等特点，且重症胰腺炎早期合并有肺水肿等，表现为急性肺损伤［1-4］。其主要原因为急性胰腺炎时炎症介质和炎症反应相关的细胞因子过量释放，损坏了肺组织毛细血管的屏障，从而引起全身炎症反应［5-6］。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）是重症胰腺炎炎症反应时相关炎症介质和细胞因子信号转导的主要通路，近年来在临床上受到广泛关注［7-9］。本研究通过对比重症胰腺炎患者和健康体检者之间的p-38MAPK基因和相关蛋白的表达量，探索p38MAPK在重症胰腺炎炎症反应的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月～2013年12月间牡丹江红旗医院收治的重症胰腺炎患者48例，年龄26～55岁，平均（42.1±10.1）岁，其中男性患者26例，女性患者22例；选取同期在本院进行体检的健康人48例，年龄25～55岁，平均（41.8±10.2）岁，其中男性25例，女性23例。2组受试者均不合并慢性疾病，在性别、年龄等一般资料上比较差异无统计学意义。所有受试者均签署知情同意书配合实验。本实验得到医院伦理委员批准。

黑龙江省自然科学基金项目（D2007-103）

郭海峰，男，博士，副主任医师，研究方向：重症胰腺炎，E-mail：13555006398＠163.com。