逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆及神经递质的影响

2014-09-12王虎平邢喜平张雯娟吴红彦

中国老年学杂志 2014年9期

王虎平邢喜平张雯娟吴红彦

(甘肃中医学院基础医学院甘肃省中药药理与毒理学重点实验室甘肃省中药新产品创新工程实验室，甘肃兰州 730000)

现代医学认为，阿尔茨海默病(AD)发病可能与基因突变、神经递质改变、免疫功能紊乱、神经生长因子缺失等诸多因素有关，相应的治疗多为胆碱酯酶抑制剂、神经营养因子、兴奋性氨基酸等对症给药，不能从根本上解除患者的病苦。中医学认为，AD总属本虚标实，虚责之于年老体弱、精亏髓空、脑失所养；实责之于气滞血瘀、痰浊内阻、蒙蔽清窍，多以补益心肾，益髓填精，祛浊化痰，开窍醒神为治。本课题组认为，肝主疏泄而畅情志，又主藏血而养神魂，亦主筋而司运动，这恰恰与AD情志及行为的失常密切相关，因此，我们提出了从肝论治AD的科研假说并以调肝名方逍遥散开展相关干预实验研究并取得了一定的进展〔1～4〕。本研究以逍遥散干预氢溴酸东莨菪碱致AD小鼠模型，探讨逍遥散防治AD的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1主要材料 Y型水迷宫由甘肃中医学院基础医学实验中心自制；逍遥散组成各生药均购于甘肃中医学院附属医院；氢溴酸东莨菪碱注射液由上海禾丰制药有限公司提供，批号：100101；胆碱乙酰转移酶(ChAT)试剂盒、乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒、单胺氧化酶(MAO)试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测试盒均为南京建成生物化学试剂有限公司提供，批号：20100522。SPF级KM小鼠50只，体重(20±2)g，雌、雄各半，由甘肃中医学院科研实验动物中心提供，合格证号：SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2方法

1.2.1动物分组与给药 SPF级KM小鼠50只，随机分为空白组、模型组、逍遥散低、中、高剂量组，每组10只。空白组与模型组小鼠每天灌胃生理盐水0.2 ml/10 g，逍遥散低、中、高剂量组小鼠每天灌胃对应药物水煎液0.2 ml/10 g。逍遥散方中各药的剂量均按照2005版《中华人民共和国药典》中逍遥丸〔5〕剂量换算得到，以药典中逍遥散原方剂量作为本实验中剂量，原方1/2剂量为低剂量，原方2倍剂量为高剂量。以人与小鼠体表面积体重比换算得到实验剂量，即逍遥散低、中、高剂量组小鼠每天灌胃生药量分别为1.243，2.485，4.970 g/kg。连续灌胃给药10 d。

1.2.2模型复制给药第6、8、10天，除空白组小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理盐水0.2 ml/10 g外，其余组小鼠分别于灌胃1 h后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱0.02 mg/10 g复制AD模型。

1.2.3Y型水迷宫实验给药第6、8天，各组小鼠分别于腹腔注射20 min后使用Y型水迷宫进行学习能力训练；给药第10天，各组小鼠分别于腹腔注射20 min后进行记忆能力测试。水迷宫实验中，小鼠从入水臂直接游至安全臂停靠台为正确，进入另一臂为错误。学习能力以达到连续9次正确所需的次数为指标，超过30次计为30，每次达到安全台所需的时间为潜伏时间；记忆能力以15次中正确的次数为指标，并记录每次的潜伏时间〔6〕。

1.2.4脑组织匀浆AchE、ChAT及MAO活性的测定第10天记忆能力测试结束后，处死动物，迅速取出脑组织，以生理盐水制成10%的脑组织匀浆，用低温离心机3 000 r/min离心15 min，吸取上清液，按试剂盒要求测定小鼠脑组织匀浆ChAT、AchE及MAO活性。

1.3统计学分析采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析。

2 结果

2.1逍遥散对AD模型小鼠学习能力及学习潜伏时间的影响与空白组相比，模型组小鼠学习能力低下、潜伏时间较长(P<0.01)。与模型组相比，逍遥散各剂量组均能提高小鼠学习能力、降低其潜伏时间(P<0.01或P<0.05)，但以高剂量组最为明显，与低、中剂量组相比有显著性差异(P<0.05)。见表1。

2.2逍遥散对AD模型小鼠记忆能力及记忆潜伏时间的影响与空白组相比，模型组小鼠记忆能力低下、潜伏时间较长(P<0.01)。与模型组相比，逍遥散各剂量组均能提高小鼠记忆能力、降低潜伏时间(P<0.01或P<0.05)，在数值上以高剂量组最明显，但与低、中剂量组相比无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 逍遥散对AD模型小鼠学习能力及学习潜伏时间的影响

2.3逍遥散对AD模型小鼠脑组织ChAT、AchE及MAO活性的影响与空白组相比，模型组小鼠脑组织ChAT活性降低，AchE及MAO活性增高(P<0.01)。与模型组相比，逍遥散各剂量组均能提高小鼠脑组织ChAT活性、降低AchE及MAO活性(P<0.01或P<0.05)，但以高剂量组最为明显，与低、中剂量组相比有显著性差异(P<0.05)。见表3。

表2 逍遥散对AD模型小鼠记忆能力及记忆潜伏时间的影响

表3 逍遥散对AD模型小鼠脑组织匀浆ChAT 、AchE及MAO活性的影响

3 讨论

经云：“肝者，将军之官，谋虑出焉” (《素问·灵兰秘典论》)，“肝者，罢极之本，魂之居也” (《素问·六节藏象论》)，性喜调达主疏泄，藏血而主魂，体阴而用阳，为神魂之居，其华在筋，主司运动，为行为之主，这恰恰与AD的主要表现即精神与行为失常密切相关。据此，我们提出了AD从肝论治的假说并确立了以“调肝”为中心的治法开展相关实验研究。

逍遥散以调肝为核心，以疏肝、养血、健脾为基础。方中柴胡、薄荷辛散行走，疏肝理气，调气机，畅情志，启清窍，醒脑神，悦神魂，怡精神；当归、白芍阴柔滋补，益阴养血，补阴血，藏肝魂，柔肝体，舒筋脉，又可补肝体，助肝用，协柴、薄疏肝畅情，还可养血补精，填髓益智；白术、茯苓、煨姜、甘草直入中焦，投脾所好，去脾所恶，健运脾土，陪补后天之本，滋生气血之源，既可补阴血，强肝体，又可健中土，抑肝木，还可泄浊毒，解蒙蔽。全方虽由疏肝、养血、健脾配伍组成，但三组密切协作，互为促进，气血同调，体用并治，补泻兼施。如此，肝疏气行则情畅神安，血充精足则筋柔神怡，邪去蔽解则脑醒神清，具有很好的防治AD的理论基础。药理研究表明，逍遥散具有抗自由基氧化、营养保护神经元、调节免疫、提高多巴胺等神经受体含量、抗焦虑及抗抑郁、雌激素样等作用〔7～12〕，体现了现代医学治疗AD的多种手段，具有防治AD的药理学基础。本研究表明，逍遥散可提高AD模型小鼠学习记忆能力，降低潜伏时间，可提高脑组织匀浆ChAT活性，降低AchE及MAO活性，能较好改善AD模型小鼠学习记忆能力及神经递质活性，对AD具有较好的防治作用。至于其深层机制有待进一步探讨。

4 参考文献

1王虎平，吴红彦.逍遥散及其配伍组方对阿尔茨海默病小鼠学习记忆的影响〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(18)：4459-61.

2吴红彦，王虎平，王彩霞.黑逍遥散对老年性痴呆的防治作用及其机制研究〔J〕.时珍国医国药，2011;22(4)：912-3.

3吴红彦，王虎平.以肝脾论治老年性痴呆及逍遥散对老年痴呆模型小鼠学习记忆能力、中枢胆碱能神经元活性的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2010;16(5)：168-70.

4吴红彦，王虎平.逍遥散及其拆方对痴呆模型小鼠学习记忆能力及抗氧化能力的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2009;15(10)：102-4.

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6陈勤.抗衰老研究实验方法学〔M〕.北京：中国医药科技出版社，1996:94.

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9赵益业.肝郁症的免疫学探讨〔J〕.山东中医药大报，1997;21(1)：28-32.

10吴春福，李逢利，刘雯，等.逍遥散对大鼠脑中单胺类神经递质含量的影响〔J〕.中药药理与临床，1993；9(2)：8-10.

11王静怡，石玉瑁，查鹏洲，等.逍遥散的药理研究〔J〕.中国医院药学志，2002；22(8)：489-90.