阿托伐他汀联合缬沙坦协同治疗对糖尿病心肌病大鼠心脏功能的影响

何煦芳 李 勇

(武警海南省边防总队医院，海南 海口 570208)

糖尿病(DM)是临床常见的代谢性疾病，可在血糖水平持续升高的基础上导致糖尿病心肌病(DC)，临床主要表现为心肌舒张以及收缩功能障碍，晚期可出现心力衰竭〔1〕。目前认为，高血糖所引起的血脂水平升高以及心肌重构是DM患者发生心肌病变的重要环节，因此，在治疗时应同时兼顾降低血脂和延缓心肌重构〔2〕。本实验采用阿托伐他汀联合缬沙坦协同治疗DC大鼠的方法，分析阿托伐他汀联合缬沙坦协同治疗对DC大鼠心脏功能的影响。

1 材料与方法

1.1材料 选择雄性SD大鼠60只，200～250 g，8～10周龄，购买于大学动物实验中心(合格证号：第211107号)。在动物实验中心的动物房饲养，温度22℃～24℃，湿度60%～70%，自然昼夜节律光照，自由获得食物和饮水。主要试剂：链脲佐菌素(sigma公司,So132021G,015k1279) ；血糖试纸(美国雅培公司)；阿托伐他汀(辉瑞制药有限公司)，缬沙坦(北京诺华制药有限公司)，手术器械及常规耗材均由动物实验中心提供。

1.2方法

1.2.1分组方法 采用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组、DC对照组、阿托伐他汀干预组、缬沙坦干预组和联合干预组，每组12只。DC对照组、阿托伐他汀干预组、缬沙坦干预组和联合干预组按照模型建立方法进行处理，并给予相应的药物干预；正常对照组按照常规方法饲养。

1.2.2模型建立方法 选取70只雄性SD大鼠适应性喂养3 d，均为动物状态良好级。随机抽取12只作为正常对照组。其余63只一次性腹腔注射链脲佐菌素60 mg·kg-1·d-1，诱导DM，3 d后检测大鼠尿糖、血糖，尿糖阳性、血糖≥16.7 mmol/L作为DM模型。定期监测体重、血糖，4 w后取4只DM大鼠心肌组织进行电镜检查，检测到肌丝断裂、线粒体肿胀、大量糖原颗粒沉积、嵴断裂，则证明DC大鼠模型建模成功。3个月后共成模48只，死亡大鼠10只。

1.2.3给药方法 模型建立成功后，DC对照组给予常规饲养，阿托伐他汀干预组给予阿托伐他汀50 mg·kg-1·d-1灌胃，缬沙坦干预组给予缬沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃，联合干预组给予阿托伐他汀50 mg·kg-1·d-1、缬沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃。连续干预8 w。

1.3观察指标

1.3.1血脂代谢指标 药物处理完成后，处死老鼠，断头取血，静置1 h后离心10 min，取血清检测血脂代谢情况，包括三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白(ApoA)-Ⅰ、ApoB。

1.3.2心功能指标 药物处理完成后，10%戊巴比妥腹腔麻醉后，做气管切开、气管插管，连接动物呼吸机进行辅助呼吸，打开胸腔将心导管插入左心室，连接生物机能实验信号采集处理系统检测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVDEP)、左心室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压力最大下降速率(-dp/dtmax)。

1.3.3基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白含量及活性变化 采用链霉合素-生物素复合物(SABC)免疫组化法检测DC大鼠心肌组织中MMP-2表达：取心肌组织制成冰冻切片，经灭活、冲洗、加MMP-2与生物素化兔抗羊IgG漂洗、加入SABC试剂，使用二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒，于Olympus BX50光学显微镜观察，采用IBAS2.5图像系统作半定量分析；采用明胶酶谱法检测DC病大鼠心肌MMP-2蛋白活性：取心肌组织25 mg，冲洗后剪碎，加入蛋白质匀浆缓冲液2 ml，离心取上清液电泳进行图像分析，采用光密度值(OD)计算MMP-2活性，取3次平均值。

2 结 果

2.1五组实验大鼠血脂水平比较 DM对照组的HDL、ApoA-Ⅰ水平低于正常对照组，TG、TC、LDL、ApoB水平高于正常对照组(均P<0.05)；阿托伐他汀干预组、缬沙坦干预组和联合干预组的HDL、ApoA-Ⅰ水平高于DC对照组，TG、TC、LDL、ApoB水平低于DC对照组(均P<0.05)；联合干预组的HDL、ApoA-Ⅰ水平高于阿托伐他汀干预组和缬沙坦干预组，TG、TC、LDL、ApoB水平低于阿托伐他汀干预组和缬沙坦干预组(P<0.05)。见表1。

2.2五组实验大鼠心功能指标比较 DC对照组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax低于正常对照组，LVDEP高于正常对照组(P<0.05)；阿托伐他汀干预组、缬沙坦干预组和联合干预组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于DC对照组，LVDEP低于DC对照组(P<0.05)；联合干预组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于阿托伐他汀干预组和缬沙坦干预组，LVDEP低于阿托伐他汀干预组和缬沙坦干预组(P<0.05)。见表2。

2.3MMP-2蛋白表达 MMP-2蛋白主要表达在心肌细胞、细胞间质、少量血管内皮细胞中，正常对照组显示心肌细胞为斜行纵向排列，染色部位与胞质中可见棕黄色阳性颗粒；DC组可见较多MMP-2蛋白阳性表达，阿托伐他汀联合缬沙坦治疗组MMP-2表达明显较高。见图1。

2.4五组实验大鼠MMP-2蛋白活性比较 与正常对照组(0.153±0.02)比较，DC对照组MMP-2活性明显增强；与DC对照组比较，三个治疗组MMP-2活性明显减弱(阿托伐他汀干预组：0.198±0.001，缬沙坦干预组：0.182±0.03，联合干预组：0.174±0.01)；三个治疗组比较，阿托伐他汀联合缬沙坦组MMP-2活性明显减弱(P<0.05)。

表1 五组实验大鼠的血脂水平比较±s)

表2 五组实验大鼠心功能指标比较±s)

图1 各组MMP-2蛋白表达(×200)

3 讨 论

2型糖尿病是临床上最为常见的慢性代谢性疾病，会引起各类血管性并发症的发生。DM血管相关并发症的发生机制极为复杂，包括物质代谢紊乱、内皮功能受损、粥样斑块形成、局部炎症反应等均参与其中〔3〕。其中，血糖水平持续升高所引起的脂质代谢紊乱是最被认可的理论之一，同时也可较好地解释其余机制。DM患者多合并不同程度的脂质代谢紊乱，高脂血症的存在可导致动脉内膜脂质沉积、内皮功能受损，若无法得到及时的干预措施，会逐步发展为动脉粥样硬化，并引起心脏、肾脏、神经系统等靶器官功能的损害〔4〕。

在临床治疗的实践中，DM引起的心血管系统疾病十分常见，一方面，血液内的高糖状态可直接损害心肌细胞，并诱发心肌发生重构，影响心脏的舒缩功能；另一方面，由高糖所引起的血脂水平升高可导致冠脉内脂质沉积、管腔狭窄，进而引起心肌缺血性损害〔5〕。若无法采取有效的治疗措施，心肌重构和心肌缺血会逐步加重，并引起严重并发症的发生。针对DC病变的特点，在处理该病时应兼顾血脂水平升高和心肌重构，同时降低血脂水平、延缓心肌重构，预期能取得积极的临床价值〔6〕。

缬沙坦是一类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ACEI)，通过阻断血管紧张素Ⅱ与其受体(血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ)结合来抑制其血管收缩、促进醛固酮释放的作用，进而降低外周阻力、减少水钠潴留、改善心脏微循环、延缓心肌重构〔7，8〕。阿托伐他汀属于羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，通过抑制HMG-CoA还原酶的活性来阻断内源性的胆固醇合成，并改善血脂代谢情况〔9〕。

TG、TC水平可以反映整体的脂质代谢情况；ApoB是LDL的主要成分，在体内促进脂质在动脉内膜的沉积过程，属于心肌病变发生的危险因素；ApoA-Ⅰ是HDL的主要成分，在体内促进脂质代谢过程，属于心肌病变发生的保护因素〔10〕。本实验研究结果表明，阿托伐他汀联合缬沙坦能够更为有效地改善血脂代谢情况。

进一步研究发现，在建立DC模型后，大鼠的心功能发生了明显的损伤，心室收缩能力减弱、舒张末期残余血量增多。通过单独或联合给予阿托伐他汀、缬沙坦，可以明显改善大鼠的心脏功能。这就可以反映出阿托伐他汀联合缬沙坦能更为有效

地改善心脏功能，符丽娟等〔11〕报道坎地沙坦可显著改善心肌线粒体超微结构，达到保护糖尿病心肌结构的目的。心肌重构是DM心脏病诱发心力衰竭的重要诱因，MMP能降解细胞外基质成分，MMP-2可降解明胶层连蛋白、纤维黏连蛋白，也可启动纤维胶原裂解过程〔12〕。本研究提示MMP-2表达可能与DC的发生发展有关，给予阿托伐他汀、缬沙坦单独或联合治疗后，MMP-2表达及活性均明显降低，提示这两种药物均可抑制MMP-2的表达与活性，保护心脏功能不受破坏。

4 参考文献

1Kreuer J,Watson L,Herdegen T,etal. Effects of HMG-CoA reductase inhibition on PDGF and angiotensin Ⅱ-mediated signal transduction:suppression of c-Jun and c-fos in human smooth muscle cells in vitro〔J〕. Eur J Med Res ,1994；4(4):135-43.

2张 雷，董志恒. 血栓调节蛋白在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(15)：3229-32.

3徐立群，李 奎.辛伐他汀强化治疗对急性冠脉综合征患者炎症状态及氧化应激水平的影响〔J〕.中国药房，2012；23(20)：1881-3.

4赵新杰，普永军，宋 毅.阿托伐他汀联合氯吡格雷治疗老年心绞痛45例〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(9)：1965-6.

5Castoldi G,di Gioia CR,Bombardi C,etal.Prevention of myocardial fibrosis by N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline in diabetic rats〔J〕. Clin Sci(Lond),2009；118(3):211-20

6邱晓晓，李剑敏，赵 竞，等. ACEI对Calpain介导的糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及心功能的影响〔J〕.中国应用生理学杂志,2013；29(4)：359-64.

7王新廷，张 勉，郭海方，等. 阿伐他汀对亚糖尿病大鼠血糖的影响及其机制〔J〕. 中国药科大学学报，2012；43(5):453-9.

8Schieffer B,Wirger A,Meybrunn M,etal. Comparative effects of chronic angiotensinconverting enzyme inhibition and angiotensin Ⅱ type 1 receptor blockade on cardiac remodeling after myocardial infarction in the rat〔J〕. Circulation,1994；89(5):2273-82.

9谭会斌，傅淑霞，杨 林，等. 缬沙坦联合苯那普利对糖尿病大鼠足细胞损伤的影响及肾脏保护机制的研究〔J〕. 中国中西医结合肾病杂志，2008；9(4)：338-41.

10Dobrucki LW,Kalinowski L,Dobrcuki IT,etal. Statin-stimulated nitric oxide release from endothelium〔J〕. Med Sci Monit,2001；7(4):622-7.

11符丽娟，杨育红，包翠芬，等.坎地沙坦对糖尿病大鼠心肌bcl-2、p53蛋白表达及线粒体超微结构的影响〔J〕. 中国老年学杂志，2010；30(24)：3700-2.

12Flack JM,Hamaty M,Stsffileno BA,etal. Renin-angiotetin-aldosterone-kinin system influences on diabetic vascular disease and cardiomyopathy〔J〕. Miner Electrolyte Metab,1998；23(6):412-22.