炎症性肠病患者肠道菌群变化及其与炎性指标的关系

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月—2014年5月在南方医科大学南方医院治疗的IBD患者65例，均符合2010年世界胃肠病学组织关于IBD的诊疗指南中规定的诊断标准[5]。其中UC患者36例设为UC组，男20例，女16例；年龄35～64岁，平均(42.15±3.48)岁。CD患者29例设为CD组，男14例，女15例；年龄32～54岁，平均(36.37±3.68)岁。再依据病情活动情况将65例IBD患者分为活动组34例，缓解组31例，分组标准: UC患者根据腹泻和便血症状、内镜下黏膜病变及医师评估等因素进行评分，每项0～3分，总分≥2 分为活动期，<2分为缓解期; CD患者依据患者一般情况、腹痛腹泻症状、肠外表现等因素进行CD活动指数(CDAI)评分，≥150 分为活动期，<150分为缓解期。另选取同期健康体检人群30例设为对照组，各组性别、年龄等一般资料无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌群检测：无菌操作获取所有患者自然排出的新鲜粪便，迅速置入厌氧罐内，并立即送至实验室进行培养。准备以下10种细菌的培养基(购自北京拜尔迪生物技术有限公司)：葡萄球菌(SP)、肠杆菌(EMB)、肠球菌(EC)、消化球菌(PS)、拟杆菌(BD)、双歧杆菌(BL)、乳杆菌(LC)、真杆菌(ES)、酵母菌(SB)、小梭菌(SC)。采用日本光冈知足法[6]进行检测：将0.5 g粪便标本置于含有4.5 mL稀释液的安剖瓶中，置旋涡混合器震荡1 min; 另取7只含1.8 mL稀释液的无菌青霉素安剖瓶，从首只瓶中取0.2 mL混悬液至第2只瓶中震荡均匀，依次稀释后将标本接种于培养基上，以47滴/mL的标准滴管由高稀释度向低稀释度滴种，3个稀释度/平板。完成后稍干燥，将平板倒置于37 ℃恒温培养箱内，需氧菌和厌氧菌平板分别于24 h和72 h后观察结果。

1.2.2 炎性指标检测：所有患者取静脉血3 mL，以流式细胞仪检测WBC和PLT计数，以魏氏法检测ESR，以酶联免疫吸附法检测CRP含量。

1.3 观察指标

观察UC和CD组患者肠道菌群含量与对照组之间的差异；活动组和缓解组之间肠道菌群含量及WBC、PLT、ESR和CRP等炎性指标差异；以及菌群含量与炎性指标的相关性。菌群含量均以菌落对数值表示。

2 结果

2.1 UC和CD组患者肠道菌群含量与对照组比较

经统计分析，2组患者EMB、EC、SB均较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01)，UC组CD较对照组显著升高(P<0.05); PS、BD、BL、LC和ES均较对照组显著下降(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 UC和CD组肠道菌群含量与对照组比较±s) lg 10n/g

2.2 活动组和缓解组肠道菌群含量比较

经统计分析，活动组的EMB、ES、SB和SC显著高于缓解组(P<0.05或P<0.01)；BD、BL和LC显著低于缓解组(P<0.05或P<0.01)。见表2。

表2 活动组和缓解组肠道菌群含量比较±s) lg 10n/g

2.3 活动组和缓解组炎性指标比较

经统计分析，活动组WBC、PLT、ESR、CRP均显著高于缓解组，见表3。

表3 活动组和缓解组炎性指标比较±s)

2.4 菌群含量与炎性指标的相关性分析

将WBC、PLT、ESR、CRP分别与10种细菌的数量做pearson相关性分析，结果表明，WBC、PLT和CRP均与EC负相关(P<0.01，r=-0.513，-0.478，-0.681)，ESR与SB正相关(P<0.01，r=0.791)，见图1。

图1 炎性指标与菌群含量相关性分析

3 讨论

近年来IBD在中国的发病率逐步上升[7]，由于病情反复发作，严重影响患者生活质量，且长期用药给患者和家庭带来沉重经济负担。正常人体肠道菌群种类众多，数量巨大，多数学者认为肠道菌群失衡是IBD发病的重要原因，如Zoetendal等[8]研究发现厚壁菌门的数量或多样性减少与IBD发病相关，Ricanek等[9]发现，CD患者肠黏膜中BD门细菌多样性较健康人群显著减少，而变形菌门和厚壁菌门的多样性则显著增加。戎建明等[10]研究表明，IBD患者肠道菌群结构与健康人群有较大差异，存在某些特异性细菌的缺失，且细菌多样性显著下降。实验研究表明，无菌条件下饲养的动物肠道内缺乏共生菌群，即便是具有IBD易感基因或采用其他反复干预，均很难导致这些动物发生IBD[11]，这是肠道菌群紊乱与IBD发病密切相关的重要证据。但也有学者持相反意见，认为肠道菌群紊乱是IBD患者肠道功能受损造成的结果，而非致病因素[12]。本研究检测了IBD患者的10种细菌，除SP外，所有细菌含量均与对照组差异显著(P<0.05或P<0.01)，与上述报道一致。此外，有学者研究发现，活动期和缓解期IBD患者的肠道菌群结构也存在差异[13]，本研究结果亦证实了此点。

国外研究显示，血常规的多项检测，如白细胞和血小板计数、红细胞体积分布宽度等与IBD的病情活动相关[14-15]。国内杨荣萍等[16]研究表明，活动期UC患者的平均血小板体积显著低于缓解期患者和健康人群，而血小板计数显著高于缓解期患者。ESR反映红细胞在一定条件下沉降的速度，机体在急性炎症时产生大量急性反应相物质，从而造成ESR加快。研究[17]表明，IBD活动期患者的ESR显著高于缓解期患者，且与SB含量呈正相关[18]。CRP是机体急性时相反应性蛋白，在发生细菌感染和损伤时其血清表达水平会显著升高。大量研究表明，IBD患者的血清CRP水平显著升高，尤其是活动期患者的表达水平显著高于缓解期，且与病变严重程度正相关[19]，因此CRP是评价IBD疾病活动性的有效指标之一。本研究结果表明，活动组WBC、PLT、ESR、CRP均显著高于缓解组，且WBC和PLT均与EC负相关，ESR与SB正相关，CRP与EC、BL弱负相关，与上述报道基本一致。

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