KIF14过表达与肝细胞肝癌的发生密切相关

李晓娜，韩 雪，杨 涛 (.河北省体育科学研究所普通外科，河北 石家庄 050000；.河北省石家庄市第一医院普通外科，河北 石家庄 0500)

·论著·

KIF14过表达与肝细胞肝癌的发生密切相关

李晓娜1，韩 雪1，杨 涛2
(1.河北省体育科学研究所普通外科，河北 石家庄 050000；2.河北省石家庄市第一医院普通外科，河北 石家庄 050011)

目的探讨KIF14表达与肝细胞肝癌发生的关系。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测50例肝细胞肝癌组织及50例正常肝组织中KIF14的表达。结果与正常肝组织相比，KIF14 mRNA在肝细胞肝癌组织中过表达(P<0.01)。肝细胞肝癌中KIF14 DNA拷贝数也明显高于正常肝组织(P<0.01)。结论KIF14过表达在肝细胞肝癌的发生过程中发挥着重要作用，它也许可以作为肝癌的潜在治疗靶点。

肝肿瘤；驱动蛋白；分子靶向治疗

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.07.006

肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是全世界最常见的内脏肿瘤之一[1]。HCC的治疗包括传统的手术治疗、肝脏移植和分子靶向治疗，但是由于HCC发病机制尚不明确，不能做到对HCC早期诊断、早期治疗，从而不能有效地改善HCC患者的生存质量及生存率。人类驱动蛋白在人类肿瘤的发生过程中发挥着重要作用。深入研究驱动蛋白的具体作用机制和功能可能有利于肿瘤靶向治疗的发展[2-3]。KIF14作为驱动蛋白家族成员[4]，在1q区域扮演着癌基因角色，这可能是KIF14导致了肿瘤发生中基因的不稳定[5-6]。同时KIF14在细胞周期中规律存在，与有丝分裂进程相关。本研究通过检测50例HCC组织与50例正常肝组织中KIF14的表达，探讨KIF14表达与HCC发生的关系。

1 资料与方法

1.1 实验材料：实验标本均来源于2010年10月—2011年12月我院50例手术患者HCC组织，均经术后病理证实，其中男性29例 ，女性21例 ，年龄41～63岁，平均(53.06±6.68)岁；50例正常肝组织取自肝血管瘤患者术后标本，其中男性23例 ，女性27例 ，年龄37～59岁，平均(50.00±6.70)岁。实验标本获得后保存于-80℃冰箱中。所有100例实验标本获取均通过我院伦理审查机构许可并书面征得所有患者同意。2组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 组织RNA分离和实时荧光定量聚合酶链反应(real-timequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR)：根据说明书使用TRIZOL试剂提取总RNA。使用5μg总RNA和SuperScriptⅡ及寡dT执行逆转录。RT-qPCR分析使用FastSYBRGreenMasterMix系统。KIF14引物和GAPDH内参序列如下，KIF14,5′-TGGTGAAATGGCCTGTACAAGT-3′(forward),5′-GGCAACCAGTTAACCCTTTGAG-3′(reverse);GAPDH,5′-GAAATCCCATCACCATCTTC-CAGG-3′(forward),5′-GAGCCCCAGCCTTCTCCATG-3′(reverse)。PCR反应条件如下，95℃ 20s；95℃ 3min；60℃ 30s；使用ABI-7500(应用生物系统)共计40个循环。相对定量方法得到的CT值，通过三联反应测定所有样本的KIF14 和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)。取探测基因的可用三联反应CT平均值，减去GAPDH的CT值，获得ΔCT。KIF14的相对mRNA表达水平应用2-ΔCT方法计算。

1.3 实时荧光定量PCR评价拷贝数：按照制造商的说明，用QIAampDNA迷你工具包 (Qiagen)，从组织中提取DNA。使用TaqMan基因拷贝数检测试剂盒的应用生物系统计算KIF14 拷贝数。使用一套ASXL2(应用生物系统)引物作为参考基因，如Reis-Filho等所述。在每个标本中获得KIF14 到ASXL2的复制比例作为每个试样的KIF14拷贝数。

2 结 果

HCC组织中KIF14mRNA和KIF14DNA拷贝数明显高于正常肝脏组织，差异有统计学意义(P<0.01)，见表 1 。

GroupsKIF14mRNAKIF14DNANormallivertissues0．28±0．160．84±0．43HCCtissues1．81±0．994．77±2．58 t10．78810．625 P0．0000．000

3 讨 论

驱动蛋白超家族成员，在人类多种肿瘤的发生过程中起着重要的作用。KIF14作为其重要成员，在人类肿瘤发生、发展过程中的作用越来越受到人们的重视。本研究结果显示在HCC组织中KIF14 mRNA表达水平及KIF14 DNA拷贝数均显著高于正常肝组织，这表明 KIF14有可能在人类肝细胞肝癌发生过程中扮演着重要角色。

KIF14是胞质分裂和染色体分离的必要条件，同时还具有在细胞分裂中期使染色体对齐的作用[7]，这些均说明KIF14在人类肿瘤发生的过程中具有不可忽视的作用。目前已有研究[6,8-9]发现，KIF14在卵巢癌、视网膜母细胞瘤、乳腺癌、脑胶质瘤等多种肿瘤中表达明显增加，并且认为，KIF14在卵巢癌、肺癌、脑胶质瘤中是一个独立的预后标志和潜在的治疗靶点。本研究中KIF14在HCC中高表达，证明KIF14在HCC的发生发展过程中起重要作用。但是，KIF14在HCC发生过程中的具体作用机制是什么目前还不明确，需要进一步深入研究。

目前KIF14在人类肿瘤发生过程中的具体作用机制及其调控机制还不明确，但KIF14在多种人类肿瘤组织中异常高表达证明其在研究人类肿瘤发生机制中有着重要的意义。并且由于KIF14在HCC组织中特异性的高表达，有可能使其成为HCC早期诊断的生物学标志及新的治疗靶点。

[1] 杨涛,孙轶飞,王立伟，等.KIF14过表达与肝细胞肝癌手术预后密切相关[J].河北医科大学学报,2014,35(3):263-265.

[2] HUSZAR D,THEOCLITOU ME,SKOLNIK J,et al.Kinesin motor proteins as targets for cancer therapy[J].Cancer Metastasis Rev，2009，28(1/2):197-208.

[3] YU Y,FENG YM.The role of kinesin family proteins in tumorigenesis and progression: potential biomarkers and molecular targets for cancer therapy[J].Cancer,2010,116(22):5150-5160.

[4] NOMURA N,NAGASE T,MIYAJIMA N,et al.Prediction of the coding sequences of unidentified human genes Ⅱ.The coding sequences of 40 new genes (KIAA0041-KIAA0080) deduced by analysis of cDNA clones from human cell line KG-1 (supplement) [J].DNA Res,1994,1(5):251-262.

[5] CORSON TW,HUANG A,TSAO MS,et al.KIF14 is a candidate oncogene in the 1q minimal region of genomic gain in multiple cancers[J].Oncogene,2005,24(30):4741-4753.

[6] MADHAVAN J,CORAL K,MALLIKARJUNA K et al.High expression of KIF14 in retinoblastoma: association with older age at diagnosis[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2007,48(11):4901-4906.

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[9] WANG Q,WANG L,LI D,et al.Kinesin family member 14 is a candidate prognostic marker for outcome of glioma patients[J].Cancer Epidemiol,2013,37(1):79-84.

(本文编辑：许卓文)

KIF14EXPRESSIONCLOSELYRELATEDWITHHEPATOCELLULAR
CARCINOMATUMORIGENESIS

LIXiaona1,HANXue1,YANGTao2
(1.DepartmentofGeneralSurgery,theSportsScienceInstituteofHebeiProvince,Shijiazhuang050000,China;2.DepartmentofGeneralSurgery,theFirstHospitalofShijiazhuangCity,HebeiProvince,Shijiazhuang050011,China)

CT:ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsThisstudyexploredthecorrelationbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinomabydeterminingKIF14expressioninHCCtissuesandnormallivertissues.Real-timequantitativepolymerasechainreactionwasappliedtotestKIF14in50casesofHCCtissuesand50casesofnormallivertissues.ResultsComparedwiththenormallivertissues,KIF14mRNAinHCCtissueswasoverexpressed(P<0.01).KIF14DNAcopiesinHCCtissueswerealsosignificantlyhigherthanthoseinnormallivertissues(P<0.01).ConclusionKIF14overexpressionisveryimportantinHCCtumorigenesisandmayserveasapotentialtherapeutictargetforHCC.

liverneoplasms;kinesin;molecuartargetedtherapy

2014-04-02；

2014-05-07

河北省科学技术研究与发展计划项目(132777236)

李晓娜(1979-) 女，满族，吉林吉林人，河北省体育科学研究所主治医师，医学硕士，从事普通外科疾病诊治研究。

R735.7

A

1007-3205(2014)07-0761-02