丹参酮灌注液质量标准研究

卢超　郭文柱　梁剑平

摘要：为了制定丹参酮灌注液质量标准，采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的丹参酮进行定性鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中的隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定。结果表明：TLC定性鉴别专属性强，重现性好；隐丹参酮的线性范围为3.54～17.68 μg/mL，平均回收率为96.86%，RSD值为1.14%；丹参酮ⅡA的线性范围为9.18～45.92 μg/mL，平均回收率为98.16%，RSD值为0.89%。对丹参总酮的定性鉴别、隐丹参酮及丹参酮ⅡA的含量测定可应用于丹参酮灌注液的质量控制。

关键词：丹参酮灌注液；薄层鉴别；含量测定；质量标准

中图分类号： S853.76 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0231-02

收稿日期：2013-10-07

基金项目：国家科技支撑计划（编号：2006BAD04A05-05）。

作者简介：卢超（1989—），男，四川广元人，硕士，主要从事中兽药新制剂研究。E-mail：luc19898@126.com。

通信作者：梁剑平，男，甘肃兰州人，博士，博士生导师，主要从事天然药物化学研究。Tel：（0931）2115286；E-mail：liangjianping100@sina.com。丹参酮灌注液是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所运用环糊精包合技术制备的丹参酮新制剂，是一种运用药物新技术制备出的针对奶牛乳房炎的新型中兽药。环糊精分子包合进入的成分主要为丹参酮类化合物，其中以隐丹参酮和丹参酮ⅡA的临床治疗效果最为显著确切[1]，已经有人对其体外抑菌活性进行了研究。本试验为建立该制剂质量标准，采用薄层色谱法[2]对制剂中主要丹参酮类化合物进行定性鉴别，用高效液相色谱法对隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定，以期为制定制剂质量标准提供依据[3]。

1材料与方法

1.1试验材料

丹参酮灌注液，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所委托河北某公司生产（批号20130722、20130725、20130728）；丹参酮提取物，由笔者所在实验室自行提取（丹参总酮含量41.7%、隐丹参酮含量3.16%、丹参酮ⅡA含量11.57%）；隐丹参酮标准品（批号：110852-200806）、丹参酮ⅡA标准品（批号：110766-200619）购自中国药品生物制品检定所。

1.2仪器与试剂

Waters2695高效液相色谱仪；GOODLOOK-1000型薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；0.22 μm微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；硅胶G板（青岛海洋化工厂）；乙酸乙酯、无水乙醇均为国产分析纯；石油醚（60～90 ℃）、甲醇、乙腈均为色谱纯。

1.3丹参酮薄层鉴定

取丹参酮灌注液40 mL，加无水乙醇40 mL，摇匀，静置12 h，乙酸乙酯反复萃取3次，收集乙酸乙酯层，减压浓缩，加入适量甲醇溶解，定容至10 mL，作为供试品溶液；另取丹参药材0.5 g，加甲醇20 mL，加热回流提取1 h，放冷过滤，滤液蒸干，残渣加热水洗至洗液无色，残渣加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液；另取隐丹参酮对照品与丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；按照薄层色谱法（中国药典2010附录Ⅵ B）试验，各吸取上述4种溶液 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（5 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（253 nm）视检。供试品色谱、对照药材色谱、对照品色谱在相应的位置上显现相同颜色的斑点。

1.4隐丹参酮及丹参酮ⅡA含量测定

1.4.1色谱条件及系统适应性条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.026%磷酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱。检测波长为270 nm，柱温为25 ℃，流速为1.2 mL/min。理论板数按隐丹参酮峰计算，应不低于20 000。

3结论与讨论

丹参酮是从植物丹参中提取出的一类脂溶性化合物[4]，

由于此类化合物水溶性差，已有多种关于提高丹参酮水溶性并进行制剂改造的研究报道，石远等制备了注射用丹参酮ⅡA包合物，该制剂通过包合技术制备出丹参酮水溶性灌注液，以提高药物吸收及生物利用度[5]。目前，研究团队已完成该制剂的制备工作，将对其进行质量控制研究。目前，很多中药新剂型及中药复方制剂都面临着成分复杂、分析难度大、标准品不足的问题。由于丹参酮类化合物标准品只有丹参酮ⅡA及隐丹参酮，本试验也只能对这2种成分进行定性鉴别及定量分析，这2种化合物均为治疗奶牛乳房炎的有效成分。本研究运用薄层色谱法定性鉴别灌注液中主要丹参酮类化合物，结果表明供试品与对照品在相同位置出现斑点，表明方法具有专一性。采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA、隐丹参酮的含量，具有回收率高、分离度好、精密度高、重现性好和阴性无干扰的特点。因此对丹参酮类化合物的定性鉴别及对丹参酮ⅡA、隐丹参酮2种化合物进行含量测定，能达到控制丹参酮灌注液质量的目的，可为其质量标准的制定提供依据。

参考文献：

[1]强喆，李晓明，梁剑平. 丹参酮包合物体外抑菌活性研究[J]. 西北农业学报，2013，22（5）：196-203.

[2]中国药典委员会. 中华人民共和国药典2010版[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]王胜义，齐志明，刘治岐，等. 黄白口服液的质量控制研究[J]. 中国畜牧兽医，2011（12）：226-231.

[4]陈向荣，陆京伯，石汉平. 丹参的药理作用研究新进展[J]. 中国医院药学杂志，2001，21（1）：44-45.

[5]石远，石惠，姜同英，等. 注射用丹参酮ⅡA包合物的制备及性质考察[J]. 沈阳药科大学学报，2008（10）：765-771.endprint

摘要：为了制定丹参酮灌注液质量标准，采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的丹参酮进行定性鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中的隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定。结果表明：TLC定性鉴别专属性强，重现性好；隐丹参酮的线性范围为3.54～17.68 μg/mL，平均回收率为96.86%，RSD值为1.14%；丹参酮ⅡA的线性范围为9.18～45.92 μg/mL，平均回收率为98.16%，RSD值为0.89%。对丹参总酮的定性鉴别、隐丹参酮及丹参酮ⅡA的含量测定可应用于丹参酮灌注液的质量控制。

关键词：丹参酮灌注液；薄层鉴别；含量测定；质量标准

中图分类号： S853.76 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0231-02

收稿日期：2013-10-07

基金项目：国家科技支撑计划（编号：2006BAD04A05-05）。

作者简介：卢超（1989—），男，四川广元人，硕士，主要从事中兽药新制剂研究。E-mail：luc19898@126.com。

通信作者：梁剑平，男，甘肃兰州人，博士，博士生导师，主要从事天然药物化学研究。Tel：（0931）2115286；E-mail：liangjianping100@sina.com。丹参酮灌注液是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所运用环糊精包合技术制备的丹参酮新制剂，是一种运用药物新技术制备出的针对奶牛乳房炎的新型中兽药。环糊精分子包合进入的成分主要为丹参酮类化合物，其中以隐丹参酮和丹参酮ⅡA的临床治疗效果最为显著确切[1]，已经有人对其体外抑菌活性进行了研究。本试验为建立该制剂质量标准，采用薄层色谱法[2]对制剂中主要丹参酮类化合物进行定性鉴别，用高效液相色谱法对隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定，以期为制定制剂质量标准提供依据[3]。

1材料与方法

1.1试验材料

丹参酮灌注液，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所委托河北某公司生产（批号20130722、20130725、20130728）；丹参酮提取物，由笔者所在实验室自行提取（丹参总酮含量41.7%、隐丹参酮含量3.16%、丹参酮ⅡA含量11.57%）；隐丹参酮标准品（批号：110852-200806）、丹参酮ⅡA标准品（批号：110766-200619）购自中国药品生物制品检定所。

1.2仪器与试剂

Waters2695高效液相色谱仪；GOODLOOK-1000型薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；0.22 μm微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；硅胶G板（青岛海洋化工厂）；乙酸乙酯、无水乙醇均为国产分析纯；石油醚（60～90 ℃）、甲醇、乙腈均为色谱纯。

1.3丹参酮薄层鉴定

取丹参酮灌注液40 mL，加无水乙醇40 mL，摇匀，静置12 h，乙酸乙酯反复萃取3次，收集乙酸乙酯层，减压浓缩，加入适量甲醇溶解，定容至10 mL，作为供试品溶液；另取丹参药材0.5 g，加甲醇20 mL，加热回流提取1 h，放冷过滤，滤液蒸干，残渣加热水洗至洗液无色，残渣加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液；另取隐丹参酮对照品与丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；按照薄层色谱法（中国药典2010附录Ⅵ B）试验，各吸取上述4种溶液 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（5 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（253 nm）视检。供试品色谱、对照药材色谱、对照品色谱在相应的位置上显现相同颜色的斑点。

1.4隐丹参酮及丹参酮ⅡA含量测定

1.4.1色谱条件及系统适应性条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.026%磷酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱。检测波长为270 nm，柱温为25 ℃，流速为1.2 mL/min。理论板数按隐丹参酮峰计算，应不低于20 000。

3结论与讨论

丹参酮是从植物丹参中提取出的一类脂溶性化合物[4]，

由于此类化合物水溶性差，已有多种关于提高丹参酮水溶性并进行制剂改造的研究报道，石远等制备了注射用丹参酮ⅡA包合物，该制剂通过包合技术制备出丹参酮水溶性灌注液，以提高药物吸收及生物利用度[5]。目前，研究团队已完成该制剂的制备工作，将对其进行质量控制研究。目前，很多中药新剂型及中药复方制剂都面临着成分复杂、分析难度大、标准品不足的问题。由于丹参酮类化合物标准品只有丹参酮ⅡA及隐丹参酮，本试验也只能对这2种成分进行定性鉴别及定量分析，这2种化合物均为治疗奶牛乳房炎的有效成分。本研究运用薄层色谱法定性鉴别灌注液中主要丹参酮类化合物，结果表明供试品与对照品在相同位置出现斑点，表明方法具有专一性。采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA、隐丹参酮的含量，具有回收率高、分离度好、精密度高、重现性好和阴性无干扰的特点。因此对丹参酮类化合物的定性鉴别及对丹参酮ⅡA、隐丹参酮2种化合物进行含量测定，能达到控制丹参酮灌注液质量的目的，可为其质量标准的制定提供依据。

参考文献：

[1]强喆，李晓明，梁剑平. 丹参酮包合物体外抑菌活性研究[J]. 西北农业学报，2013，22（5）：196-203.

[2]中国药典委员会. 中华人民共和国药典2010版[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]王胜义，齐志明，刘治岐，等. 黄白口服液的质量控制研究[J]. 中国畜牧兽医，2011（12）：226-231.

[4]陈向荣，陆京伯，石汉平. 丹参的药理作用研究新进展[J]. 中国医院药学杂志，2001，21（1）：44-45.

[5]石远，石惠，姜同英，等. 注射用丹参酮ⅡA包合物的制备及性质考察[J]. 沈阳药科大学学报，2008（10）：765-771.endprint

摘要：为了制定丹参酮灌注液质量标准，采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的丹参酮进行定性鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中的隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定。结果表明：TLC定性鉴别专属性强，重现性好；隐丹参酮的线性范围为3.54～17.68 μg/mL，平均回收率为96.86%，RSD值为1.14%；丹参酮ⅡA的线性范围为9.18～45.92 μg/mL，平均回收率为98.16%，RSD值为0.89%。对丹参总酮的定性鉴别、隐丹参酮及丹参酮ⅡA的含量测定可应用于丹参酮灌注液的质量控制。

关键词：丹参酮灌注液；薄层鉴别；含量测定；质量标准

中图分类号： S853.76 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0231-02

收稿日期：2013-10-07

基金项目：国家科技支撑计划（编号：2006BAD04A05-05）。

作者简介：卢超（1989—），男，四川广元人，硕士，主要从事中兽药新制剂研究。E-mail：luc19898@126.com。

通信作者：梁剑平，男，甘肃兰州人，博士，博士生导师，主要从事天然药物化学研究。Tel：（0931）2115286；E-mail：liangjianping100@sina.com。丹参酮灌注液是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所运用环糊精包合技术制备的丹参酮新制剂，是一种运用药物新技术制备出的针对奶牛乳房炎的新型中兽药。环糊精分子包合进入的成分主要为丹参酮类化合物，其中以隐丹参酮和丹参酮ⅡA的临床治疗效果最为显著确切[1]，已经有人对其体外抑菌活性进行了研究。本试验为建立该制剂质量标准，采用薄层色谱法[2]对制剂中主要丹参酮类化合物进行定性鉴别，用高效液相色谱法对隐丹参酮、丹参酮ⅡA进行含量测定，以期为制定制剂质量标准提供依据[3]。

1材料与方法

1.1试验材料

丹参酮灌注液，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所委托河北某公司生产（批号20130722、20130725、20130728）；丹参酮提取物，由笔者所在实验室自行提取（丹参总酮含量41.7%、隐丹参酮含量3.16%、丹参酮ⅡA含量11.57%）；隐丹参酮标准品（批号：110852-200806）、丹参酮ⅡA标准品（批号：110766-200619）购自中国药品生物制品检定所。

1.2仪器与试剂

Waters2695高效液相色谱仪；GOODLOOK-1000型薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；0.22 μm微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；硅胶G板（青岛海洋化工厂）；乙酸乙酯、无水乙醇均为国产分析纯；石油醚（60～90 ℃）、甲醇、乙腈均为色谱纯。

1.3丹参酮薄层鉴定

取丹参酮灌注液40 mL，加无水乙醇40 mL，摇匀，静置12 h，乙酸乙酯反复萃取3次，收集乙酸乙酯层，减压浓缩，加入适量甲醇溶解，定容至10 mL，作为供试品溶液；另取丹参药材0.5 g，加甲醇20 mL，加热回流提取1 h，放冷过滤，滤液蒸干，残渣加热水洗至洗液无色，残渣加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液；另取隐丹参酮对照品与丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；按照薄层色谱法（中国药典2010附录Ⅵ B）试验，各吸取上述4种溶液 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（5 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（253 nm）视检。供试品色谱、对照药材色谱、对照品色谱在相应的位置上显现相同颜色的斑点。

1.4隐丹参酮及丹参酮ⅡA含量测定

1.4.1色谱条件及系统适应性条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.026%磷酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱。检测波长为270 nm，柱温为25 ℃，流速为1.2 mL/min。理论板数按隐丹参酮峰计算，应不低于20 000。

3结论与讨论

丹参酮是从植物丹参中提取出的一类脂溶性化合物[4]，

由于此类化合物水溶性差，已有多种关于提高丹参酮水溶性并进行制剂改造的研究报道，石远等制备了注射用丹参酮ⅡA包合物，该制剂通过包合技术制备出丹参酮水溶性灌注液，以提高药物吸收及生物利用度[5]。目前，研究团队已完成该制剂的制备工作，将对其进行质量控制研究。目前，很多中药新剂型及中药复方制剂都面临着成分复杂、分析难度大、标准品不足的问题。由于丹参酮类化合物标准品只有丹参酮ⅡA及隐丹参酮，本试验也只能对这2种成分进行定性鉴别及定量分析，这2种化合物均为治疗奶牛乳房炎的有效成分。本研究运用薄层色谱法定性鉴别灌注液中主要丹参酮类化合物，结果表明供试品与对照品在相同位置出现斑点，表明方法具有专一性。采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA、隐丹参酮的含量，具有回收率高、分离度好、精密度高、重现性好和阴性无干扰的特点。因此对丹参酮类化合物的定性鉴别及对丹参酮ⅡA、隐丹参酮2种化合物进行含量测定，能达到控制丹参酮灌注液质量的目的，可为其质量标准的制定提供依据。

参考文献：

[1]强喆，李晓明，梁剑平. 丹参酮包合物体外抑菌活性研究[J]. 西北农业学报，2013，22（5）：196-203.

[2]中国药典委员会. 中华人民共和国药典2010版[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]王胜义，齐志明，刘治岐，等. 黄白口服液的质量控制研究[J]. 中国畜牧兽医，2011（12）：226-231.

[4]陈向荣，陆京伯，石汉平. 丹参的药理作用研究新进展[J]. 中国医院药学杂志，2001，21（1）：44-45.

[5]石远，石惠，姜同英，等. 注射用丹参酮ⅡA包合物的制备及性质考察[J]. 沈阳药科大学学报，2008（10）：765-771.endprint