高效液相色谱法测定当药中獐牙菜苦苷的含量

张卫红

(河北省石家庄市中医院药学部，河北 石家庄 050051)

制剂与质量控制

高效液相色谱法测定当药中獐牙菜苦苷的含量

张卫红

(河北省石家庄市中医院药学部，河北 石家庄 050051)

色谱法，高压液相；当药；獐牙菜苦素

当药为河北、内蒙古一带的民间草原，来源于獐牙菜属植物，主要的有效成分为獐牙菜苦苷，具有清肝利胆、清热除湿功能，并且抗炎作用强，该属植物中的多个品种都被临床广泛用于治疗急慢性黄疸型肝炎、胆囊炎等疾病[1]。现代研究表明，獐牙菜苦苷能有效的保护肝细胞，防止或减轻肝组织损伤，并促进受损细胞修复，并且还能明显抑制中枢神经系统，具有显著的镇痛和镇静作用[2-3]。本研究拟采用高效液相色谱(HPLC)法，测定当药中獐牙菜苦苷的含量，以保证当药的药品质量。

1 材 料

1.1 仪器 电子天平：德国赛多利斯BS124S型电子天平；紫外-可见分光度计：尤尼柯(上海)仪器有限公司UV-2102PCS扫描型紫外-可见分光光度计；HPLC仪：美国戴安公司DIONEX P680型。

1.2 药品及试剂 当药，购自于安国市中药材交易大厅，河北省食品药品检验院主任药师段吉平鉴定为龙胆科植物瘤毛獐牙菜的干燥全草，编号与产地分别为：1、2、3号的产地均为河北省，4、5、6号的产地均为内蒙古自治区；獐牙菜苦苷对照品，购自中国药品生物制品检定所，含量81.32%，批号：0785-200203；甲醇，Fisher色谱纯；水，蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：CAPCELL PAK-C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0 mL/min；检测波长为238 nm；柱温：25 ℃；进样量：10.0 μL。

2.2 对照品溶液的制备 取獐牙菜苦苷0.020 32 g，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为獐牙菜苦苷浓溶液。取此溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀释到刻度，混合，摇匀，得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取当药样品粉碎后通过50目药筛，混合均匀，取粉末0.2 g，精密称量，置200 mL具塞三角瓶中，加甲醇100 mL，密塞，称质量，超声处理(功率为300 W，频率为33 kHz)30 min，放冷，再称质量，用甲醇补足减失的质量，振摇，滤过，续滤液即为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 取獐牙菜苦苷浓溶液10 mL，置200 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀释到刻度，混合，摇匀，作为獐牙菜苦苷稀溶液。取此种稀溶液5.0、10.0 μL和浓溶液5.0、10.0、15.0 μL，分别注入HPLC仪，依法测定，以吸收度为纵坐标，所进对照品量为横坐标，制作工作曲线，其回归方程为y=1 135 380 X+22 638 R=0.999 9。结果獐牙菜苦苷的线性范围是0.082 60～4.958 μg。

2.5 精密度试验 吸取供试品溶液10.0 μL，连续进样6次，测定獐牙菜苦苷积分值，计算相对标准差(RSD)=0.56%，实验证明仪器精密度优良。

2.6 稳定性试验 分别吸取对照品溶液和供试品溶液10.0 μL，注入HPLC仪12次，每次间隔2 h，测定獐牙菜苦苷峰面积，计算其RSD。结果对照品RSD=0.78%，供试品RSD=0.24%，由此可知，对照品和供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取1号当药样品粉末0.16、0.2、0.24 g各3份，精密称量，参照2.3项方法制成供试品溶液，依法测定，样品的平均含量为39.40 mg/g，RSD=1.3%，重复性好。

2.8 加样回收率试验 取1号当药样品粉末9份，每份约0.2 g，每3份为1组，分别用浓度为0.030 63、0.051 04、0.071 45 mg/mL獐牙菜苦苷甲醇溶液代替甲醇溶剂，各加100 mL，密塞，称质量，超声处理(功率为300 W，频率为33 kHz)30 min，放冷，再称质量，用甲醇补足减失的质量，振摇，滤过，续滤液即为供试品溶液。依法测定，根据测定值和对照品加入量计算其回收率。结果獐牙菜苦苷的平均回收率为99.9%，RSD=1.4%，符合规定。

2.9 样品测定 取6个批次的当药样品，依法制成供试品溶液，测定峰面积，计算样品中獐牙菜苦苷的含量，结果见表1，对照品及供试品谱图见图1、2。

表1 6批样品的獐牙菜苦苷含量测定结果

獐牙菜苦苷对照品HPLC图谱

供试品HPLC图谱

3 讨 论

本研究还采用了另外3个公司的色谱柱，色谱柱型号分别为：Agilent安捷伦HC-C18液相色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、迪马Diamonsil色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、Waters Symmetry C-18液相色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，研究对分离及测定值的影响，结果3种品牌C18色谱柱柱效、分离度均符合要求，并且含量测定值无明显的区别，所以本法对C18色谱柱品牌没有特别要求。獐牙菜苦苷具有解痉、镇痛和镇静作用[4]，为当药的有效成分，用HPLC法测定当药中獐牙菜苦苷尚未见报道，本研究建立的HPLC检测方法精密度、重现性好，杂质干扰少，獐牙菜苦苷的峰纯度、峰型、分离度均比较理想，样品稳定性和回收率均较高，是一种理想的测定方法。

[1] 胡若琪，饶娴宜，卢明义，等.獐牙菜甙对实验性肝损伤大鼠血浆cAMP含量的影响[J].中药药理与临床，1989，5(4):31-32.

[2] 郭爱华.龙胆科獐牙菜属药用植物化学成分和药理作用的研究进展[J].山西中医学院学报，2005，6(1):57-59.

[3] 余放争，董光平.獐牙菜属中的药用植物及其药理和化学研究综述[J].中国民族民间医药杂志，1999，8(4):53-55.

[4] 梁钜忠，雷伟亚，刘佩.解痉止痛新药：獐牙菜苦甙[J].新药与临床，1985，4(2)：58-59.

(本文编辑：石 康)

张卫红(1963—)，女，副主任中药师，学士。从事中药房管理及中药鉴别工作。

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1002-2619(2014)05-0740-02

2013-11-14)